《微生物检验技术-第一章绪论.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《微生物检验技术-第一章绪论.ppt（69页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、1,上课时间调整,4-14周，星期一，7、8节4-10周，星期三，9、10、11节第6周国庆放假,2,微生物检验技术,绪 论,3,厦门检验检疫局检验检疫技术中心,http:/机构设置:http:/仪器设备:http:/,4,厦门检验检疫局检验检疫技术中心,机构设置 http:/,5,食品理化实验室,食品、动植物及其产品等的理化检测项目：重金属、农药残留、兽药残留、食品添加剂、毒素及有害化学物质、品质分析、营养成分分析；饮用水质检测；辐照食品检测；食品急性毒理，一次性卫生用品毒理试验。,http:/,有害有毒物质检验技术,6,微生物实验室,食品、农产品、水产品、畜产品和化妆品等的微生物、生物毒素
2、和转基因成分的检测，抗生素、兽药残留的生物学和生化方法的初筛检测。,http:/,有害有毒物质检验技术,微生物检测技术,微生物检测技术,7,动物检验检疫实验室,进出境动物及其产品传染病、寄生虫病的检疫。应用ELISA、PCR、荧光定量PCR、病毒细胞培养及中和试验、琼脂扩散、血凝（抑制）试验、补体结合、病原菌分离鉴定等检测技术，对各种动物传染病和寄生虫病病原进行分离和鉴定；应用ELISA方法对盐酸克伦特罗、氯霉素、莱克多巴胺等兽药残留进行检测；应用基因检测技术对牛、羊等各种动物源性成分进行检测。,http:/,动物检疫学,微生物检测技术,有害有毒物质检验技术,8,植物检疫实验室,进出境植物及其
3、植物产品等检疫物的植物病原真菌、细菌、植物病毒、植物寄生线虫，杂草和害虫等有害生物的检测鉴定；种子健康、萌发率、净度、水分、杂质等项目的检验；土壤等植物栽培介质的线虫分离鉴定；木质包装材料材质鉴定与线虫分离鉴定；植物病虫害诊断与防治技术指导等。,http:/,植物检疫学,9,仪器设备,化学分析仪器 生命科学仪器 电子电器检测仪器,10,一、微生物检测基础,1、微生物的定义是一群形体细小、结构简单、人肉眼看不见，必须借助于光学显微镜、电子显微镜放大几百倍、几千倍甚至几万倍才能看到的生物。,回顾微生物学,11,2、微生物的种类,原核细胞型：细菌、放线菌、螺旋体、立克次氏体、支原体、衣原体；真核细胞
4、型：酵母菌、霉菌、微藻类等；非细胞型：病毒、亚病毒（类病毒、拟病毒、朊病毒）。,12,3、病原微生物定义,大部分微生物是有益的，只有小部分微生物是有害的，可以引起各种疫病，这部分微生物叫做病原微生物感染人、动植物，导致疾病发生的有害微生物，称之为病原微生物。,13,4、微生物对产品的污染,对产品造成污染的微生物来源：土壤、空气、水、人和动植物、生产原料、生产器械及包装材料等。1）土壤：粮食 蔬菜和水果等植物性食品是经土壤培育出来的，与土壤接触密切，最易受到土壤中微生物的污染。以细菌最多，其次是放线菌、霉菌与酵母菌。2）空气：在空气中，有时会出现一些病原微生物，如结核杆菌和金黄色葡萄球菌等病原菌
5、，可通过污染的食品而引起感染。空气带有微生物的土壤、尘埃、痰沫与唾液播散到食品上，可造成食品的严重污染。,飞沫传播病原,14,3）水：水是一种污染源，淡水中常见的微生物类群有：假单胞菌属、无色杆菌属、黄杆菌属、产碱杆菌属等菌种。海水中主要是副溶血弧菌，是人类吃海产品而引起食物中毒的病原菌水不仅是重要的污染源，而且还是食品被微生物污染的重要途径。4）人与动植物：人与动植物体表、人与动物的消化道和上呼吸道均有一定种类的微生物群存在，该微生物如果污染了食品，常引起腐败变质。当人与动物有致病微生物侵入机体而致病时，体内的病原菌就会随粪便和分泌物排出体外，如处理不当，直接或间接污染食品，造成对人的危害
