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1、实验三、环境因素对微生物的影响,一、实验目的,1.了解温度对微生物生长的影响；2.了解抗生素（青霉素、氨苄青霉素等）的抗菌范围，学习抗菌谱试验的基本方法。3.了解消毒剂（碘酒或酒精）对微生物分布的影响。4.了解紫外线杀菌对微生物的作用特点,二、实验原理,1.温度:影响微生物生长与存活的最重要因素。自然界的微生物可根据对温度的适应性分为低温型、中温型和高温型。但不管哪一种温度型的微生物，都有生长温度范围。分为最高、最适和最低生长温度。在最适宜温度里生长良好：超过最高温度细胞死亡；低于最低温度细胞被抑制或死亡。,2.抗生素对微生物生长的影响：抗生素是某些微生物在生长代谢过程中产生的能抑制或杀死其它
2、微生物的次生代谢产物。每种抗生素都有它固定的抗菌范围和抗菌谱。例如青霉素只对革兰氏阳性菌具有抗菌作用；多粘菌素只对革兰氏阴性菌有作用，这类抗生素称为窄谱抗生素；另一些抗生素对多种细菌具有作用，例如四环素、土霉素对许多革兰氏阳性菌和阴性菌都有作用称为广谱抗生素。,二、实验原理,比如氨苄青霉素，对革兰氏阳性球菌、变形杆菌、沙门氏菌、痢疾杆菌、产气荚膜杆菌、大肠杆菌及流感杆菌等都有很好的抗菌效果。,二、实验原理,3.化学消毒剂对微生物分布的影响 人体皮肤分布着一定种类与数量的微生物。使用化学消毒剂对皮肤进行表面消毒是医院里进行无菌操作常用的方法之一。,二、实验原理,4.紫外线的杀菌作用 波长为200
3、-300nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌能力最强。其杀菌机理是抑制DNA复制，以及产生臭氧和H2O2 而产生一定的杀菌作用。但紫外线穿透力弱，一般适用于表面消毒和空气消毒。,二、实验原理,三、实验材料,1、菌种：大肠杆菌、白色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等。2、药敏片:青霉素、庆大霉素、环丙沙星、菌必治,四、实验步骤,1.温度对微生物生长的影响（每组）（1）菌种：大肠杆菌(白葡)、枯草芽孢杆菌。（2）培养基：取肉汤培养基（液体培养基）5支。（3）接种：分别接种大肠杆菌(白葡)和枯草芽孢杆菌各2支试管，余下1支不接种作阴性对照。（4）加热：取接种的大肠杆菌(白葡)和枯草芽孢杆菌培养基各
4、1支，于100作用15min后取出，冷水冲凉。5支试管放入37温箱培养。（5）观察：培养24h后观察现象，并记录。,2.抗生素对微生物生长的影响（1）菌种：大肠杆菌（G）、白色葡萄球菌或金黄色葡萄球菌（G）。（2）接菌 用接种环刮取一环菌体，轻放在平板上；将无菌的棉签在无菌水(液体培养基)中润湿；用湿润的无菌棉签将平板上的菌体均匀涂布。（2种不同的菌各做1个平板。）,四、实验步骤,（3）放置药敏片：用无菌镊子取4种不同的抗生素药敏片各1个，贴在平板上（每个平板放4个），轻轻压一下，倒置。注意：在贴滤纸条时不要在培养基上拖动滤纸片，避免抗生素溶液在培养基中扩散时分布不均匀。（4）培养：平板于37
5、培养24h后观察、记录实验现象。,四、实验步骤,3.化学消毒剂对微生物分布的影响（1）分区:将1个营养琼脂平板分为4个区域；（2人1个平板，每人2个区）（2）接种：2名同学直接用手指在平板的2个区域划之字形，待用碘酒/酒精棉球消毒后，稍候片刻，再在另外2个区域划之字形；（3）培养：平板于37培养24h后观察、记录实验现象。,四、实验步骤,4.紫外线的消毒作用（穿透作用）（1）菌种：大肠杆菌、白色葡萄球菌（2）接菌：用接种环刮取一环菌体，轻放在平板上；将无菌的棉签在无菌水(液体培养基)中润湿；用湿润的无菌棉签将平板上的菌体均匀涂布。【可做1种菌，也可做2种（中间划线）】。,四、实验步骤,4.紫外线的消毒作用（穿透作用）（4）照射：用平皿盖半遮盖平板，置于紫外灯照射15min。（5）培养：盖上平皿盖，于37培养24h后观察实验现象。,四、实验步骤,思考题,如果药敏实验的抑菌带隔一段时间后又长出少许菌落，你如何解释这种现象？,要 求上交实验报告，写清楚实验现象，并解释实验结果。,
