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1、1,吸附法(adsorption method)指利用吸附作用，将样品中的生物活性物质或杂质吸附于适当的吸附剂上，利用吸附剂对活性物质和杂质间吸附能力的差异，使目的物和其它物质分离，达到浓缩和提纯目的的方法。,第六章 吸附分离法,2,3,优点：(1)设备简单、操作简便、价廉、安全。(2)少用或不用有机溶剂，吸附过程中pH变化小，较少引起生物活性物质的变性失活。缺点：(1)选择性差，收率不高。(2)一些无机吸附剂性能不稳定。,4,第一节 吸附法基本概念,一、吸附：物质从流体相（气体或液体）浓缩到固体表面从而达到分离的过程称为吸附作用(adsorption)，在表面上能发生吸附作用的固体微粒称为吸
2、附剂（adsorbent），而被吸附的物质称为吸附物（adsorbate）。,5,二、吸附类型,6,三、影响吸附的因素,（一）吸附剂 吸附容量：比表面积、种类、活化状况 吸附速度：颗粒度、孔径 机械强度,7,（二）吸附物 能使表面张力降低的物质，易为吸附 溶解度：较小易吸附 极性吸附剂易吸附极性吸附物 同系物吸附量变化有规律 氢键,8,吸附剂及被吸附物极性对吸附的影响,极性吸附剂易吸附极性物质，非极性吸附剂易吸附非极性物质；极性吸附剂适宜从非极性溶剂中吸附极性物质；非极性吸附剂适宜从极性溶剂中吸附非极性物质。,9,（三）环境的影响1、溶剂：单溶剂易吸附，混合溶剂易解吸2、pH值：PI3、温度4
3、、盐的浓度：可能阻止、可能促进,10,（四）吸附物浓度和吸附剂用量,对蛋白质或酶进行分离时要求浓度1%以下。吸附剂用量。,11,第二节 几种常用的吸附剂,无机：白陶土、氧化铝、硅胶、硅藻土有机：活性炭、纤维素、大孔吸附树脂等一、活性炭(activated carbon)粉末状，颗粒状，锦纶活性炭 是吸附能力很强的非极性吸附剂 溶剂中吸附力：水乙醇甲醇酯丙酮氯仿 去色素、热原，用量0.021%加热活化 pH影响,12,辅酶A制备,13,活性炭提取放线酮,14,二、人造沸石(zeolite),无机阳离子交换剂Na2 Al2O4xSiO2yH2ONa2Al2O4=2Na+Al2O42-,15,16,
4、三、磷酸钙凝胶,磷酸钙磷酸氢钙羟基磷灰石主要是其中的钙与蛋白质的负电基团结合,17,胰岛素纯化,18,四、白陶土(Kaolin),可作为助滤剂与去除热原的吸附剂,19,五、氢氧化铝凝胶,将氨水或碱液加入铝盐形成的无定形凝胶；吸附能力和陈化程度有关。,20,六、氧化铝(Aluminum oxide),常用的吸附剂1、碱性氧化铝：2、中性氧化铝：3、酸性氧化铝：,21,氧化铝吸附层析纯化维生素B12,影响因素：(1)Al2O3的颗粒度要均匀，流速控制要很慢；(2)温度宜在20以下层析，洗脱在室温中进行；(3)利用B12在丙酮中不溶的特性，在冰冻条件下结晶3天，结晶析出。,22,七、硅胶(Silic
5、a gel),SiO2nH2O 硅胶表面的硅羟基能吸附多量的水，称自由水，活性随自由水含量增加而下降。能吸附非极性化合物和极性化合物,23,CoQ10制备,24,洗脱剂的选择,极性溶质：极性大的溶剂洗脱能力就大；非极性溶质：极性小的溶剂洗脱能力就大。常用洗脱剂排序（极性增大）：石油醚甲苯 乙醚氯仿 乙酸乙酯 丙酮 乙醇甲醇 水 乙酸,25,氧化铝或硅胶为吸附剂,洗脱剂从极性低的开始逐渐增加极性。次序：石油醚、甲苯、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、水、乙酸。,26,活性炭为吸附剂,洗脱剂从极性高的开始逐渐降低极性。次序：水、乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、氯仿。,27,第三节 大孔网状聚合物吸附剂
