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1、第五章 黄酮类化合物,（Flavonoids）,一、基本结构与分类,（一）黄酮类化合物的基本结构,色原酮,2-苯基色原酮,第一节 概 述,黄酮类化合物是泛指两个具有酚羟基的苯环（A-与B-环）通过中央三碳原子相互连接而成的一系列化合物。,定义:,（二）黄酮类化合物的分类,中央三碳链的氧化程度,B-环联接位置（2-或3-位）,三碳链是否构成环状,分为以下几种类型：,根据其：,1黄酮类（flavones）,以2-苯基色原酮为基本母核，C3无含氧取代基。,黄芩苷,2黄酮醇类（flavonol）,槲皮素R=H,芦丁 R=芸香糖基,以2-苯基色原酮为基本母核，C3有含氧取代基。,3二氢黄酮类（flava
2、nones）,二氢黄酮,橙皮苷,4二氢黄酮醇类（flavanonols）,二氢槲皮素,二氢黄酮醇,5异黄酮类（isoflavones）,其B环连接在C3位上。,6查耳酮类（chalcones）,两苯环之间的三碳链为开链结构,查耳酮,红花苷,7花色素类,又称花青素，是一类水溶性色素，多以苷的形式存在。,矢车菊素,花色素,8黄烷-3-醇类,又称儿茶素类化合物,（）儿茶素,黄烷醇,9橙酮类,橙酮,硫磺菊素,（三)组成黄酮苷的糖类,单糖类：D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-葡萄糖醛酸等。,酰化糖类：2-乙酸葡萄糖等。,三糖类：龙胆三糖、槐三糖等。,双糖类：槐糖、芸香糖、龙
3、胆二糖等。,二、黄酮类化合物的生物活性（自学）,（一）对心血管系统的作用,（二）抗肝脏毒作用,（三）抗炎作用,（四）雌性激素样作用,（五）抗菌及抗病毒作用,（六）泻下作用,（七）解痉作用,第二节 黄酮类的理化性质及显色反应,一、性 状,多为结晶性固体，少数苷为无定形粉末。,2旋光性,游离的苷元中二氢黄酮（醇）、黄烷(醇)（），其余则无光学活性。,1晶形,苷类（），且多为左旋。,3颜色,黄酮、黄酮醇及其苷类灰黄黄色,查耳酮黄橙黄色，,二氢黄酮、二氢黄酮醇不显色,异黄酮显微黄色,黄酮（醇）分子中，尤其在 7-位及 4-位引入-OH及-OCH3等助色团后，而使化合物的颜色加深。,花色素及其苷元的颜色
4、随pH不同而改变,一般显红（pH 7）,紫（pH8.5）,蓝（pH8.5）等颜色,二、溶 解 性,1苷与苷元,游离苷元：,苷类：,2苷元,黄酮、黄酮醇、查耳酮等更难溶于水,平面性强的分子，因分子与分子间排列紧密，分子间引力较大。,二氢黄酮及二氢黄酮醇等溶解度稍大,因系非平面性分子，故分子与分子间排列不紧密，分子间引力降低，有利于水分子进入，溶解度稍大。,R=H，二氢黄酮R=OH，二氢黄酮醇,花色苷元（花青素）类水溶度较大,虽也为平面性结构，但因以离子形式存在，具有盐的通性，故亲水性较强。,花青素,3苷类,苷元相同时，羟基糖越多，糖分子越多，水溶度越大。,同一苷元，3-O-葡萄糖苷的水溶度7-O
5、-葡萄糖苷,三、酸性与碱性,（一）酸性,黄酮酚羟基酸性强弱顺序依次为：,7,4-二OH7-或4-OH一般酚羟基5-OH,应用:用于提取、分离及鉴定工作,（二）碱性强酸下形成洋盐,-吡喃环上的1-氧原子，因有未共用 的电子对，故表现微弱的碱性，可与强无机酸生成盐，但生成的盐极不稳定，加水 后即可分解。,四、呈色反应,（一）还原试验鉴别,1盐酸-镁粉（或锌粉）反应,黄酮（醇）橙红紫红色二氢黄酮（醇）,查耳酮、橙酮、儿茶素（-）,异黄酮类除少数例外，也不显色,操作：样品/乙醇中加入少许镁粉振摇，滴加 几滴浓HCl，即可显色。,排除干扰：先作空白对照实验,Mg粉,2四氢硼钠反应,区别二氢黄酮类,上述四
6、种黄酮,HCl,无色,红色,（二）金属盐类试剂的络合反应,C3-OH，C5-OH，邻二OH（+）,络合应具备的条件,结果：颜色，沉淀,用途：鉴定，结构测定，提取分离,1.铝盐,1AlCl3溶液，络合物多为黄色，为显色剂和比色测定。,2.铅盐,常用1醋酸铅及碱式醋酸铅水溶液，可生成沉淀。,应用：鉴定、提取及分离工作。,3ZrOCl2（锆盐）,5-OH黄酮类3-OH,2%枸橼酸,黄（3-OH黄酮）褪色（5-OH黄酮）,2%ZrOCl2,黄,甲醇,3-OH，4-酮基络合物稳定性5OH，4-酮基络合物,原因：,4镁盐,鉴别两类二氢黄酮,黄酮、黄酮醇及异黄酮 显黄色橙黄色褐色,5.氯化锶（SrCl2）,
