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1、实验 6 离子和药物对蟾蜍心脏的影响 蛙心灌流,心脏具有自动节律性。离体心脏用理化性质近似于血浆的生理溶液进行灌流，以保持其新陈代谢顺利进行，这种节律性可维持较长时间。心脏正常节律性活动有赖于内外环境的相对稳定，因此，改变灌流液成分，心脏的活动便会产生一定的变化。,实验目的及意义,心肌细胞生物电活动的基础是 钠、钾、钙等跨膜离子流。,实验目的及意义,细胞外液中这些离子浓度的变 化会对心脏的活动产生不同的 影响。,调节心脏活动的神经、体液因素对心脏活动的直接作用是神经递质或激素与心肌细胞相应受体结合，导致心脏活动的增强或减弱。交感神经兴奋时，其末梢释放递质去甲肾上腺素，作用于心肌细胞上的受体，使
2、心肌收缩力增强；迷走神经兴奋时，其末梢释放递质乙酰胆碱，作用于心肌细胞膜上的M受体，对心肌细胞起抑制作用，使心肌的自律性降低。特异的受体阻断剂能阻断相应的递质与受体的相互作用。,实验目的及意义,学习离体蛙心的制备及其灌流方法。观察钙、钾等离子，异丙肾上腺素、乙酰胆碱、阿托品、普萘洛尔等药物对心脏活动的影响。,实验目的及意义,实验对象与器材,蟾蜍（雄性），两栖类手术器械，八木氏套管，蛙心灌流架，蛙心夹，万能滑轮，换能器，铁支架，蛙板林格溶液，4CaCl2，4KCl，0.01肾上腺素，0.01乙酰胆碱（Ach），0.1%普萘洛尔，0.1%阿托品,八木氏套管,万能滑轮,实验步骤,离体蛙心的制备 暴露
3、心脏：取一只蟾蜍，双毁髓后背位固定于蛙板上。剪开胸腹部皮肤、肌肉，剪断左右乌喙骨和锁骨。将整个胸腔暴露。将胸腺、心包膜、动脉膜、肝系膜去除干净，辨认心脏结构及9条重要血管的位置。,实验步骤,离体蛙心的制备血管结扎：结扎右主动脉：在右主动脉下穿过两根线，分别结扎，中间剪断。总结扎线：左右肝静脉和左右肺静脉之间穿双线，其中一条线的一端自左主动脉下方，向动物胸腔左上方穿出，与另一端在动物胸腔左上方打一个松结，将心室拉至胸腔右下侧，当心房收缩上提时于胸腔左上侧位置结扎。将两侧前腔静脉、左右肺静脉结扎在内，从结扎线以外剪断。注意远离静脉窦。,实验步骤,离体蛙心的制备插管：左肝静脉插管：在左右肝静脉和后腔
4、静脉下穿线，打一个松结，在左肝静脉远心端沿向心方向剪开一个楔形切口（大小约为管径的1/2），将装满灌流液的静脉插管（粗管）插入左肝静脉，见蛙心膨胀变白后结扎线扣。用灌流液将心脏内血液完全洗出。左主动脉插管：在左主动脉弓下穿线，打一个松结，在动脉管壁远心端剪一个楔形切口（大小约为管径的1/2），插入动脉插管（细管），见有灌流液流出后结扎线扣。注意动脉插管勿插入主动脉圆锥。,蟾蜍心脏示意图,游离心脏：在左肝静脉和左主动脉结扎线外端剪断，并剪掉与心脏相连的其他组织，游离心脏。离体心脏安放：将离体心脏安放于蛙心灌流架上，调整灌流液液面及动脉插管出口的高度，使灌流液既能在心脏收缩时顺利搏出心脏，又能形成
5、循环。,实验步骤,蛙心灌流装置A：动脉插管 B：静脉插管,*标本与仪器连接：用蛙心夹在心脏舒张期夹住心尖部，蛙心夹上的棉线通过万能滑轮转换后与张力换能器相连。,实验步骤,斯氏插管法,斯氏插管法仪器连接,实验步骤,观察离子对心脏活动的影响：打开软件选择实验（实验循环蛙心灌流）开始示波 开始记录 记录正常心搏曲线。向静脉插管内林格溶液中滴加4CaCl2 2滴，观察心搏出现变化后立即将灌流液全部吸出，用新鲜林格溶液换洗23遍后，在静脉插管内注入新鲜林格溶液，使心脏恢复正常搏动；滴加4CaCl2 6滴，观察心搏出现变化后立即换洗；滴加4KCl 12滴，观察心搏出现变化后立即换洗。,正常心搏曲线 4Ca
6、Cl2，2滴 一旦出现现象立即换洗，2-3次正常心搏曲线4CaCl2，6滴 一旦出现现象立即换洗，2-3次正常心搏曲线4KCl，1-2滴 一旦出现现象立即换洗，2-3次正常心搏曲线,实验步骤,观察离子对心脏活动的影响：,实验步骤,观察药物对心脏活动的影响：记录正常心搏曲线；滴加0.01%肾上腺素1滴，观察心搏情况，出现变化后立即换洗；滴加0.1%普萘洛尔1滴，约1分钟后滴加0.01%肾上腺素 1滴，观察心搏变化，与前一步进行比较后，立即换洗；滴加0.01乙酰胆碱1滴，观察心搏出现变化后立即换洗；滴加0.1%阿托品1滴，约1分钟后滴加0.01%乙酰胆碱1滴，观察心搏变化，与前一步进行比较后，立即
7、换洗。注意：每次更换灌流液时，液面应保持一致。,实验步骤 观察药物对心脏活动的影响：,正常心搏曲线 0.01%肾上腺素，1滴 一旦出现现象立即换洗，2-3次 正常心搏曲线 0.1%普萘洛尔，1滴 约1分钟后0.01%肾上腺素，1滴 与前一步比较换洗，2-3次 正常心搏曲线,正常心搏曲线 0.01乙酰胆碱，1滴 一旦出现现象立即换洗，2-3次 正常心搏曲线 0.1%阿托品，1滴 约1分钟后0.01%乙酰胆碱，1滴 与前一步比较换洗，2-3次 正常心搏曲线,关键技术,血管的识别及结扎插管技术游离心脏与换能器的连接灌流液作用时间及更换时间的把握,本实验需掌握的实验技术,蟾蜍离体心脏的制备蟾蜍心脏插管
8、技术,注意事项,制备蛙心标本时，勿伤及静脉窦。心脏插管时，切勿戳穿心壁及血管壁。各种液体滴管要专用，不可混用。每加一种溶液要用滴管混匀，以免所加溶液浮在上面，不易进入心脏。蛙心插管内液面应保持一定高度，以1.5 cm 为宜。张力换能器应向下倾斜，以免液体进入换能器。滴加试剂后，一旦出现变化应立即用新鲜林格溶液换洗23次，以免心肌受损，而且必须待心脏恢复正常后方能进行下一步实验，以形成前后对照。滴加药品和换取新鲜林格溶液时，须及时标记，以便观察分析。化学药物作用不明显时，可再适量滴加，密切观察药物剂量添加后的实验结果。随时用林格溶液润湿蛙心表面。,思考与探索,设计一个新的、更简单的离体心脏插管方法。设计一个兔心离体灌流的方法。设计一个实验，用于了解某种药物对心房肌收缩力与节律的影响。,下次实验内容 影响血液凝固的因素 人体常用生理指标的测定 请提前预习。,