6、,大网格吸附剂(macroreticular adsorbent)（大孔网状树脂，macroreticular resin）在树脂聚合时加入惰性的致孔剂，待网格骨架固化和链结构单元形成后，用溶剂萃取或蒸馏水洗将致孔剂去掉，形成不受外界环境条件影响的孔隙，其孔径远大于24nm，可达100nm，故称“大孔”。吸附能力不同 分子量大小,28,特点,1、选择性好、解吸容易、理化性质稳定、机械强度好、可反复使用等优点。2、其孔隙大小、骨架结构和极性，可按照需要，根据不同的原料和合成条件而改变，因此可适用于吸附各种有机化合物。3、适合弱电解质及非离子型化合物分离。,29,一、大孔网状聚合物吸附剂的类型和结
7、构,可分为非极性、中等极性、极性和强极性吸附剂四类。美国罗姆-哈斯公司：Amberlite系列；日本三菱化成公司：Diaion系列。,30,Amberlite大网格吸附剂的物理性质,31,Diaion大网格吸附剂的物理性质,32,比表面积：空隙度：系指吸附剂中空隙所占的体积百分率。孔容度：指每1g吸附剂所含的空隙体积。骨架密度：系指吸附剂骨架的密度，即每1ml骨架(不包括空隙)的重量(g)。湿真密度：偶极矩：表征极性的强弱，越大，极性越强。,33,34,二、大孔网状聚合物吸附剂吸附机理,“类似物容易吸附类似物”的原则：一般非极性吸附剂适宜于从极性溶剂(水)中吸附非极性物质。一般极性吸附剂适宜于
8、从非极性溶剂(有机溶剂)中吸附极性物质。而中等极性的吸附剂则对上述两种情况都具有吸附能力。,35,三、大孔网状吸附剂的应用特点,吸附：选择合适的孔径：孔径等于溶质分子直径之6倍比较合适。水溶液中，一般分子量越大，极性越弱，吸附量就越大。无机盐会使吸附量增大溶液的pH,36,解吸,常用低级醇、酮或其水溶液解吸.解吸溶剂能使大孔网状聚合物吸附剂溶胀;选用溶剂应容易溶解吸附物。对弱酸性物质可用碱来解吸，弱碱性物质可用酸来解吸 吸附在高浓度盐类溶液中，用水洗能解吸下来。,37,四、大孔网状吸附剂的实验操作,（一）、大孔吸附树脂的选择1、预处理 甲醇、乙醇、丙酮洗涤至洗出液加水不浑浊2、静态吸附 动态吸
9、附,38,（二）、吸附条件选择 1、样品浓度 2、pH值、盐浓度 3、流速（吸附时间）（三）、洗涤（四）、洗脱 1、流动相选择 2、流速,39,五、大孔网状聚合物吸附剂应用,应用广泛，如四环素、土霉素、红霉素、林可霉素、麦迪霉素、赤霉素、维生素B12及头孢菌素C等,40,红霉素的分离纯化,41,SIP-1300大孔吸附剂分离纯化超氧化物歧化酶,42,头孢菌素C,43,思考题,1、盐析法与有机溶剂沉淀法比较，其优点是（）A.分辨率高 B.变性作用小 C.杂质易除 D.沉淀易分离2、当向蛋白质纯溶液中加入中性盐时，蛋白质溶解度（）A增大 B.减小 C.先增大，后减小 D.先减小，后增大3、盐析常数Ks是生物大分子的特征常数，它与下列哪种因素关系密切。（）A.盐浓度 B.盐种类 C.溶质浓度 D介质pH 4、用大网格高聚物吸附剂吸附的弱酸性物质，一般用下列哪种溶液洗脱（）A.水 B.高盐 C.低pH D.高pH5、“类似物容易吸附类似物”的原则,一般极性吸附剂适宜于从何种溶剂中吸附极性物质（）A.极性溶剂 B.非极性溶剂 C.水 D.溶剂,
