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1、示差分光光度法测定水样中非那西汀的含量,指导教师 权新军,实验目的,1、通过标准曲线的绘制及样品溶液的测定，了解示差分光光度法的原理及特点2、掌握UV-2450型紫外-可见分光光度计的使用方法,实验原理,一、紫外可见分光光度法基本原理二、分光光度计基本组成及UV-2450型紫外可见分光光度计操作规程三、示差分光光度法的原理,一、紫外可见分光光度法基本原理,紫外-可见分光光度法是指利用紫外-可见吸收光谱对物质进行定性和定量分析的方法。紫外-可见吸收光谱属于分子吸收光谱，由分子的外层电子跃迁产生。其中 可见吸收光谱：波长范围400750 nm，主要用于有色物质的定量分析。紫外吸收光谱：波长范围20
2、0400 nm（近紫外区），可用于结构鉴定和定量分析。,物质的结构不同，紫外吸收光谱的形状不同，据此可进行结构鉴定。例如:不饱和脂肪族化合物在175200 nm处有吸收。芳香族化合物的苯环在紫外区有三个吸收峰，max=250 nm，。,定量分析依据朗伯-比尔定律：,Alg（I0/It)=b c 式中A：吸光度；b：液层厚度，通常以cm为单位；c：溶液的摩尔浓度，单位molL；：摩尔吸光系数，单位Lmolcm 朗伯-比尔定律是紫外-可见分光光度吸收法定量分析的依据。,二、分光光度计的基本组成及UV-2450型紫外可见分光光度计操作规程,UV-2450型紫外可见分光光度计,操作规程简介,1.打开电
3、源开关，打开电脑及软件，进入自检界面。2.单击确定开始自检，自检过程中不得打开样品室盖。3.完成自检后，单击波长扫描按钮，选择“方式”，设定波长及测量方式（Abs）4.将参比溶液放入参比池中，另一参比液放入样品池第一池内。点击自动清零键清零。5.取出样品池中参比，放入测量液，进行全波长扫描，找出最大吸收波长。6.取出测量液，将标准曲线的五个试样放入测量池中，打开定量分析界面，设定波长和测量方式Abs，测定各点吸收值，绘图。7.放入待测样品，测定。,三、示差分光光度法原理,普通分光光度法 一般测定痕量组分 参比溶液浓度为零,即朗伯比耳定律只适用于稀溶液。,示差分光光度法 用于测定浓度较高组分 用
4、浓度稍低于待测溶液的标准溶液 作参比,设：待测溶液浓度为cx，标准溶液浓度为cs(cs cx)。则：Ax=b cx As=b cs x s=b(cx cs）=bc 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差(也叫相对吸光度Ar)。,示差法测得的吸光度A与c呈直线关系。由标准曲线上查得相应的c值，则待测溶液浓度cx：cx=cs+c,示差法标尺扩展原理,普通法：cs的T=10%；cx的T=5%示差法：cs 做参比，调T=100%则：cx的T=50%标尺扩展10倍,1.示差分光光度法的测定步骤：1）采用浓度为cs的标准溶液为参比溶液;2）测定一系列c已知的标准溶液的相对吸光度(A)；3
5、）绘制A-c工作曲线；4）由测得试样溶液得相对吸光度A，从工作曲线上求出c，根据cxcs+c即可求出试样浓度cx,试剂与器材,UV-2450紫外-可见分光光度计，石英比色皿（1cm），容量瓶（50ml），移液管（1ml、10ml），未知样品液。,实验方法及步骤,1.标准溶液的配制 非那西汀标准溶液（100g/ml）：准确称取非那西汀0.0500g于小烧杯中，加少许乙醇溶解，转移到500ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀备用2.吸收曲线绘制 移取5.00ml非那西汀标准溶液于50ml容量瓶中，蒸馏水稀释至刻度，摇匀。以蒸馏水为空白，进行全波长扫描，绘制吸收曲线，找出最大波长。,3.绘制工作曲线 分别取非那西汀标准溶液5mL，6mL，7mL，8mL，9mL，10mL分别于6 个50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，以第一个溶液为参比，于最大波长处测定吸光度值，以A对c作图绘制工作曲线。4.样品测定 取一定体积样品溶液（浓度在40-60g/mL）于50mL容量瓶中，于最大吸收波长处测定吸光度值。,数据处理,1.绘制非那西汀的吸收曲线2.绘制工作曲线3.在工作曲线上查出未知样中非那西汀的浓度c 4.计算未知样中非那西汀的浓度cx 5.完成实验报告并交给指导教师。,
