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1、实验三核酸(DNA和RNA)的细胞核定位观察 p220,作业：,1、说明DNA和RNA的亚细胞定位在哪里?为什么？2、解释一下本实验中设立对照组的必要性是什么，三氯乙酸和丙酮各起什么作用,实验原理,Unna染色法 主要成分：甲基绿-派洛宁混合染料（碱性染料）原理：核酸是酸性的，它们对于碱性染料具有亲和力，但是DNA和 RNA对甲基绿-派洛宁混合染料的亲和力不同，而使这两种染料对两类核酸具有了选择性。DNA被甲基绿染成绿色，RNA被派洛宁染成红色，这样就能使细胞中两种核酸分布显示出来,“样品的固定”王金发 书 p37,目的：迅速杀死细胞，稳定细胞的化学成分，以便在后面的处理、切片时不被破坏。固定
2、使得细胞大分子交联而保持在一定位置上，不至于在后面的染色等处理过程中移位或丢失而产生人工假象。常用的固定液：(醛类：甲醛、戊二醛),Unna染色法实验步骤,撕取洋葱内表皮 小离心管Carnoy固定剂 15 min95%酒精复水5 min 70%酒精复水5 min H2O 5min 小离心管 表面皿中实验组 对照组 5%三氯乙酸（TCA）90保温,15min H2O 5min Unna 染液 20min(室温)H2O漂洗几秒后 丙酮 分色6-10Sec H2O洗片刻 水压片分别镜检观察,Unna 法,背景知识,核酸是一种线形多聚核苷酸，它的基本单位是核苷酸。细胞核内存在有两种核酸：DNA和RNA
3、，它们具有类似的化学组成，即均由含氮碱基，戊糖和磷酸组成，可表示如下:磷酸 核糖（RNA）核酸 核苷酸 戊糖 脱氧核糖（DNA）核苷 A、G、C、U(RNA)碱基（嘌呤/嘧啶）A、G、C、T（DNA）,DNA是染色体的主要成分，在细胞核内呈双螺旋结构。RNA是单链线形，主要有三种类型:核糖体RNA(rRNA)转运RNA（tRNA)信使RNA（mRNA)rRNA含量大，占细胞RNA总量的80左右，是核糖体的重要组成部分，而rRNA的合成、加工和核糖体亚单位的装配都是在核仁中进行的。tRNA约占全部RNA的15，它在蛋白质生物合成过程中具有转运氨基酸的作用。mRNA的含量最少，只占5左右，它是以D
4、NA为模板合成的，它又是蛋白质合成的模板。,rRNA基因的转录 快速生长的哺乳动物细胞中(培养的Hela细胞),转录生成的RNA总量的80%-rRNA;15%-tRNA;编码蛋白质的mRNA量少 处于生长中的高等真核细胞一般需107核糖体以确保蛋白质的合成,so真核细胞中有关编码核糖体基因(ribosomal gene)会在染色体的核仁区以100-5000个重复copy串联成中度重复序列,成簇分布在少数特定染色体的核仁区。,The general structure of ribosomes in prokaryotes and eukaryotesrNTs:number of ribonuc
5、leotides,The macromolecular composition of a mammalian ribosome,Structure of T.thermophilus 70S ribosome as determined by x-ray crystallography,Small ribosomal proteins,dark gray;Large ribosomal proteins,light gray,Light micrograph of an isolated nucleus from a Xenopus ootyte stained to reveal the h
6、undreds of nucleoli.,核仁,纤维中心(FC)：位于核仁中央，低电子密度、染色浅，rRNA基因的储存位点。稠密区(DFC)：电子密度最高，由致密的纤维构成，一般见不到颗粒；含正在转录的RNA分子。颗粒区(GC)：位于周边，直径为15-20nm的核糖核蛋白颗粒(RNP)-代表已合成的核糖体亚单位前体颗粒。,A section of part of a nucleus with a nucleolus,核仁(nucleolus),重要功能 rRNA合成加工rRNA基因转录rRNA前体的加工核糖体大小亚单位各自的装配rRNA是核糖体的重要组成部分,而rRNA的合成、加工和核糖体亚单位的装配都是在核仁中进行的。,
