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1、实验四 血凝和血凝抑制试验（Hemagglutination and Hemagglutination Inhibition,HA and HI）,徐晓娟,一、实验目的二、实验原理三、实验材料四、实验步骤五、结果判定,了解血凝和血凝抑制试验的原理。了解血凝价和血凝单位的概念。掌握血凝和血凝抑制试验的操作步骤和结果判定的方法。,一、实验目的,二、实验原理（一）血凝试验（HA）,一些病毒能够促使动物如鸡、鹅、豚鼠和人的红细胞发生凝集，叫做血凝试验。病毒凝集红细胞是一种较为普遍的现象，可以作为鉴定病毒的一个指标。,HA试验的原理图,一层RBC均匀铺在孔底者为+；基本同上，但边缘不整齐，有下坠倾向者为
2、+；RBC在孔底形成一个环状，四周有小凝集块者为+；RBC在孔底形成一个小团，但边缘不光滑，四周有小凝集块为+;RBC在孔底形成一个小团，边缘光滑，四周有似小凝集块者为;红细胞在孔底形成一个小团，边缘光滑，整齐者为-。,血凝试验结果判定,血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高稀释度。,（二）血凝抑制试验（HI）,当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种红细胞凝集的现象就被抑制，称红细胞凝集抑制试验，即血凝抑制试验。因此，可以用已知病毒来检测被检血清中的相应抗体，也可以用已知血清来鉴定未知病毒。,HA试验的原理图,HI试验的原理图,三、实验材料,鸡新城疫病毒：鸡新城疫弱毒株（Lasota）接种鸡胚
3、、收获尿囊液制备。鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝，以生理盐水洗涤35次，将血浆、白细胞等充分洗去，用生理盐水配置成1%红细胞悬液使用。0.85%生理盐水。被检血清，采自被检鸡的健康血清。,四、实验步骤（一）血凝试验（HA）,在血凝板第一排的112孔加入50l生理盐水。在第1孔中加入50l病毒抗原，反复吸取混匀后吸50l到第2孔，如此倍比稀释直到第10孔，混匀后弃50l；最后两孔（11、12）为红细胞对照。,将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在112孔中每孔加入50l。手工震荡，37静置2530min后观察结果。病毒液的血凝价是1:2？。,血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高稀释度。,（
4、二）血凝抑制试验（HI）,在血凝板的111孔加入25l生理盐水，最后一孔（12孔）加50l。第1孔加待检血清25l，混匀后吸25l至第2孔，倍比稀释直至第10孔，混匀后弃25l。从111孔，每空加稀释好的25l 4个血凝单位的病毒悬液。37 静置2530min,如果血凝价为1:28，那么4个血凝单位就是1:26,第11、12孔不加,第12孔不加,血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高稀释度。1个血凝单位：能使50%的红细胞发生凝集的病毒悬液。,病毒浓度,将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在112孔中每孔加入50l。手工震荡，在37静置2530min后观察结果。结果判定：以红细胞凝集100%的抑制作为结果判定的终点。血凝抑制价是1:2？，被检血清为阴/阳性。,第11孔为病毒对照，应该完全凝集，第12孔为细胞对照，应该完全沉积到孔底。,五、结果判定,血凝价是1：？；血凝抑制价是1：？；被检血清为阴性还是阳性?,