6、如：老鼠、苍蝇、蟑螂等动物是携带和传播微生物或病原菌的中间媒介。,15,5）产品原料及辅料：植物原料及辅料：果蔬加工产品，原料本身带有微生物，而且加工过程中还会再次污染，加工制成产品中有可能带有大量微生物；各种粮食和饲料上的微生物以曲霉属、青霉属和镰孢霉属的一些种为主，其中曲霉属危害最大。动物原料及辅料：患病的畜禽的组织器官内部可能有微生物存在，要实行屠宰前检疫；屠宰、分割、加工、存储和销售过程中的每个环节，都有可能发生微生物污染。6）加工机械和设备、包装材料,16,陈化粮事件,2006年12月15日，国家食品药品监督管理局发出紧急通知，因为部分媒体报道北京、天津等地相继发现万吨“陈化粮”，并
7、称这些“陈化粮”均是“东北米”。长期储存的陈化粮中的油脂会发生氧化，产生对人体有害的醛、酮等物质。储存时间过长的陈化粮，会残留一定量的农药，而且陈化粮会感染黄曲霉菌，继而产生黄曲霉毒素，长期食用会致癌。,近年食品安全事件,17,5、微生物检验的涵义,微生物检验是基于微生物学的基本理论，利用微生物实验技术，根据各类产品卫生标准的要求，研究产品中微生物的种类、性质、活动规律等，用以判断产品卫生质量的一门应用技术。它是以技能操作为主的学科。各类产品从原料、加工、储藏、运输、销售等各个环节，都会受到环境中微生物的污染，不同来源的微生物可通过各种途径污染暴露于环境中的各类产品，并在其中生长繁殖引之变质，
8、影响产品的特性，甚至产生毒素、造成食物中毒、疾病传播等后果。因此，许多产品在生产、销售或使用之前必须对其进行微生物学检验。微生物学检验是产品卫生标准中的一个重要内容，也是确保产品质量和安全、防止致病菌污染和疾病传播的重要手段。,什么是微生物检验？,18,6、微生物检验的意义,1）是衡量动植物性产品卫生质量的重要指标之一，也是判定被检产品能否食用的科学依据之一。2）通过微生物检验，可以判断产品加工环境及产品卫生环境，能够对产品被微生物污染的程度作出正确的评价，为各项卫生管理工作提供科学依据，提供传染病和人类、动物和食物中毒的防治措施。3）微生物检验是以贯彻“预防为主”的卫生方针，可以有效地防止或
9、者减少食物中毒、人畜共患病的发生，保障人民的身体健康；同时，它对提高产品质量，避免经济损失，保证出口等方面具有政治上和经济上的重要意义。,19,7、微生物检验的基本任务,(1)研究各类产品的样品采集、运送、保存以及预处理方法，提高检出率。(2)根据各类产品的卫生标准要求，选择适合不同产品、针对不同检测目标的最佳检测方法，探讨影响产品卫生质量的有关微生物的检测、鉴定程序以及相关质量控制措施；利用微生物检验技术，正确进行各类样品的检验。(3)正确进行影响产品卫生质量的有关微生物的快速检测方法、自动化仪器的使用，并认真进行检验结果的分析和试验方法的评价。(4)及时对检验结果进行统计、分析、处理，并及
10、时准确地进行结果报告。(5)对影响产品卫生质量及人类健康的相关环境的微生物进行调查、分析与质量控制。,20,8、微生物检验的范围与对象,微生物检验范围1.生产环境的检验车间用水、空气、地面、墙壁等。2.各种产品的原、辅料检验包括食用动物、谷物、添加剂等一切原辅材料。3.各类产品加工、储藏、销售诸环节的检验包括食品从业人员的卫生状况检验、加工工具、运输车辆、包装材料的检验等。4.产品的检验重要的是对出厂产品、可疑产品及食物中有毒食品的检验.,21,微生物检验对象 7类,(1)食品(2)化妆品(3)药品(4)一次性用品及其他生活用品(5)应施检疫的出口动物产品(6)环境(7)有关国际条约或其他法律
