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1、3.1 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测,1.农药残留测试的相关知识点2.农药残留的快速检测技术3.多功能食品安全检测仪的使用,一、背 景,2001年，杭州的空心菜有机磷中毒事件。2003年，南京蔬菜有机磷残留导致中毒的事件。2007年，福建大田发生有机磷污染水源导致中毒事件。2008年1月，日本发生饺子中毒事件，该饺子被化验出含甲胺磷残留2008年1月9日，中国决定停止甲胺磷、对硫磷等五种高毒农药的生产、流通和使用。2011年3月，河南毒韭菜事件有机磷中毒(超标农药残留主要是甲拌磷),二、概念,有机磷农药是一类含有磷原子的有机酯类化合物，在体内与胆碱酯酶形成磷酸化胆碱酯酶，使胆
2、碱酯酶活性受抑制，而产生毒性作用的一类农药的总称。大多为磷酸酯类或硫代磷酸酯类。有机磷类农药包括：甲胺磷、水胺硫磷、乐果、敌百虫、敌敌畏、氧化乐果、马拉硫磷、甲基异柳磷、辛硫磷、甲基对硫磷、甲拌磷、乙酰甲胺磷、久效磷、杀螟硫磷、倍硫磷、毒死蜱等。氨基甲酸酯类农药包括：叶蝉散、速灭威、西维因、涕灭威、克百威（呋喃丹）、异丙威、灭多威等。,低毒类:LD50:10005000mg/kg 马拉硫磷（LD50：大鼠经口）,中度毒类：LD50:1001000mg/kg 乐果、乙硫磷、敌百虫,高毒类：LD50:10100mg/kg 甲基对硫磷、甲胺磷、氧化乐果,剧毒类：LD5010mg/kg 甲拌磷、对硫磷
3、、内吸磷,分类,四、性质,五、农药进入人体的方式,有机磷农药进入体内途径,职业性农药中毒主要由皮肤污染引起。吸收的有机磷农药在体内分布于各器官，其中以肝脏含量最大，脑内含量则取决于农药穿透脑屏障的能力。,GB/T5009.199-2003,本标准规定了由酶抑制法和速测法测定蔬菜中有机磷和氨基甲酸酚类农药残留量的快速检验方法。,速测卡法（纸片法）原理 胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯（红色）水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。,酶抑制率法（分光光度法）原理 在一定条件下，有
4、机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412 nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯 类农药的存在。抑制率50%不超标；50%超标。,实验：蔬菜农药残留快速检测技术-仪器法,试剂：1.缓冲液：pH8.0缓冲液2.酶试剂：乙酰胆碱酯3.底物：碘化乙酰硫代胆碱4.显色剂注意：1.以上配好的试剂应冷藏保存，并于半月内用完。2.试剂从冰箱中取出后需放置1h以上，接近室温再使用。,实验：蔬菜农药
5、残留快速检测技术-仪器法,1、样品处理 选取有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，去掉不可食部分后称取蔬菜试样，剪成1 cm左右碎片。取样品2g，放入烧杯或提取瓶中，加入10mL缓冲液，超声波振荡3 min，静置35 min，待用。样品不可用水冲洗，取不同植株叶片的叶尖部样品。,样品处理,叶类菜取叶尖部位,样品处理,剪成指甲盖大小,样品处理,加10ml缓冲液至刚好浸没样品,样品处理,超声波震荡三分钟,实验：蔬菜农药残留快速检测技术-仪器法,2、空白测试 先于试管中加入2.5 mL缓冲液，再加入0.1 mL酶液、0.1 mL显色剂。摇匀后于35 放置10 min以上（每批样品的控制时间应一致）。于“
6、检测”状态下选择“农药残留”项目，按“确认”键，选择样品种类中的“空白测”项，按“确认”键。将放置10min的样液倒入比色皿中，加入0.1 mL低物摇匀，吹吸混匀马上放入仪器中，按“检测”键，进行空白检测，记录反应3 min，过程中请勿打开盖子。,实验：蔬菜农药残留快速检测技术-仪器法,3、样品溶液测定 先于试管中加入2.5 mL样品提取液，再加入0.1 mL酶液、0.1 mL显色剂。摇匀后于35 放置10 min以上。于“检测”状态下选择“农药残留”项目，按“确认”键，选择样品种类中的“蔬菜”项，按“确认”键。将放置10min的样液倒入比色皿中，加入0.1 mL低物摇匀，吹吸混匀 马上放入仪
7、器中，按“检测”键，进行空白检测，记录反应3 min，过程中请勿打开盖子。样品测试结束后仪器显示值为样品的农药残留抑制率。,实验：蔬菜农药残留快速检测技术-仪器法,4.结果计算 抑制率（%）=式中 A0空白对照液反应3 min吸光度的变化值；At样品溶液反应3 min吸光度的变化值。,5.结果判定当蔬菜样品提取液对酶的抑制率大于50%时，表示样品中有高剂量的有机磷或氨基甲酸酯类农药残留，可判定样品为阳性结果，对检验结果阳性的样品需重复检验两次以上。,实验：蔬菜农药残留快速检测技术-仪器法,学生实验,所需仪器：1.试管：2支2.比色皿：2支3.样品杯：2支4.剪刀：1把5.一次性吸管：2根分组：两人一组，轮次进行,
