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1、附件4水发产品中甲醛的快速检测(KJ201904)1范围本方法规定了水发产品及其浸泡液中甲醛的快速检测方法。本方法适用于银鱼、就鱼、牛肚、竹笋等水发产品及其浸泡液中甲醛的快速测定。AHMT法(比色卡法)2原理试样中的甲醛经提取后，在碱性条件下与4-氨基-3-联氨-5-筑基-1,2,4.三氮杂茂(AHMT)发生缩合，再被高碘酸钾氧化成6-筑基-S-三氮杂茂4,3-b-S-四氮杂苯的紫红色络合物，其颜色的深浅在一定范围内与甲醛含量成正相关，通过色阶卡进行目视比色，对试样中甲醛进行定性判定。3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GBZT6682规定的二级水。3.1 试剂3.1.1
2、氢氧化钾(KoH)。3.1.2 盐酸(HCl)3.1.3 亚铁氨化钾(K4Fe(CN)6SH2O)。3.1.4 乙酸锌(C4H64Zn2H2O)。3.1.5 冰乙酸(C2H4O2)。3.1.6 乙二胺四乙酸二钠(G0H4N28Na22H2O)。3.1.7 高碘酸钾(KIoQ。3.1.8 4-氨基-3-联氨-5-筑基-1,2,4-三氮杂茂(C2H6N6S,AHMT)。3.1.9 氢氧化钾溶液(5molL)：称取280.5g氢氧化钾(3.1.1),用水溶解并定容至IOoomL,混匀。3.1.10 氢氧化钾溶液(0.2molL)：称取11.22g氢氧化钾(3.1.1),用水溶解并定容至1000mL,
3、混匀。3.1.11 盐酸溶液(0.5molL)：量取41mL盐酸(3.1.2),用水稀释并定容至100OmL,混匀。3.1.12 亚铁鼠化钾溶液（106gL）：称取10.6g亚铁制化钾（3.1.3）,用水溶解并定容至100mL,混匀。3.1.13 乙酸锌溶液（220gL）：称取22g乙酸锌（3.1.4）,加入3mL冰乙酸（3.1.5）溶解，用水稀释并定容至100mL,混匀。3.1.14 乙二胺四乙酸二钠溶液（100gZL）：称取IOg乙二胺四乙酸二钠（3.1.6）,用5molL氢氧化钾溶液（3.1.9）溶解，并定容至100mL,混匀。3.1.15 AHMT溶液（5gL）：称取0.5g4-氨基-
4、3-联氨-5-毓基-1,2,3三氮杂茂（3.1.8）,用0.5mol/L盐酸溶液（3.1.11）溶解，并定容至IoOmL,混匀后置于棕色瓶中，有效期6个月。3.1.16 高碘酸钾溶液（15gL）：称取1.5g高碘酸钾（3.1.7）,用0.2mol/L氢氧化钾溶液（3.1.10）溶解，并定容至IOomL,混匀。3.2 参考物质甲醛参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1。表1甲醛参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量甲醛Formaldehyde50-(X)-0HCHO30.033.3 标准溶液的配制3
5、.3.1 甲醛标准储备液（100gmL）：安甑瓶封装，冷藏、避光、干燥条件下保存。使用前恢复至室温，摇匀备用。安甑瓶打开后应一次性使用完毕。3.3.2 甲醛标准工作液（10gmL）：吸取甲醛标准储备液（100gmL）（3.3.1）1.0mL,置于IOmL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，临用前配制。3.4 材料3.4.1 甲醛快速检测试剂盒（AHMT法比色卡法）：适用基质为水发产品及其浸泡液，需在阴凉、干燥、避光条件下保存。3.4.2 滤纸：中速定性滤纸。4仪器和设备4.1 移液器：200L,1mL,5mL。4.2 涡旋混合器。4.3 电子天平或手持式天平：感量为0.01g。4.4 离心机：转速
6、N4000rmin4.5 环境条件：温度I5C35C,湿度080%。5分析步骤5.1 试样制备取适量有代表性试样的可食部分或浸泡液，固体试样剪碎混匀，液体试样需充分混匀。5.2 试样的提取准确称取试样1g(精确至0.01g)或吸取试样LomL,置于15mL离心管中，加水定容至IOmL,涡旋提取1min,静置5min,取上清液作为提取液(如上清液浑浊,加入ImL亚铁弱化钾溶液(3.1.12)和ImL乙酸锌溶液(3.1.13),涡旋混匀，4000r/min离心5min或滤纸过漉，取上清液或滤液作为提取液)。5.3 测定步骤准确移取提取液2mL于5mL离心管中，加入0.4mL乙二胺四乙酸二钠溶液(3
7、.1.14)和0.4mLAHMT溶液(3.1.15),涡旋混匀后静置10min,再加入0.1mL高碘酸钾溶液(3.1.16),涡旋混匀后静置5min,立即与标准色阶卡目视比色，1Omin内判读结果。进行平行试验，两次测定结果应一致，即显色结果无肉眼可辨识差异。5.4 质控试验每批试样应同时进行空白试验和加标质控试验。用色阶卡和质控试验同时对检测结果进行控制。5.4.1 空白试验称取空白试样1g(精确至0.01g)或吸取空白试样LOmL,按照5.2和5.3步骤与试样同法操作。5.4.2加标质控试验准确称取空白试样1g(精确至0.(Hg)或吸取空白试样LOmL,置于15mL离心管中，加入0.5mL