11、、法规规定的强制性卫生检验的进出口商品,22,(1)食品的微生物检验,对食物中的微生物进行检测，既是商检机构、产品质量监督检验部门、卫生防疫部门工作的需要，也是食品生产企业进行产品质量控制、保证食品安全质量的手段。我国卫生部颁布的食品微生物指标有菌落总数、大肠菌群和致病菌三项。,23,2005-2010年食品安全事件33件,江苏维维乳业有限公司在上海被查酵母菌数严重超标05/08/18“龙凤”、“思念”速冻食品检出致病菌 07/04/12北京王致和豆腐乳被指保质期内发霉 07/11/08味全食品旗下奶粉被查出致病菌 07/11/21 台湾著名食品企业味全食品一批婴儿配方奶粉检出致病菌-阪崎肠杆
12、菌 07/11/27,微生物污染相关事件,24,2010年3月19日，调查负责人武汉工业学院教授何东平召开新闻发布会，建议政府相关部门加紧规范废弃油脂收集工作，再次引起了人们对食品安全的担忧。据报道，目前我国每年返回餐桌的地沟油有200至300万吨。医学研究称地沟油中的黄曲霉素强烈致癌，毒过砒霜100倍。,25,(2)化妆品的微生物检验,微生物混入化妆品的途径有：原料本身即带有微生物；制造过程中混入；盛装容器本身的污染；以及使用化妆品者的不良习惯造成。微生物指标是化妆品等生活用品卫生质量合格与否的重要影响因素。目前我国对进出口化妆品规定一律按化妆品卫生规范进行检验，它较以前的GB7918-87
13、化妆品微生物标准检验方法有明显的改进。对于化妆品中微生物的检测，其一是检验原料和产品中微生物数量是否达到执行标准的要求，例如细菌总数测定、粪大肠菌群测定、绿脓杆菌测定、金黄色葡萄球菌测定等；其二是检验用于化妆品和药品中的防腐剂的防腐效能。,26,(3)药品的微生物检验,药品微生物检测方法包括药品无菌检查、微生物限度检查。在进行药品无菌检查或微生物检查时，应采用药典规定的某种方法进行检测，并确认供试品所采用检查方法和检验条件下对微生物无抑菌作用或抑菌作用忽略不计，以保证药品所污染的微生物能充分检出。,27,(4)一次性用品及其他生活用品的微生物检验,一次性卫生用品可按一次性使用卫生用品标准进行微
14、生物学检验。检测项目包括菌落总数、真菌总数、大肠菌群和致病菌的检测。其他生活用品按照有关标准进行检测。,28,(5)应施检疫的出口动物产品的微生物检验,依据我国各有关部门的职责划分，由商检机构对所分管应施检疫的出口动物产品进行检疫，并签发各种检验及检疫证书，以确保出口动物产品符合进口国的检疫要求，顺利通关进口。例如：羽绒羽毛作为动物产品，其中是否存在有害微生物，特别是能引起人畜共患传染病的微生物，是人们关注的问题之一。自2001年，欧盟、美国和加拿大陆续要求对我国出口的羽绒制品进行微生物检测。当时因微生物含量严重超标，一段时间内我国羽绒及其制品多次遭遇退货，严重影响了国际出口。20042005
15、年，禽流感疫情在全球范围内的愈演愈烈，在使全球家禽业遭受重创的同时，也波及到了禽类的直接衍生品羽绒及其制品。在此情势之下，我国很快对羽绒国家标准羽绒羽毛(GB/T176852003)和羽绒羽毛检验方法(GB/T102882003)重新进行了修订，并将微生物检测指标引入其中，要求对嗜温性需氧菌、粪链球菌、还原亚硫酸梭状芽孢杆菌及沙门氏菌四大微生物进行检测。该标准已于2004年5月1日正式颁布实施。,29,(6)环境的微生物学检测,微生物对各类产品的污染以及对人畜的感染途径是多方面的，其中通过空气、水、人和动物、用具及杂物等环境因素的污染不容忽视。空气洁净度的微生物检测 对公共场所的卫生检测可按公
