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1、血液非细胞成分的制备,武威市中心血站 席孝霞,血 液 的 组 成,血液非细胞成分的制备原理,1.物理方法：离心法 2.化学方法：低温-乙醇法,二、新鲜冰冻血浆（FFP）,血液采集后6 8小时内将血浆分离出并在-30OC以下用具有风冷装置的速冻冰箱或在酒精浴中速冻而制成，也可用-196OC液氮快速冻结。FFP中几乎含有血浆中的全部蛋白成分和凝血因子,包括不稳定的第V因子和第因子。提醒医生注意的是未经特殊处理的血浆中还含有各种抗体和一些致病物质如肝炎病毒。1ml新鲜正常人血浆大约含有1单位的凝血因子活性。新鲜冰冻血浆在-18 OC以下可以保存1年。它主要用于各种凝血因子缺乏引起的出血同时需要补充血
2、容量或血浆蛋白的患者；肝衰竭伴获得性凝血障碍者；肝移植；口服香豆素类药物过量引起出血者；抗凝血酶III缺乏；血栓性血小板减少性紫癜（TTP）；免疫缺陷综合征等。应按ABO血型相容原则输注，不需做交叉配血。,血浆三联袋分离示意图,新鲜冰冻血浆的制备方法及设备,（1）原料全血的要求：全血采集后68小时内制备（2）塑料袋要求：双联袋、三联袋、四联袋均可。（3）离心机：带温度控制（022），带减速装置，离心力要求不小于5000g，带时间控制。（4）联袋全血平衡后对称装入离心机中。（5）离心条件设置：5000g，温度26。（6）离心后的血液应轻轻拿出，放入分浆夹内或用虹吸方式将血浆分出。,新鲜冰冻血浆（
3、FFP）,新鲜冰冻血浆的保存和运输：制备新鲜冰冻血浆的注意事项：,三、冷沉淀的制备,1.冷沉淀的制备方法。冷沉淀是目前临床常用的一种血液成分，是新鲜冰冻血浆在15的条件下不溶解的白色沉淀物，其主要含有凝血因子，纤维蛋白原、vW因子（vonWillebrandfactor）、凝血因子，以及纤维结合蛋白等成分。由于其中含有一些不稳定的凝血因子，特别是F因子，轻易降低或失去活性，从而影响冷沉淀的质量。1.1原料血浆：采集全血后6h-8h内，离心分离制备的新鲜冰冻血浆，放入50冰箱快速速冻后，置入20以下的冰箱保存。冷冻24h以上的FFP用于制备冷沉淀,三、冷沉淀的制备,1.2快速融化离心法：将FFP
4、放入（31）冰冻血浆解冻箱的恒温循环水槽中，待FFP融化到一半多时取出血浆袋，将还未融化的血浆块捏散成碎冰块，加速其溶解，然后继续放入恒温循环水槽中融化，待剩少许碎冰块时，及时取出，3000g，0，10min离心，分离出上层血浆，下层（255）ml血浆和白色沉淀物即为冷沉淀，将其快速置于低温速度冰箱中冻结。1.3水浴虹吸法：将联袋装有FFP袋子置于（31）冰冻血浆解冻箱的恒温循环水槽中，另一空袋悬于箱外，两袋之间有一定的落差。FFP融化时，由于虹吸的作用，融化的血浆流入空袋中，剩余的（255）ml的有白色结晶颗粒的血浆块即为冷沉淀，将其快速置于低温速度冰箱中冻结。,三、冷沉淀的制备,2.制备冷
5、沉淀的性质：3.保存和运输：4.注意事项：,四、血浆蛋白制品,血浆蛋白的浓度是血浆和组织液的主要区别所在，因为血浆蛋白的分子很大，不能透过毛细血管管壁。在生物化学研究中，曾经用盐析法将血浆蛋白分为白蛋白、球蛋白与纤维蛋白原三大类。以后，用电泳法又将白蛋白区分为白蛋白和前白蛋白，将球蛋白区分为a1-、a2-、a3-、-、-球蛋白等。用其他方法，如免疫电泳，还可以将血浆蛋白作更进一步的区分。这说明血浆蛋白包括了很多分子大小和结构都不相同的蛋白质。分类方法血浆蛋白是血浆中最主要的固体成分，含量为6080g/L，血浆蛋白质种类繁多，功能各异。用不同的分离方法可将血浆蛋白质分为不同的种类。最初用盐析法只
6、是将血浆蛋白分为白蛋白和球蛋白，后来用分段盐析法可细分为白蛋白、拟球蛋白、优球蛋白和纤维蛋白等组分。用醋酸纤维薄膜电泳法可分为白蛋白、1球蛋白、2球蛋白、球蛋白和-球蛋白等5条区带，而用分辨力较高的聚丙烯酰胺凝脉电泳法则可分为30多条区带。用等电聚焦电泳与聚丙烯酰胺电泳组合的双向电泳，分辨力更高，可将血浆蛋白分成一百余种。目前临床较多采用简便快速的醋酸纤维薄膜电泳法。近年来已知的血浆蛋白质有二百多种，有些蛋白质的功能尚未阐明。按功能分类血浆蛋白质多种多样，各种血浆蛋白有其独特的功能，除按分离方法分类外，目前亦采用功能分类法。可分为以下8类：凝血系统蛋白质，包括12种凝血固子(除Ca2+外)。纤溶系统蛋白质，包括纤溶酶原、纤溶酶、激活剂及抑制剂等。补体系统蛋白质。免疫球蛋白。脂蛋白。血浆蛋白酶抑制剂，包括酶原激活抑制剂、血液凝固抑制剂、纤溶酶抑制剂、激肽释放抑制剂、内源性蛋白酶及其他蛋白酶抑制剂。载体蛋白。未知功能的血浆蛋白质。,
