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1、兽医寄生虫疫苗研究现状与展望,南京农业大学动物医学院院长李祥瑞 教授,疫苗研究必要性,抗药虫株药物研制费用升高公共卫生和食品安全生物学技术高度发展,已商品化的兽医寄生虫疫苗,Eimeria,强毒苗 Coccivac Sehering Plough Animal Health 含8种球虫 Immucox Vetech 含4种 柔嫩、毒害、巨型、堆型,Eimeria,弱毒苗 鸡胚传代致弱：始于英国、美国。现在很少用 理化致弱：加热、冷冻、辐射处理、化学诱导等 早熟株选育:Paracox Sehering Plough Animal Health 含7种主要球虫 Livecox Biopharm(C
2、zech Repulic)含鸡胚致弱柔嫩株和堆型、巨型早熟株,Eimeria,Eimeria,配子抗原亚单位苗(Wallach,1995)Eimeria maxima 母源免疫,Toxoplasma gondii,Toxovax Intervet 用于羊 致弱苗 生活史不完整 不形成组织包囊 减少流产,Neospora caninum,灭活速殖子 牛 减少流产,Babesia,Babesia canis 体外培养上清中抗原 犬 减低发病,Babesia,Babesia bovis/bigemina 传代致弱苗 牛 本地工厂化生产应用,Theileria,Theileria annulata 体
3、外培养致弱 牛 本地工厂化生产应用,Theileria,Theileria parva 非致弱苗 牛 本地工厂化生产应用,Giardia,Giardia duodenalis(Giardia felis)GiardiaVax Fort Dodge 速殖子 犬、猫 减少包囊排出、预防临床症状 美国商品化,Taenia,Taenia ovis 基因工程疫苗 45W-GST(45W)（Johnson，1989）绵羊带绦虫的六钩蚴抗原 E.coli中的表达产物。可以保护绵羊不受绵羊囊尾蚴的感染 实验感染保护率达94%The University of Melbourne Pitman Moore Ne
4、w Zealand Ltd.New Zealand Ministry of Agriculture and Fisheries 第一个成功有效的抗寄生虫基因工程疫苗,Echinococcus,Echinococcus granulosus 抗细粒棘球蚴基因工程疫苗 EG95(Lightowlers 1996)六钩蚴抗原，天然抗原分子量为24.5kDa cDNA表达产物为153个氨基酸 分子量16.5kDa 表达系统E.coli 产物为谷胱甘肽转硫酶(GST)融合蛋白,Echinococcus,EG95预防棘球蚴感染免疫试验结果,Dictyocaulus,Dictyocaulus vivparu
5、s(牛胎生网尾线虫）Huskvac Intervet Dictol Schering Plough Animal Health 辐射致弱三期幼虫 牛 仅在欧洲使用,辐照幼虫疫苗一次免疫所需剂量,Dictyocaulus,Boophilus,Boophilus microplus 基因工程苗 Bm86 TickGardTM;TickGard PlusTM Biotech Australia E.coli 表达产物 GavacT Heber Biotec S.A.,Havana,Cuba 酵母表达产物 重组蜱肠上皮抗原 仅在澳大利亚古巴中南美国家用 牛,Boophilus,疫苗诱导的抗体破坏蜱肠上