16、共场所监测技术规范GB/T17220-1998)现场采样,检验方法按公共场所卫生监测标准检验方法进行，依据公共场所卫生标准进行评价。公共场所的微生物学检测主要检测空气中细菌总数。对食品、制药、医院的洁净室、车间、室内环境等空气微生物的检测可按相关标准进行细菌总数和某些致病菌的检测。,30,(7)有关国际条约或其他法律、法规规定的强制性卫生检验的进出口商品，应按要求进行相关微生物检验。,水质的微生物检测 目前世界各国对于饮用水的卫生质量，除采用大肠菌群等指标外，一般还采用细菌总数这个指标。大肠菌群是指示水质受粪便污染的指示菌，细菌总数指示水体受污染物污染的情况。我国GB5749-85中华人民共和
17、国国家标准 生活饮用水卫生标准中规定生活饮用水细菌总数每毫升不得超过100个，大肠菌群每升不得超过3个。,31,二、微生物检验技术的发展趋势,微生物检验常规技术包括显微技术，染色技术，灭菌和消毒技术，培养基制备技术，接种，分离纯化和培养技术，无菌取样技术，微生物的计数技术，菌种保藏技术，微生物常规鉴定技术等。传统常规的微生物检测方法检测时限长，过程烦琐。随着食品、药品及其他工业的发展以及人们对各类产品质量安全的重视，传统检测方法已经远不能满足微生物检测的需要，迫切需求灵敏度更高、特异性更强、简便快捷的微生物检测技术和方法，建立和完善适应国际贸易的各类产品微生物检测技术和体系迫在眉睫。,32,传
18、统检验技术,显微技术是微生物检验技术中最常用的技术之一，也是应用比较早的技术。实验室中常用的有普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。利用血细胞计数器在显微镜下直接计数是一种常见的微生物计总数的方法。,33,传统检验技术,革兰氏染色技术：是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。培养计数法：平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后,其中的微生物充分分散成单个细胞,取一定量的稀释样液涂在平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。菌落形成单位cfu，col
19、ony-forming unit。,34,现代微生物检测技术,近几年世界各国的许多机构和学者都致力于快速、简便、特异、敏感、低耗且实用的检测技术和方法的研究。对微生物的检测，其研究的技术手段产生了很大的变革：微生物检测技术已由培养水平逐步向分子水平迈进；近年来兴起的基因芯片技术及自动微生物检测系统，将从根本上改变微生物的检测方法；气相色谱法、气质联用等现代仪器分析法也应用于微生物检测中。,35,现代微生物检测技术特点,(一)现代生物检测技术更加注重快速、准确、实用，微生物检测仪器是检测技术的重要载体。其实用性主要体现在微型化、低能耗化、功能专用化、一体化和成像化。(二)现代微生物检测技术与生物
20、技术成果相结合，比如核酸探针技术、PCR技术、生物芯片技术等均在微生物检验方面有广泛的应用。(三)大力发展在线无损的微生物检测技术，因为产品生产是一种连续的过程，所以那种破坏性的或侵入性的微生物检测手段将逐步被淘汰，而无损的可以进行原位检测的微生物检测方法将受到欢迎，如生物传感器等。,36,1.改进的微生物培养法,微生物培养技术是众多检测手段的基石。固体培养基的发明使微生物培养技术有了质的飞跃，在此基础上传统的微生物培养法在不断的改进中发展。主要表现在是通过在培养基中加入抑菌剂、指示剂、荧光物质等，或经预处理来缩短增菌时间，合并检验步骤，使培养和鉴定一步完成，从而达到快速检测的目的。如疏水网膜
