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1、实验七,植物可溶性糖的测定,南京晓庄学院生命科学系,实验原理,糖在硫酸作用下生成糠醛,糠醛再与蒽酮作用生成绿色络合物,颜色的深浅与糖含量有关,在650nm波长下OD值与糖含量成正比,由于蒽酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化,故必须在反应后立即在同一时间内比色。,实验器材,实验仪器:分光光度计 恒温水浴锅 分析天平 刻度试管 漏斗,恒温水浴锅,分光光度计,分析天平,实验试剂,乙醚醋酸铅草酸纳粉末,实验材料,青菜梗,实验步骤,1 可熔性糖的提取:称取5克新鲜青菜梗于研钵中,加乙醚少许,磨成匀浆,倒入烧杯中,水洗涤,再加蒸馏水30-40ml,然后水浴加热70-80摄氏度,半小时冷却后逐滴加入饱和中性
2、醋酸铅,以除去蛋白质,直至加液时不再出现白色沉淀为止,然后将此混合液连同残渣一并倒入100ml容量瓶中,充分振荡定容,过滤,于事先放有少量草酸钠粉末的三角瓶中,所得的透明液体即为可溶性糖提取液。,实验步骤,2 显色及比色:吸取上述糖提取液1ml,加入5ml蒽酮试剂混合,沸水浴煮10min,取出冷却,在625nm处测OD值,从标准曲线上取得提取液中糖的含量。3 绘制标准曲线:取标准糖溶液将其稀释成一系列0、20、40、60、80毫克每摩尔的不同浓度的溶液,按上述方法分别测其OD值,然后绘制标准曲线。,计算:,设V为植物样品稀释后的体积 C为提取液的含糖量 W为植物样重 可溶性糖%=CV/W10,实验结果,OD=0.745 X=196可溶性糖=19600/5106100%=0.392%,注意事项,1 定量实验,且涉及标准曲线绘制,分光光度计的使用,因此溶液配制、材料选取等方面必须精确、仔细一减少误差。2 实验组、对照组步骤应相同,使结论准确。3 加中性醋酸铅除蛋白质时,应待沉淀完全。,