6、皮细胞，使之裂解，进而影响蜱的采食。但不对蜱产生立刻影响 蜱的出没可以减少20-0%蜱的不同代之间数目可以减少70-90%主要益处是产生生态效益，减少抗蜱化学药物的使用。但随着蜱的适应和变异，疫苗的效果可能会下降。需要不断改进,Hypoderma,Hypoderma lineatum 纹皮蝇 一种抗纹皮蝇幼虫蛋白酶的基因工程疫苗 已经在加拿大获得了证书,兽医寄生虫疫苗的获得手段,通过特殊动物传代或在体外培养 使毒力降低，如牛巴贝斯致弱苗就是通过在切除脾脏牛体内反复传代获得筛选缺少某一生活阶段的虫株 如刚地弓形虫S48株就不能形成包囊筛选生活周期缩短的的虫株 如早熟艾美尔球虫苗辐射致弱,兽医寄生
7、虫疫苗存在的问题,安全性问题 目前的寄生虫疫苗主要为活苗，虽然可以产生一定的免疫保护，但毕竟是活的虫体，在特定的情况下，仍有致病的可能免疫保护效果 有些寄生虫可以感染多重动物，其疫苗往往对某种动物保护效果较好，对另种动物效果较差，或者对不同年龄的动物保护效果不一致经济效益 尽管有些疫苗免疫保护性好，但生产成本高、免疫方法复杂、与抗寄生虫药的广谱性相比具有较窄的保护范围均限制了疫苗在生产中的应用,兽医寄生虫疫苗展望DNA疫苗,一 DNA疫苗的概念 DNA疫苗（DNA vaccine）核酸疫苗（nucleic acid vaccine）裸DNA疫苗（naked DNA vaccine）DNA免疫（
8、DNA immunization）核酸免疫（Nucleic acid immunization）基因免疫（gene immunization）遗传免疫（genetic immunization,兽医寄生虫疫苗展望DNA疫苗,将含有编码外源蛋白基因的质粒DNA，直接导入动物组织，外源基因在体细胞中表达后，表达产物被递呈，与MHC分子结合，刺激机体产生相应的抗体和细胞毒性T淋巴细胞，分别介导体液免疫和细胞免疫应答。这种外源基因是抗原的来源，具有疫苗的功能,兽医寄生虫疫苗展望DNA疫苗,二 DNA疫苗的优点 1 诱导平衡的体液免疫和细胞免疫 2 可以构建多价疫苗 3 免疫时间长 4 成本低、稳定、便
9、于储存和运输 5 安全 6 对免疫功能低下者效果较好 7 可以激发特定的Th1或Th2免疫应答,兽医寄生虫疫苗展望DNA疫苗,兽医寄生虫疫苗展望DNA疫苗,寄生虫方面的探索 日本分体吸虫 绦虫 疟原虫 利什曼原虫 隐孢子虫 弓形虫 锥虫 球虫 贾第虫疟疾DNA疫苗已获准生产,兽医寄生虫疫苗展望 细胞因子佐剂,细胞因子 细胞因子是机体免疫细胞或非免疫细胞产生的一组具有广泛生物学活性的异质性肽类调节因子，在体内能激活和调节免疫活性细胞，对免疫应答的产生和调节具有重要作用,兽医寄生虫疫苗展望 细胞因子佐剂,细胞因子佐剂 IL-2 IL-12 IL-18 GM-CSF IFN-,兽医寄生虫疫苗展望 细
10、胞因子佐剂,细胞因子使用方式 重组蛋白 单独构建DNA疫苗 与抗原基因串联构建DNA疫苗,兽医寄生虫疫苗展望 特异性抗体亚型刺激性抗原,特异性抗体亚型刺激性抗原 在一些寄生虫病中，起主要保护性作用的往往是某一亚型的抗体，因此，通过筛选能够刺激这一亚型抗体的抗原，可以研究高效的疫苗疟疾 抗感染作用以IgG1和IgG3型抗体及其介导的细胞免疫为主，通过体外培养从疟疾病人分离的B淋巴细胞，筛选能够刺激产生特异性亚型抗体（IgG1、IgG3）的蛋白分子作为疫苗侯选抗原，对研究抗疟原虫疫苗具有重要意义,兽医寄生虫疫苗展望 T细胞刺激性抗原,T细胞刺激性抗原 能够刺激T细胞增值或活化T细胞的抗原 Bree
11、d等以抗原对T细胞的激发能力为标准来筛选鸡球虫抗原，取得了良好的效果,兽医寄生虫疫苗展望 T细胞刺激性抗原,兽医寄生虫疫苗展望 T细胞刺激性抗原,兽医寄生虫疫苗展望 T细胞刺激性抗原,抗原粗提液、3.0蛋白、3.2蛋白免疫保护试验。A.盲肠病变计分指标；B.增重指标。,兽医寄生虫疫苗展望 多克隆活化因子,寄生虫感染后，往往能够活化或抑制某一类型的免疫细胞。这些由寄生虫分泌的物质称作多克隆活化因子对能够活化机体免疫系统的寄生虫分子进行分离和鉴定，对筛选有效的寄生虫疫苗抗原，具有重要意义,兽医寄生虫疫苗展望 表达文库免疫,兽医寄生虫疫苗展望 表达文库免疫,表达文库免疫的应用 筛选保护性抗原 筛选体液免疫抗原 筛选细胞免疫抗原 筛选免疫抑制分子,Thanks!,