21、法(HGMF)：采用疏水网膜过滤样品，将捕获了被检微生物的疏水网膜上倾入适当的琼脂，经一定时间培养后即可计数。该法可用于酵母菌、霉菌的计数，也可进行沙门氏菌、大肠杆菌(大肠菌群)的检测，采用人工或机械计数都很方便。,37,直接荧光过滤膜技术(DEFT)：将样品经特殊滤膜过滤后，经吖啶橙染色，利用紫外线显微镜来快速测定活菌数。葡萄糖苷酶荧光法：通过在培养基中加入指示剂、色素、荧光物质，成为快速检验大肠菌群的常用方法。,38,2.免疫学方法,免疫学方法是以抗原和抗体的特异性结合反应为基础的方法。免疫方法的优点是样品在进行选择性增菌后，不需分离即可采用免疫技术进行筛选。由于抗原和抗体的结合反应特异性
22、强，可在很短时间内完成，再辅以免疫放大技术来鉴别细菌，使得免疫法具各了快速、灵敏的特点。样品经增菌后可在较短的时问内达到检出度。通常根据检测技术的不同可分为免疫扩散反应、凝集反应、免疫磁珠法、免疫荧光反应、酶免疫测定(ELISA)等方法。,39,例如常见的污染食品病原细菌，沙门菌、李斯特菌、大肠杆菌、肉毒梭菌等都可以通过免疫学方法进行分析和检测。免疫法不但经济实用，重现性、灵敏度和特异性也较强。特别是近几年发展的免疫试剂不仅适用于防疫及卫生技术检测监督部门，还可在企业团体及日常家庭的卫生检测中使是一种非常有希望普及的快速检测方法。,40,3.分子生物学方法,随着分子生物学和分子化学的飞速发展，
23、对病原微生物的鉴定已不再局限于对它的外部形态结构及生理特性等一般检验上，而是从分子生物学水平上研究生物大分子，特别是核酸结构及其组成部分。在此基础上建立的众多检测技术中，核酸探针(nuclear acid probe)和聚合酶链反应(PCR)以其敏感、特异、简便、快速的特点成为世人瞩目的生物技术革命的新产物，业已逐步应用于食源性病原菌的检测。目前已可以用DNA探针检测食品中的大肠杆菌、志贺菌、李斯特菌、金黄色葡萄球菌等。分子生物学法快速、灵敏、特异性强，适用于不常见的或新的病原微生物的检测。但其成本较高，且要求较高的技术水平，大面积采用还有较大的难度。目前仅限于海关、商检等国家级高等机构及部门
24、采用。,41,核酸探针技术,将已知核苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法标记，加入已变性的被检DNA样品中，在一定条件下即可与该样品中有同源序列的DNA区段形成杂交双链，从而达到鉴定样品中DNA 的目的，这种能认识到特异性核苷酸序列有标记的单链DNA分子核酸探针或基因探针。根据核酸探针中核苷酸成分的不同，可将其分成DNA探针或RNA探针。根据选用基因的不同分成两种，一种探针能同微生物中全部DNA分子中的一部分发生反应，它对某些菌属、菌种、菌株有特异性；另一种探针只能限制性同微生物中某一基因组DNA发生杂交反应，它对某种微生物中的一种菌株或仅对微生物中某一菌属有特异性。,42,核酸探针检测技术的
25、最大优点是:特异性；敏感性。但探针检测技术中也存在一定的问题，如检测一种菌就需要制备一种探针；要达到检测量还要对样品进行一定时间的培养；探针检测是分析基因序列，对毒素污染的食品有时因样品中不含产毒菌而无法检测。,43,4.气相色谱法,微生物细胞的气相色谱分析是研究微生物分类的有效方法之一。大量分析检测各种常见细菌、酵母菌、霉菌和其他微生物的组成成分,并建立微生物组分标准色谱图文库，储存在计算机中，然后将待鉴定微生物的组分色谱图与标准图谱相比较，可迅速鉴定其种类。气相色谱法具有高选择性、高分离效能、高灵敏度、高速度、应用范围广的特点，在快速诊断传染病方面是很有发展前途的方法，目前对某些疾病的诊断
