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1、实验三 细菌染色及形态观察,1.1 掌握革兰氏染色和芽胞染色的原理和方法。1.2 巩固无菌操作技术。1.3 掌握显微镜油镜使用的方法。1.4 初步掌握微生物学绘图方法。,1 实验目的,2.1 观察微生物细胞时，为什么要对微生物进行染色?革兰氏染色与细菌细胞壁的结构与成分有什么关系？芽胞染色的机理是什么？2.2 显微镜油镜为什么能增加照明亮度?，为什么能增加分辨率？,2 实验原理(通过了解下列问题来掌握实验原理),革兰氏染色法,芽胞染色法,3 材料与方法,3.1.1 药品：革兰氏染色液：草酸铵结晶紫染液、革兰氏碘液、95%乙醇、番红染液，无菌生理盐水。芽胞染色液：孔雀绿染色液，番红染色液3.1.
2、2 菌种：Escherichia coli（大肠杆菌）、Staphylococcus aureus（金黄色葡萄球菌）培养18-24 h菌落平板，Bacillus thuringiensis（苏云金芽孢杆菌）培养24 h菌落平板。3.1.3 仪器：显微镜（MODEL E100）3.1.4 其它物品：载玻片，镜油，二甲苯，擦镜纸，接种环，酒精灯等。,3.1 实验器材,3.2 方法 A.革兰氏染色法,3.2.1 制片。涂片:取一洁净载片，用记号笔从中分成两个区域，在两区中央各滴一小滴生理盐水，按无菌操作要求用接种环取平板菌落边缘的菌体少许，置于生理盐水中涂抹成约1.5 cm均匀薄膜；干燥:自然干燥(
3、或电吹风干燥)；固定：将涂面朝上，通过火焰23次。（教师示范）,3.2.2 初染。滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色12min后倾去染液，水洗。（教师示范）,3.2.3 媒染。先用卢戈氏碘液冲去载片上残留水迹，再用碘液覆盖1 min，水洗。,3.2.4 脱色。滴加95%乙醇脱色2030s,立即水洗。,3.2.5 复染。用吸水纸吸去载片上残留水，用番红复染液染色2 min，水洗，吸干水迹。,3.2 方法 B.芽胞染色法,3.2.1 制片：按革兰氏染色方法操作。（取菌落中央和边缘的菌体）,3.2.2 染色。用试管夹夹住载片，滴加孔雀绿染液35滴于涂菌部位，置酒精灯火焰上加热58 min，加热过
4、程要随时滴加染色液，防止煮沸或干涸。,3.2.3 水洗：载片冷却后水洗。,3.2.4 复染。用番红染色液染色1 min。水洗，干燥。,3.2 方法 C.细菌形态观察,低倍镜观察4，10,高倍镜观察（40，找到合适观察目标，移至视野中心）,油镜观察（100）将高倍镜转离工作位置，在要观察的涂菌部位滴加一滴镜油，将油镜转至工作位置，聚光器升至最高，调节照明度，调节细调节器，使物像清晰。,绘图在所观察的图像中选取典型部位绘图，要求左眼观察图像，右眼观察绘图；球菌应注意长度与直径之比，球菌应注意排列状况；有芽胞的细菌应标记芽胞和营养体的位置；图下方应标明图的名称、放大倍数、染色结果。,实验报告,1 用文字描述实验项目、实验目的、材料与方法.,实验结果。按绘图要求进行。,3 实验分析。分析革兰氏染色、芽胞染色的过程和结果？分析显微镜使用中存在的问题？应如何改进？,
