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1、知识点一 目的基因的获取,1.获取目的基因是实施基因工程的第一步。目的基因的获取方法主要有两种：从自然界中已有的物种中分离出来 用人工的方法合成。2.基因文库将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，成为基因文库。基因文库根据其大小可分为基因组文库和部分基因文库。受体细胞是指接受目的基因的细胞，即表达载体导入的细胞。基因工程常用的受体有细菌、真菌、动植物细胞 3.PCR技术扩增目的基因原理：DNA复制做法：已知一段目的基因的核苷酸序列据已知序列合成引物DNA扩增结果：扩增出许多结构相同的目的基因。,知识点二 基因表达载体的构建,基因
2、表达载体的构建是基因工程的核心。其中心内容是使目的基因与运载体结合，形成重组运载体，最后通过重组运载体将目的基因导入受体细胞。,注意：在学习时应注意以下几点,1.构建表达载体的目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。2.基因表达载体的组成：目的基因、启动子、终止子、标记基因3.所选运载体应具备的条件：（1）载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。（2）载体DNA必需具备自我复制的能力，或整合
3、到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。（3）载体DNA必需带有标记基因，以便重组后进行重组子的筛选。（4）载体DNA必需是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。（5）载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。,知识点三 将目的基因导入受体细胞,1）转化目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化。（2）基因工程中常用的受体细胞有：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤脓杆菌、酵母菌和动植物细胞（3）将目的基因导入受体细
4、胞的方法：根据受体和运载体的类型不同，所采用的导入方法也不同。目前常用的方法有：将目的基因导入植物细胞农杆菌转化法，还有基因枪法和花粉管通道法。将目的基因导入动物细胞显微注射技术将目的基因导入微生物细胞Ca处理细胞法,知识点四 目的基因的监测与鉴定,1）检测对象：检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因 检测目的基因是否转录出了mRNA 检测目的基因是否翻译成蛋白质（2）检测方法：分子检测法和都是DNA分子杂交技术，抗原抗体杂交法 形态检测法可根据目标性状的有无来判断目的基因是否表达,知识点五基因工程诞生的理论基础,1基因拼接的理论基础(1)DNA是生物的主要遗传物质。(2)DNA的基
5、本组成单位都是四种脱氧核苷酸。(3)双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构。2外源基因在受体内表达的理论基础(1)基因是控制生物性状的独立遗传单位。(2)遗传信息的传递都遵循中心法则阐述的信息流动方向。(3)生物界共用一套遗传密码。,知识点六PCR扩增技术,PCR扩增是获取目的基因的一种非常有用的方法，也是进行分子鉴定和检测的一种很灵敏的方法。PCR的扩增反应过程包括以下几个主要过程。第一步：将反应体系（包括双链模板、引物、耐高温的DNA聚合酶、四种脱氧核糖核苷酸以及酶促反应所需的离子等）加热至9095，使双链DNA模板两条链之间的氢键打开，变成单链DNA，作为互补链聚合反应的模板。第二
6、步：将反应体系降温至5560，使两种引物分别与模板DNA链3端的互补序列互补配对，这个过程称为复性。第三步：将反应体系升温至7075，在耐高温的DNA聚合酶催化作用下，将与模板互补的单个核苷酸加到引物所提供的3-OH上，使DNA链延伸，产生一条与模板链互补的DNA链。上述三步反应完成后，一个DNA分子就变成了两个DNA分子，随着重复次数的增多，DNA分子就以2n的形式增加。PCR的反应过程都是在PCR扩增仪中完成的。,知识点七启动子与终止子,启动子终止子 位置：位于基因尾端 结构：特殊DNA片段 作用：终止基因的转录,位置：位于基因首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位。结构：特殊DNA片段 作用：启动基因的转录,