26、已经应用于临床，并逐渐向自动化方向发展。,44,气相色谱法,测定细胞的化学成分:鉴定细菌测定代谢产物：鉴定细菌测定代谢产物：进行传染病的快速诊断,其原理是将微生物细胞经过水解，甲醇分解，提取，以及硅烷化、甲基化等衍生化处理后，使之分离尽可能多的化学组分，供气相色谱进样分析。不同微生物所得到的色谱图中，通常大多数峰是有共性的，只有少数峰具有特征性，可被用来进行微生物鉴定。,45,5.基因芯片技术,基因芯片：采用微加工和微电子技术将大量的人工设计好的基因片段有序地、高密度地排列在玻璃片或纤维膜等载体而得到的一种信息检测芯片，其本质名称是脱氧核糖核酸微阵列（DNA微阵列）。基因芯片的工作原理：利用碱
27、基配对的原则来检测样品的基因。将各种基因寡核苷酸点样于芯片表面，将待测微生物样品的DNA或RNA通过PCR或RT-PCR扩增、体外转录等技术掺入标记分子后，与位于芯片上的已知碱基顺序的DNA探针杂交，再通过扫描系统检测探针分子杂交信号强度，然后以计算机技术对信号进行综合分析后，即可获得样品中大量基因序列及表达信息，以对之做出定性及定量的研究，来确定检测样品是否存在某些特定微生物。,46,目前，在世界各国的积极推动下，基因芯片的应用从最初的医学领域向其他方面扩展。近几年来，基因芯片的应用也开始在食品工业中崭露头角，许多学者利用基因芯片对食品中的常见致病菌进行了分析、检测，不仅敏感度高于传统方法，
28、且操作简单，重复性好；基因芯片技术也是近几年运用的病毒检测新技术之一，现在世界各国都在积极地进行能够对人类构成危害的各种病毒快速检测芯片的研究；应用基因芯片可对病人、出入境食品、动植物及其产品进行检测。随着社会的发展和科技进步，特别是近年来兴起的基因芯片技术及自动微生物检测系统，将从根本上改变微生物的检测方法。,47,仪器法的应用,原理是当细菌生产繁殖时,将蛋白质、糖类等大分子物质分解成氨基酸、有机酸等带电荷的小分子物质,改变培养液的导电度,这样,测量电阻和导电度的变化,就可推算出样品原来的含菌数。Bactometer系统是利用电阻抗、电容抗或总阻抗等三种参数的自动微生物监测系统。它能快速测定
29、样品中细菌的污染程度,从而快速提供品质控制的信息。,1、电阻电导检测器,48,应用电阻抗技术的全自动微生物监测系统BACTOMETER用于快速检测食品、化妆品、药品等的细菌总数、大肠菌群、酵母菌/霉菌、乳酸菌数,49,2.微型全自动荧光酶标分析仪(Mini-VIDAS),主要应用酶联荧光技术(ELFA),ELFA技术具有优异的敏感性和特异性。可检验李斯特氏菌、单增李斯特氏菌、沙门氏菌、葡萄球菌肠毒素、空肠弯曲杆菌、大肠杆菌O157等。使用该仪器操作简便,只需加1次样品,按1次键,整个检测过程都由仪器自动完成。,50,3.微生物的微型、自动化鉴定系统,API系统：法国 Bio-梅里埃公司生产，有
30、 20 种不同的生化反应，可鉴定 700 多种细菌，分不同系列，如 20A厌氧菌，20E肠道菌，为长形卡片。Enterotube系统：美国罗氏公司生产，用一条有8-12个分隔小室的划艇形塑料管制成，面上覆盖膜。有 15 种生化反应，专门鉴定肠道菌。Biolog系统：96孔板型，美国安普公司生产，可自动化鉴定，可鉴定 1140 种细菌。BBL系统：BD公司专门为中小型微生物实验室以及科研机构设计的经济型微生物鉴定系统。,51,细菌半自动鉴定系统,API数值鉴定系统BBL鉴定系统Biolog鉴定系统,程序：1、获取辅助特征2、培养菌悬液加入生化板培养扫描鉴定打印结果,52,商品化鉴定系统：,肠杆菌
