大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件.ppt

上传人:sccc 文档编号:6187669 上传时间:2023-10-03 格式:PPT 页数:40 大小:7.84MB
返回 下载 相关 举报
大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件.ppt_第1页
第1页 / 共40页
大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件.ppt_第2页
第2页 / 共40页
大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件.ppt_第3页
第3页 / 共40页
大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件.ppt_第4页
第4页 / 共40页
大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件.ppt_第5页
第5页 / 共40页
点击查看更多>>
资源描述

《大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化PPT课件.ppt(40页珍藏版)》请在三一办公上搜索。

1、大肠杆菌感受态细胞的制备与转化,一.实验目的 通过本实验,学习大肠杆菌感受态细胞制备和转化的原理与技术方法。,二.实验原理感受态细胞(Competent cells):受体细胞经过一些特殊方法处理后,细胞膜的通透性发生变化,成为能使许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞(competent cell)。,转化(transformation):是将异源DNA分子引入受体细胞,使其获得新的遗传性状的一种技术方法。进入细胞的DNA分子通过复制表达,才能实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。,大肠杆菌转化的方法:化学法:使用化学试剂(如CaCl2)制备的感受态细胞,通过热击处理将载体DN

2、A分子导入受体细胞;电转化法:通过高压脉冲的作用将载体DNA分子导入受体细胞。,转化子的筛选:利用导入的DNA上的选择性标记,区分转化子与非转化子。选择性标记主要有两类:营养筛选标记抗性筛选标记,三实验方法,1挑取大肠杆菌DH5单菌落,接于5mL LB液体培养基中37振荡培养过夜2以1:50比例将1ml菌液转移到新鲜LB液体培养基中,37振荡培养1.52 hr左右,使A600在0.40.5左右,3将培养液4ml转移到5ml离心管中,4,2000g离心3min4弃上清,加0.5mL用冰预冷的0.1 M CaCl2溶液,轻轻吹打或摇动混匀细胞注意:加入CaCl2动作需轻柔,勿剧烈震荡,并且尽量使细

3、胞处于低温中,5冰上放置20min,2000g离心2min 6弃上清,加0.1ml预冷的 0.1 M CaCl2溶液,轻轻吹打或摇动混匀细胞,即得感受态细胞注意:离心后观察沉淀,如果出现中间空心的沉淀说明操作正常,7将取0.1ml感受态细胞转移到1.5ml离心管中,加2l 质粒,混匀,冰上放置30min842水浴90秒,在冰上放置2min9加入 0.5 ml新鲜LB培养基,37,200rpm振荡约30min45min(注:转纯质粒可省略,转连接产物需进行)10.取 100l 涂布到含有氨苄青霉素的平板上,加X-gal/IPTG各3L 11倒置平皿,37培养1216h,每个平板大约20ml的培养基,平板培养基,用 CaCl2法制备的感受态细胞,可使每微克超螺旋质粒 DNA产生5106-2107个转化菌落。在实际工作中,每微克有105以上的转化菌落足以满足一般的克隆实验。,

展开阅读全文
相关资源
猜你喜欢
相关搜索
资源标签

当前位置:首页 > 建筑/施工/环境 > 农业报告


备案号:宁ICP备20000045号-2

经营许可证:宁B2-20210002

宁公网安备 64010402000987号