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1、实验4、测定细菌生长曲线,一、实验目的,1.了解细菌生长曲线的特征，认识微生物在一定条件下生长繁殖的规律。2.掌握用细菌悬液的浑浊度间接测定细菌生长的方法。3.学习液体培养基的配制及接种方法。,二、实验内容,测定大肠杆菌、枯草杆菌的生长曲线,将一定量的细菌接种在液体培养基内，一定条件下培养，细菌的生长繁殖具有一定的规律性。以细菌活菌数的对数作纵坐标，培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线。,三、实验原理,细菌的生长曲线分为：迟缓期、对数期、稳定期和衰退期。其表示细菌从开始生长到死亡全过程的动态。测定微生物的生长曲线对于了解和把握生物的生长规律是很有帮助的。,测定微生物生长曲线的方法有血
2、球计数法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。比浊法：由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比。故可用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测的光密度值（OD）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线（注意：由于光密度表示的是培养液的总数，包括活菌与死菌所测的生长曲线衰亡期不明显）。,微生物的典型生长曲线图.延滞期，.指数期，.稳定期，.衰亡期,四、实验仪器、材料和用具,仪器：摇床、分光光度计、取液器。微生物材料 大肠杆菌菌液、枯草杆菌菌液培养基 肉汤蛋白胨液体培养基用具 玻璃比色皿，三角瓶，酒精灯，接种环。,五、准备步骤,准备菌种：将大肠杆菌和枯草杆菌分别接到于肉汤蛋白胨
3、液体培养基中，37振荡培养14-18h。另准备大肠杆菌和枯草杆菌斜面种子各1支。接种：分别取5ml大肠杆菌或枯草杆菌液接种到装有100ml培养液的三角瓶中，放摇床37，200rmp振荡培养。同时分别从大肠杆菌或枯草杆菌斜面取菌接种于100ml培养液中，同样条件培养。,测定（OD）,每小时吸取200ul培养液到2800ul蒸馏水中摇匀，以蒸馏水为对照，选420nm波长进行光密度（OD值）的测定（注意应测定0h的光密度值）。,每台分光光度计固定在1个参比杯，每人只能在同一台分光光度计上测量（注意波长调好后，不要动波长旋钮）。,1）绘制大肠杆菌和枯草杆菌在两种接种方法下的生长曲线。（标出生长曲线中四个时期的位置和名称）2）为什么用比浊法测定的细菌生长只是表示细菌的相对生长状况？3）生长曲线中为什么会出现稳定期和衰退期？在生产实践中怎样缩短延迟期？怎样延长对数期及稳定期？怎样控制衰退期？4）接种时种子在什么条件下为宜，液体种子比斜面种子为什么优越？,六、结果与讨论,