31、科及其他革兰氏阴性菌：（API 20E、Enterotube、Minitek、Micro ID等）葡萄球菌及链球菌（API Staph、API 20S）厌氧菌：（API 20A、Minitek）酵母菌：（API 20C、Minitek、Uni-Yeast-Tck）其他（API Coryne、API 20NE、API Campy等）,53,微生物快速自动鉴定系统,美国Biolog公司致力于微生物鉴定领域新技术新产品的开发、生产和销售，是全球高新技术百强之一，其独创的碳源利用方法已获美国FDA认可。Biolog鉴定系统可鉴定包括细菌、酵母和真菌在内约2000种微生物，便于各领域的微生物实验室用于对
32、微生物的鉴定；另外，Biolog的智能软件和独特的设计理念又使其特别适用于生态研究领域。,54,鉴定原理,Biolog公司独创的碳源利用方法，利用微生物对不同碳源代谢率的差异，针对每一类微生物筛选95种不同碳源，配合四唑类显色物质（如TTC、TV），固定于96孔板上（A1孔为阴性对照），接种菌悬液后培养一定时间，通过检测微生物细胞利用不同碳源进行新陈代谢过程中产生的氧化还原酶与显色物质发生反应而导致的颜色变化（吸光度）以及由于微生物生长造成的浊度差异（浊度），与标准菌株数据库进行比对，即可得出最终鉴定结果。,55,4.全自动微生物分析系统(Vitek-AMS),该系统为用于微生物鉴定及药敏试验
33、的设备,能同时进行60480个样品分析。其原理是将微生物数码鉴定的方法与计算机技术结合起来,实现了从读数、编码、解码、打印结果的鉴定全过程的自动化。根据不同的试卡,可以鉴定各种革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、厌氧菌、奈瑟菌、酵母菌、芽孢杆菌等300余个种(属)的微生物,还可以进行临床细菌的药敏试验。,56,其特点:,鉴定细菌类型广。具有最大的准确性。国内外报道,鉴定最常见的细菌准确率98.4%。鉴定时间短。鉴定细菌需610h,鉴定真菌需1618h。高度可重复性。AMS内的记忆系统,采用计算机处理,可随时补充最新的鉴定程序软件。仪器操作方便,不需要专业人员,只要有一定的英语基础即可短期完成培训。,5
34、7,全自动微生物鉴定/药敏分析系统VITEK 32/60/120,法国biosMerieumx(生物梅里埃）生产的全自动微生物分析仪的一个系列，包括：VITEK32、VITEK60、VITEK120等。工作原理自动生化鉴定VITEK试卡的反应池内含风干底物。试卡由标准浓度菌液充填，然后放入测试槽内，读取器每小时量度卡片内样本在培养介质内生长变化值，直至最后结果打印出来。动态学方法：每小时自动检测每张卡片的反应情况，与数据库中的数据进行比较分析，达到系统预设的阈值时，自动报告结果。,58,VITEK试卡由30个光化学反应微孔组成,每个微孔中含有用于鉴定或其他实验所需的底物/药物。然后通过培养后仪
35、器对显色反应进行判断，利用数值法进行判定。根据需要鉴定的微生物的种类的不同，设计了不同的鉴定卡片，比如革兰氏阴性菌卡，革兰氏阳性菌卡，酵母菌卡等。,59,4.ATP生物发光法,ATP广泛存在于各种活的生物体中,活的菌体中也有ATP,细菌死亡后,在细胞内酶的作用下,ATP将很快被分解。因此,通过测定样品的ATP浓度,即可推算出活菌数。ATP生物发光法要求样品中细菌浓度最低不少于1000个/mL,但这种灵敏度有时达不到卫生学要求。ATP生物发光法具有简便、灵敏、快速等优点,小型化的测试仪器便于随身携带,非常适合现场卫生监测。,60,5.微热量计技术,微热量计技术是通过测定细菌生长时热量的变化进行细