8、甲醛标准工作液(10gmL)(3.3.2),使试样中甲醛含量为5mgkg,按照5.2和5.3步骤与试样同法操作。6结果判定要求观察检测管中样液颜色，与标准色阶卡比较判读试样中甲醛的含量。颜色浅于检出限(5mgkg)则为阴性试样；颜色接近或深于5mg/kg则为阳性试样。色阶卡见图1。甲醛标准比色卡（mg/kg或mg/L）05102050100200图I甲醛标准色阶卡质控试验要求：空白试验测定结果应为阴性，质控试验测定结果应与比色卡第二点（5mgkg或mgL）颜色一致。7结论由于色阶卡目视判读存在一定误差，为尽量避免出现假阴性结果，读数时遵循就高不就低的原则。当测定结果为阳性时，应对结果进行确证。
9、8性能指标8.1 检测限5mgkg或mg/Lo8.2 灵敏度灵敏度应295%。8.3 特异性特异性应85%8.4 假阴性率假阴性率应05%。8.5 假阳性率假阳性率应W15%。注：性能指标计算方法见附录ACAHMT法（分光光度法）9原理试样中的甲醛经提取后，在碱性条件下与4氨基3联氨5-貌基2,4.三氮杂茂（AHMT）发生缩合，再被高碘酸钾氧化成6.臻基S-三氮杂茂4,3-b-S四氮杂苯的紫红色络合物，其颜色的深浅在一定范围内与甲醛含量成正相关，用分光光度计在55Onm处测定吸光度值，与标准系列比较定量，得到试样中甲醛的含量。10试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6
10、682规定的二级水。10.1 试剂同3.1。10.2 参考物质4同3.2。10.3 标准溶液的配制同3.3。10.4 材料10.4.1 甲醛快速检测试剂盒（AHMT法分光光度法）：适用基质为水发产品及其浸泡液，需在阴凉、干燥、避光条件下保存。10.4.2 滤纸：中速定性滤纸。11仪器和设备11.1 移液器：200L,1mL,5mL。11.2 涡旋混合器。11.3 电子天平或手持式天平：感量为0.01g。11.4 离心机：转速N4000r/min。11.5 分光光度计或相应商品化测定仪。11.6 环境条件：温度15C35C,湿度580%。12分析步骤12.1 试样制备同5.1。12.2 试样的提
11、取同5.2。12.3 测定步骤准确移取提取液（12.2）2mL置于5mL离心管中，另准确吸取10gmL的甲醛标准工作液（3.3.2）0mL、0.1mL0.2mL0.4mL0.6mL、0.8mL、1.0mL（相当于0pg、1pg、2pg、4pg、6pg、8pg、10g甲醛）分别置于5mL带刻度的具塞刻度试管中，加水定容至2mL,涡旋混匀。于标准管和试样管中分别加入0.4mL乙二胺四乙酸二钠溶液（3.1.14）0.4mLAHMT溶液（3.1.15）,涡旋混匀静置IOmin,再加入0.1mL高碘酸钾溶液（3.1.16）,静置5min后用Icm比色杯，以零管调节零点，于波长550nm处测定吸光度，绘制
12、标准曲线比较。同时做试剂空白。12.4 质控试验每批试样应同时进行空白试验和加标质控试验。12.4.1 空白试验称取空白试样1g（精确至001g）或吸取空白试样LOmL,按照12.2和12.3步骤与试样同法操作。12.4.2 加标质控试验准确称取空白试样1g（精确至0.01g）或吸取空白试样1.0mL,置于15mL离心管中，力口入0.5mL甲醛标准工作液（10gmL）（3.3.2）,使试样中甲醛含量为5mgkg,按照12.2和12.3步骤与试样同法操作。13分析结果的表述13.1结果计算试样中甲醛的含量按式（1）计算：X=3-A）XI（1）mx匕1000V式中：X试样中甲醛的含量，单位为亳克每
13、千克或亳克每升（mgkg或mgL）；P由标准曲线得到的试样提取液中甲醛的含量，单位为微克（g）;Po由标准曲线得到的空白提取液中甲醛的含量，单位为微克（g）;V试样定容体积，单位为亳升（mL）；V,测定用试样体积，单位为亳升（mL）；加一试样的取样量，单位为克或亳升（g或mL）；1000单位换算系数。计算结果保留两位有效数字。13.2 结果判定当测定结果5mgkg或mg/L时，判定为阳性，阳性结果的试样需要重复检验2次以上。13.3 质量控制要求空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果回收率应次0%。14结论当测定结果为阳性时，应对结果进行确证。15性能指标15.1 检测限5mgkg或m
14、g/L。15.2 灵敏度灵敏度应295%。15.3 特异性特异性应85%15.4 假阴性率假阴性率应W5%。15.5 假阳性率假阳性率应15%.注：性能指标计算方法见附录A。乙酰丙酮法（分光光度法）16原理试样中的甲醛经提取后，在沸水浴条件下与乙酰丙酮发生反应，生成黄色物质，其颜色的深浅在一定范围内与甲醛含量成正相关，用分光光度计在413nm处测定吸光度值，与标准系列比较定量，得到试样中甲醛的含量。17试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GBXT6682规定的二级水。17.1 试剂17.1.1 无水乙酸钠（CFhCOONa）。17.1.2 乙酰丙酮（C5H8O2）017.1.