7、鉴别邻二OH,具邻二酚OH黄酮类/氨性甲醇,绿色棕色乃至黑色,（三）硼酸显色反应,具5OH 的黄酮 2OH查耳酮,硼酸,（四）碱性试剂显色反应,在日光及紫外光下，通过纸斑反应，观察样品用碱性试剂处理后的颜色变化情况，对于鉴别黄酮类化合物有一定意义。,亮黄色,酸性液,第三节 黄酮类化合物的提取与分离,一、提 取,存在形式：,花、叶、果等组织中苷木部坚硬组织中游离苷元,选择溶剂：,黄酮苷，极性稍大的苷元,丙酮、醋酸乙酯、乙醇、水、甲醇-水（1：1）、甲醇,花青素类可加少量酸（如 0.l盐酸）,黄酮苷元宜用极性较小的溶剂（氯仿、乙醚、醋酸乙酯）等提取,多糖苷类沸水提取,对得到的粗提取物可进行精制处理
8、，常用的方法有：,（一）溶剂萃取法,1醇浸液、去脂杂加p.e,水提取去水杂加多倍量高度醇,（二）碱提取酸沉淀法,适合酸性成分具有Ar-OH的黄酮,药材,碱水液,H+,OH-,沉淀（黄酮苷，苷元）,水（水杂，M+）,（三）炭粉吸附法适于苷类的精制,甲醇粗提液,活性炭,黄酮活性炭,沸水,沸甲醇,7酚/水,15%酚/醇,（四）树脂吸附提取法 适于苷类的精制,二、分 离,分离黄酮的依据：,（1）极性大小不同吸附层析,（2）分配比不同分配层析,（3）酸性不同pH梯度萃取法,（4）MW大小不同葡聚糖凝胶分子筛 或膜技术,（5）官能团络合，沉淀等,（一）柱色谱法,1硅胶柱色谱,适于分离异黄酮、二氢黄酮（醇）
9、及高度甲基化（或乙醚化）的黄酮（醇）类,常用的分离方法有柱层析法、萃取法、铅盐法、HPLC法、薄层层析法等。,常用的吸附剂或载体有硅胶、聚酰胺及纤维素粉等。也有用氧化铝、氧化镁及硅藻土等。,（1）分离对象：酚、醌、硝基化合物,2聚酰胺柱色谱,（2）原 理：氢键吸附,（3）影响因素：,黄酮类分子中羟基的数目与位置,溶剂与黄酮类溶剂与聚酰胺,之间形成氢键缔合能力的大小,（4）洗脱规律（先后顺序）,叁糖苷双糖苷单糖苷苷元,苷元相同：,-OH位置：,C=O 邻位-OH黄酮C=O对位（或间位）-OH黄酮,-OH多少：酚羟基少羟基多,黄酮类型：,异黄酮二氢黄酮醇黄酮黄酮醇,芳香程度：,芳香程度高，共轭双键
10、多吸附力 芳香程度高，共轭双键少,二氢黄酮查耳酮,溶剂影响：,聚酰胺的双重色谱性,以含水移动相（如甲醇一水）作洗脱剂，苷比苷元先洗下来。,以有机溶剂作洗脱剂（如氯仿一甲醇）苷元比苷先洗脱下来。,3葡聚糖凝胶柱色谱,分离黄酮类化合物的机理：双重性,分离黄酮苷元靠吸附作用羟基少，极性小，吸附力弱，先被洗脱。,分离黄酮苷时分子筛性质起主导作用糖数量多，分子量大，分子筛时，先洗脱下来。,（二）梯度pH萃取法,酸性不同的黄酮苷元的分离,酸性：7,4-OH7-或 4-OH 一般Ar-OH 5-OH,5%NaHCO3 5%Na2CO2 0.2%NaOH 4%NaOH,（三）根据分子中某些特定官能团进 行分离
11、,H3BO3络合反应（邻二酚羟基）2.Pb(Ac)2沉淀反应（邻二酚羟基）3.碱性醋酸铅（不具邻二酚羟基黄酮）注意脱铅,第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定,测定一般步骤：,（1）化学反应,（2）PC、TLC,（3）UV光谱,（4）1H-NMR,（5）MS,（6）13C-NMR,一 化学反应确定化合物的类别,二、色谱法在黄酮类鉴定中的应用 确定黄酮的种类与数量,（一）纸色谱（PPC）,分离黄酮类化合物及其苷的混合物,1原理,分配色谱,2溶剂选择：,黄酮苷元酸性醇溶剂花色苷元酸性水溶剂 HCl或HOAc苷类双向展开,第一向展开剂：采用醇性溶剂,第二向展开剂：采用水或水溶液,如：n-BuOH-HO