36、菌的检出和鉴别。微生物在生长过程中产生热量,用微量热计测量产热量等数据,均存储于计算机中,经过适当信号上的数字模拟界面,在记录器上绘制成以产热量对比时间组成的热曲线图。根据这些实验所得的热曲线图和已知细菌热曲线图直观比较,即对细菌进行鉴别。,61,6.快速、自动化微生物分析仪器,（1）通用仪器：气相色谱仪及高压液相色谱仪（尤其适用于厌氧菌，分析脂肪酸和醇类）、质谱仪等。（2）专用仪器：药敏自动测定仪、生物发光测量仪、自动微生物检测仪、微生物菌落自动识别计数仪、微生物传感器等。（3）生物芯片仪：包括DNA和蛋白质芯片仪。（4）免疫学方法：免疫检测试剂盒、酶标仪。,62,三、微生物检验的质量管理,
37、微生物检验是疾病控制机构、产品质量监督管理部门、检测机构、产品生产企业等质量控制中心的重要检测项目，是疾病防治、卫生监测、产品卫生质量保证等不可缺少的依据和手段。随着社会的发展以及人们对各类产品质量安全的重视，对检验工作的质量和效率的要求越来越高，因此，对微生物检验实行全面质量管理和控制是必需的。,63,1.建立质量体系，抓好质量管理,(1)为保证微生物检验工作的质量，首先应建立质量体系。以中心质量手册和程序文件为依据，制定相应的检验工作程序，从收样到发出报告都应严格按照检测流程和质量保证体系有关要求进行操作，确保出具数据的准确性和公正性。(2)实验室制定和落实相应制度，主要包括微生物检验工作
38、管理制度，检验工作质量保证制度，菌毒种管理制度，废弃物处理制度，仪器设各管理制度，样品管理制度，消毒、隔离、生物安全管理制度，常用试剂管理制度，危险品管理制度等。这些制度要不断宣传贯彻，使各级人员提高认识，严格遵守。,64,2.加强业务技术培训,提高检验人员素质,(1)强化检验人员爱岗敬业意识。要保证检测结果的准确性、公正性，必须抓好检验人员思想建设，搞好职业道德教育，使检验人员不仅具有相关的专业知识和熟练的操作技术，而且必须具各对工作的高度责任感和实事求是的工作作风，树立全心全意为人民服务的思想，自觉主动地完成各项工作任务。(2)检验人员业务培训和知识更新是保证检验质量的关键。可采取多种方式
39、学习和掌握新理论、新技术、新方法。积极参加上级部门组织的业务培训，派检验人员专项进修学习，积极参加业务学习，积极参加国内外学术交流，定期组织业务骨干授课,交流经验,改善部分检验人员专业基础薄弱和理论水平较低的现状，不断提高整体的业务水平。(3)每年应对检验人员进行质量控制样品考核，综合分析考核情况，找出不足，总结经验，提高检验人员的综合素质。,65,3.加强微生物检验的质量控制,(1)应严格按照国家规定对试验仪器、设各、器具进行定期的检定、维护和保养。(2)严格控制培养基、试剂、染色及诊断血清的质量。(3)确保菌株的良好保存 标准菌株和从样品中分离出的菌株，其保存方法有多种，最理想的为真空冷冻
40、干燥法，但这种方法的操作技术难度大，花费高，需特殊设备，一般单位不易做到。而常规琼脂斜面保存法常因传代次数多，易污染，易变异。近几年来，采用卵黄液普通安瓿熔封法超低温保存菌种，效果很好。,66,(4)检验方法的选择,检验方法是微生物实验室质量保证的重要步骤,它必须统一、准确可靠。检验方法优先采用国家规定的标准检验方法或国际标准、行业标准、地方标准规定的检验方法,无上述标准时，经协商也可采用企业标准。,67,(5)确证试验和实验室标准,用阴性、阳性标准菌株做确证试验，特别在做微生物生化试验和免疫试验时一定要设立阴性、阳性对照组。建立实验室工作失败报告、内审制度，记录整个试验过程中的错误信息，通过管理评审，制定整改措施，及时整改；定期参加室间质控评比，不断提高试验技术水平；及时更新程序性文件，完善实验室质量保证体系。,68,(6)检验报告和原始记录的质量控制,检验报告书是检测的最终产品，经单位技术负责人签发即产生法律效力。检验报告、检验原始记录都应规范填写，认真审核。收样人、检测人、复核、审查、签发人应人人把关，各负其责，保证质量体系的有效运行。,69,The endThank you,