15、3 乙酰丙酮溶液：称取25.0g无水乙酸钠（17.1.1）溶于适量水中，移入IoOmL容量瓶中，加0.4OmL乙酰丙酮（17.1.2）和3.0mL冰乙酸（3.1.5）,加水定容至刻度，混匀，移至棕色试剂瓶中，2C8C保存，有效期1个月。17.2 参考物质同3.2。17.3 标准溶液配制同3.3。17.4 材料17.4.1 甲醛快速检测试剂盒（乙酰丙酮法-分光光度法）：适用基质为水发产品及其浸泡液，需在阴凉、干燥、避光条件下保存。17.4.2 滤纸：中速定性滤纸。18仪器和设备18.1 移液器：200L,1mL,5mL。18.2 涡旋混合器。18.3 电子天平或手持式天平：感量为0.01g。18
16、.4 离心机：转速为000rmin.18.5 水浴锅。18.6 分光光度计或相应商品化测定仪。18.7 环境条件：温度15C35C,湿度W80%。19分析步骤19.1 试样制备同5.1。19.2 试样的提取同5.2。19.3 测定步骤准确移取提取液（19.2）2mL置于5mL离心管中，另准确吸取10gmL的甲醛标准工作液（3.3.2）0mL、0.1mL、0.2mL0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL（相当于0pg、1g2pg、4g6pg、8pg、10g甲醛）分别置于5mL带刻度的具塞刻度试管中，加水定容至2mL,涡旋混匀。于标准管和试样管中分别加入0.2mL乙酰丙酮溶液（17.1.3
17、）涡旋混匀后沸水浴5min,取出冷却至室温后用Icm比色杯，以零管调节零点，于波长413nm处测定吸光度，绘制标准曲线比较。同时做试剂空白。19.4 质控试验每批试样应同时进行空白试验和加标质控试验。19.4.1 空白试验称取空白试样Ig（精确至0.0Ig）或吸取空白试样LOmL,按照19.2和19.3步骤与试样同法操作。19.4.2 加标质控试验准确称取空白试样1g（精确至0.0Ig）或吸取空白试样LOmL,置于15mL离心管中，加入0.5mL甲醛标准工作液（10gmL）（3.3.2）,使试样中甲醛含量为5mgkg,按照19.2和19.3步骤与试样同法操作。20分析结果的表述20.1 结果计
18、算同13.1o20.2 结果判定同13.2。20.3 质量控制要求同13.3。21结论当测定结果为阳性时，应对结果进行确证。22性能指标22.1 检测限5mgkg或mg/L。22.2 灵敏度灵敏度应295%。22.3 特异性特异性应85%,22.4 假阴性率假阴性率应W5%。22.5 假阳性率假阳性率应Wl5%。注：性能指标计算方法见附录A。23其他本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不作限定。方法使用者在使用替代试剂、试剂盒或操作步骤前，须对其进行考察，应满足本方法规定的各项性能指标。本方法参比标准为SOT3025-2006水产品中甲醛的测定液相色谱法
19、或其他现行有效的甲醛检测标准。附录A快速检测方法性能指标计算表表A.I性能指标计算表试样情况a检测结果b总数阳性阴性阳性CNllN12Nl=N11+N12阴性N21N22N2=N21+N22总数N.1=N11+N12N.2=N21+N22N=NI.+N2.或N.1+N.2显著性差异(2)2=(N12-N211-1)2(N12+N21),自由度(df)=1灵敏度(P+,%)p+=NllNL特异性(p，%)p-=N22N2.假阴性率(pf-,%)Pf-=NI2/NL=100-灵敏度假阳性率(pf+,%)pf+=N21N2=100特异性相对准确度，%d(N11+N22)(N1.N2.)注：a由参比方
20、法检验得到的结果或者试样中实际的公议值结果；b由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果。用于确认方法时，结果N5mgkg时，判定为阳性(仅用于计算性能指标)；C本方法规定：用于计算灵敏度和假阴性率的阳性试样，由参比方法检验得到的结果回收率应60%N：任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。例如：Nll表示第一行，第一列，Nl.表示所有的第一行，N.2表示所有的第二列；N12表示第一行，第二列。11为方法的检测结果相对准确性的结果，与一致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。本方法负责起草单位：南京工业大学(国家轻工业食品质量监督检测南京站)验证单位：南京市产品质量监督检验院、原门市食品药品质量检验研窕院、江西省药品检验检测研究院主要起草人：熊晓辉、汪开银、聂小林、肖有玉、骆和东、章红
