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1、实 验 5,细菌培养法,目的要求,1、学习和掌握细菌分离与培养的各种基本技术；2、进一步熟悉和掌握无菌操作技术。,实验材料,标本和菌种：大肠杆菌培养物、葡萄球菌培养物、变形杆菌培养物、枯草杆菌培养物；实验器材：接种环、接种针、酒精灯；培养基：普通琼脂平板、试管斜面、液体培养基、半固体培养基；,常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、玻璃涂棒等（见图6）。,图6,接种工具,细菌接种的基本程序,灭菌接种环,沾取标本,接种,灭菌接种环,杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本,杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境,（一）细菌的分离方法,培养基：固体平板培养基分离方法：划线分离法意义：该法主要
2、是借助划线而将混杂的细菌在琼脂表面分散开，使单个细菌能固定在某一点，生长繁殖后形成单个菌落，以达到分离纯种的目的。,细菌的分离培养方法,微生物的分离平板划线法,1.分区划线法：2.连续划线法：,微生物的分离平板划线法,分区划线法,第一区划线,灭菌接种环,第二区划线,灭菌接种环,第三区划线,灭菌接种环,连续划线法,（二）细菌的接种法,当细菌分离成纯种后，常需要接种到相关的培养基中，以测试其各种生物学性状。一般可用斜面、半固体、液体培养基来检验细菌的培养特性，相应培养基的接种方法有三种。,斜面接种法,培养基：斜面固体培养基；接种方法：斜面培养基接种法；用途：扩增细菌、保存菌种；或用于观察其某些生化
3、特性。,琼脂斜面培养基接种法,穿刺接种,半固体培养基：接种方法：穿刺接种法。用接种针垂直地穿入培养基中心至底部然后沿着原接种线将针拔出用途：检验细菌的运动性或观察细菌的生化反应。,液体培养基接种法,培养基：液体培养基接种方法：液体接种法从斜面菌种接入液体培养液从液体培养液接入液体培养液用途：扩增细菌，用于观察细菌的生长特性或测定其生化特性。,细菌培养法,一般培养（需氧培养）：培养温度：37（采用恒温培养箱）培养时间：1824h二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养箱厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等,细菌在固体培养基中的生长现象,菌落：定义：指单个细菌在平板培养基
4、上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。,菌 落,菌落与菌苔,细菌在液体培养基中的生长现象,混浊：多见于兼性厌氧菌沉淀：多见于厌氧菌菌膜：多见于专性需氧菌,液体培养基的细菌生长,细菌在半固体培养基中的生长现象,有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。,穿刺接种生长现象,结果观察时间安排,液体、斜面、半固体、固体平板每人各一个。保证每组把每种细菌都接上。明天观察，记录结果；完成实验报告。,