12、Ac-H2O(4:1:5 上层）,如：2%6%HOAc 等,3在不同展开剂中，苷、苷元的Rf值不同,醇性溶剂：Rf 苷元 单糖苷 双糖苷,水溶剂：Rf 三糖苷 双糖苷苷元,(二)硅胶薄层色谱：(不用Al2O3）,分离与鉴定弱极性黄酮类,（三）聚酰胺薄层色谱,分离含游离酚羟基的黄酮及其苷类,三、紫外及可见光谱在黄酮类鉴定中 的应用,紫外及可见光谱一般程序：,1测定样品在甲醇中的UV光谱2测定甲醇+诊断试剂后的UV光谱3苷类水解，或甲基化后水解 测苷元或衍生物的UV光谱,（一）黄酮类化合物在甲醇溶液中 的UV光谱特征,1两个谱带、与结构的关系,2各种类型黄酮的UV光谱特点,（1）黄酮及黄酮醇类,木
13、犀草素(黄酮类)槲皮素(黄酮醇类),（A）黄酮及黄酮醇类UV光谱（甲醇）,(二)加入诊断试剂后引起的位移及其 在结构测定中的意义,诊断试剂：,因黄酮中具有酚羟基、羰基，加入某些试剂，使其化学结构变化，吸收峰位改变，这些试剂称为诊断试剂。,测定顺序,1样品/CH3OH,测定黄酮类型,2加诊断试剂,CH3OH+NaOCH3,确定4-OH，3-OH,CH3OH+NaOAC,确定7-OH,t,对碱敏感的结构,CH3OH+NaOAC+H3BO3,邻二OH,AlCl3/HCl与CH3OH,C3-OH、C5-OH,AlCl3-AlCl3/HCl,邻二OH,3苷类水解后测定苷元的UV光谱，与苷比较,四、氢核磁
14、共振在黄酮类结构分析 中的应用,（一）测试溶剂的选择及样品处理,1.氘代氯仿 适合苷元、苷OCH3,2.氘代二甲基亚砜（DMSO-d6）苷,3.四氯化碳三甲基硅醚化的苷，苷元,Ar-OH,吡啶,无水甲醇,苷元中,使苷，苷元,极性小,溶于CCl4,优点：,可溶于CCl4中，bp低,无干扰信号,测试后用甲醇水解，回收样品等,（二）影响黄酮类化合物氢质子化学 位移的因素,例：芹菜中的芹菜素,芹菜素,1.电效应,（1）诱导效应（C=O),A环C5,C7 B环 2,6,4+,A环C6,C8 B环 3,5-,B环 H2,6 H3,5,（2）共轭效应,-OH的影响,B环 H2,6 H3,5,A环 H8 H6
15、,上述诱导效应与共轭效应结果使得：,H2,6 H3,5,H8 H6,B环：苯丙酰系统，诱导效应 起主导作用,A环：苯甲酰系统，共轭效应起主导作用,苯甲酰与苯丙酰共轭体系的比较,2.磁效应,C3H,C5H:受C=O的负屏蔽效应影响,C3H：磁效应与电效应不一致,C5H：磁效应与电效应一致,H5 H3,（三）黄酮类化合物H的和J值规律,1A环质子,（1）5，7-二羟基取代,H-8 6.306.50（1H d J=2.5Hz）,H-6 6.006.20（1H d J=2.5Hz）,（2）7-羟基取代,H-5 7.908.20（1H d J=9.0Hz）,H-6 6.707.10（1H dd J=2.
16、5Hz J=9.0Hz）,H-8 6.707.00（1H d J=2.5Hz）,B环质子,（1）4-O-R取代,H-2，H-6 7.708.10（2H d J=8.5Hz）,H-3，H-5 6.507.10（2H d J=8.5Hz）,（2）3，4-O-R取代,H-5 6.707.10（1H d J=8.5Hz）,H-2 7.207.90（1H d J=2.5Hz）,H-6 7.207.90（1H dd J=2.5Hz J=8.5Hz）,C环质子,黄酮类,H-3 6.30（s）,（四）糖上的质子,H-1 4.006.00（d）,-D-glcH1H2 60o J H1H2=23Hz,-D-glc H1H2 180o J H1H2=8Hz,5-OCH3上的质子,3.504.10,6-COCH3上的质子,脂肪族 l.652.10芳香族 2.302.50,H-2”H-6”4.006.00（m）,四、质谱在黄酮类结构分析中的应用,多数苷元：,峰较强，为基峰，无须作成衍生物,EI-MS中,多数苷：,极性强，难气化，多作成甲基化或三甲基硅醚化衍生物，而获得,或不作成衍生物，也可用FD-MS，FAB-MS等质谱技术，获得非常强的,黄酮类化合物苷元的EI-MS,2个裂解途径：,途径-,+,222,120,102,途径-,222,偶数质量，偶数电子 78,1.黄酮类基本裂解途径,黄酮类基本裂解途径,
