光学显微镜操作技术实验复习.ppt

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1、考试说明对实验与探究能力的相关要求,能独立完成生物学教材所规定的生物实验:理解实验目的、原理、方法和操作步骤,掌握相关的操作技能,并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合的运用。,光学显微镜操作技术,一、教材有关光学显微镜操作技术的实验,二、观察根尖分生组织细胞的有丝分裂,1、实验 目的:,制备洋葱根尖的临时装片,熟练使用高倍显微镜。,2、实验 原理:,3、材料 用具:,洋葱,质量分数10%的盐酸,质量分数0.01g/ml的龙胆紫溶液(或醋酸洋红溶液),光学显微镜,盖玻片,载玻片,培养皿2个,剪刀,镊子,滴管。,观察植物细胞有丝分裂过程,描述观察到的处于不同 分裂时期的细胞形态,绘制植物细胞有丝

2、分裂简图。,4、方法步骤:,5、实验现象:,6、实验结论:,7、注意事项:,描述观察到的处于不同分裂时期的细胞形态,绘制植物细胞有丝分裂简图,制作洋葱根尖细胞分裂临时装片的操作程序是,解离、漂洗、染色、制片,三、有关光学显微镜操作技术实验的 一般方法,1、实验目的:,2、实验原理:,5、实验现象:,6、实验结论:,7、注意事项:,3、材料用具:,掌握实验方法和技能,观察物质:,获取知识:,观察结构:,染色,静态-染色,活体,染色原理及方法,原则,4、方法步骤:,文字、绘图等形式,实验现象与实验目的相结合,保护人员、显微镜安全,提高实验观察质量,能独立完成生物学教材所规定的生物实验:理解实验目的

3、、原理、方法和操作步骤,掌握相关的操作技能,并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合的运用。,四、光学显微镜操作技术实验方法和技能的综合运用,资料:植物叶片表皮上分布着大量的气孔,气孔结构如图所示。当组成气孔的细胞(保卫细胞)吸水后,会膨胀变形,气孔开启。反之细胞失水收缩,气孔关闭。现提供放置一小段时间的菠菜、清水、浓盐水、盖玻片、载玻片、显微镜、吸水纸、滴管、镊子等材料用具,请设计一个实验,证明气孔具有开启和关闭的功能。要求写出实验步骤、预测实验结果并做出解释。,2、实验原理:,1、实验目的:,3、材料用具:,组成气孔的保卫细胞吸水后,会膨胀变形,气孔开启。反之细胞失水收缩,气孔关闭。,证明气

4、孔具有开启和关闭的功能。,放置一小段时间的菠菜、清水、浓盐水、盖玻片、载玻片、显微镜、吸水纸、滴管、镊子等。,资料:植物叶片表皮上分布着大量的气孔,气孔结构如图所示。当组成气孔的细胞(保卫细胞)吸水后,会膨胀变形,气孔开启。反之细胞失水收缩,气孔关闭。现提供放置一小段时间的菠菜、清水、浓盐水、盖玻片、载玻片、显微镜、吸水纸、滴管、镊子等材料用具,请设计一个实验,证明气孔具有开启和关闭的功能。要求写出实验步骤、预测实验结果并做出解释。,4、方法步骤:,放置一小段时间的菠菜叶,连续观察气孔的变化,并作记录。,临时装片的制作,净片滴水取材展平盖片染色吸水,观察,加盐水,5、预期实验结果(现象)及解释

5、:,在清水中气孔开启:,因为当细胞液浓度大于细胞外溶液的浓度时,保卫细胞吸水膨胀变形,气孔开启。,在浓盐水中气孔关闭:,因为当细胞液浓度小于细胞外溶液的浓度时,保卫细胞失水收缩,气孔关闭。,气孔具有开启和关闭的功能,6、实验结论:,7、注意事项:,随堂练习,1、某学生在显微镜下观察花生子叶的切片,当转动细准焦螺旋时,有一部分细胞看得清晰,另一部分细胞较模糊,这是由于()A、反光镜未调节好 B、标本切得厚薄不均C、细调节器未调节好 D、显微镜物镜损坏2某一理想的图象位于视野的左下方,若想将其移到视野中央,标本的移动方向是:()A、左上B、右上C、左下D、右下,B,C,3用显微镜观察植物叶片细胞,

6、低倍显微镜视野与高倍显微镜视野相比、其特点是:A、亮,细胞数目多,形体小 B、暗,细胞数目多,形体小C、亮,细胞数目多,形体大 D、暗,细胞数目多,形体大,A,4使用显微高倍镜观察的顺序是顺、逆时针转动细准焦螺旋,直到调清物象为止 转动转换器,使高倍物镜对准通光孔在低倍镜下看清物象,要把目标移到视野中央A、B、C、D、,B,1、染色一般原理:,2、常见染色剂:,苏丹染液、(苏丹染液)、碘液、甲基绿-派洛宁(吡罗红)染液、健那绿染液、质量分数0.01g/ml龙胆紫溶液、醋酸洋红溶液等。,染色原理及方法,染色剂与细胞内物质亲和或发生显色反应,步骤1:临时装片制作的一般方法,净,防气泡、防污染,预处

7、理、时间、部位、大小、方法,切、刮、挑、撕、剪,浸入,倾斜、慢放,方法、部位、数量,引流、重复,平展单层无气泡,染色均匀防污染,净片,滴水,取材,展平,盖片,染色,吸水,步骤2:使用光学显微镜观察的一般方法,1、先低倍显微镜观察,取镜放置对光夹片调焦移片,2、再高倍显微镜观察,低倍镜选好目标调节清晰转换高倍镜 调焦调光,观察DNA和RNA在细胞中的分布,1、实验原理:(1)真核细胞的DNA主要分布在细胞核内,RNA主要分布在细胞质中。(2)甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿对DNA亲和力强,使DNA显现出绿色,而吡罗红对RNA的亲和力强,使RNA呈现出红色。用甲基绿、

8、吡罗红的混合染色剂将细胞染色,可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。(3)盐酸的作用 盐酸能改变细胞膜的通透性,加速染色剂的跨膜运输;盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离,便于DNA与染色剂的结合。,2、实验目的:初步掌握观察DNA和RNA在细胞中分布的方法3、实验选材:(1)选用的实验材料既要容易获得,又要便于观察;(2)常用的观察材料有人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞、肝脏细胞(为避免原有颜色的干扰,不可使用紫色表皮细胞)(3)取材要点 取口腔上皮细胞之前,应先漱口,以避免装片中出现太多的杂质;取洋葱表皮细胞时,尽量避免材料上带有叶肉组织细胞。取动物肝脏细胞要涂一薄层,4、主要步骤(以

9、观察口腔上皮细胞为例)(1)取材 滴:在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液;刮:用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下 涂:将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中 烘:将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火 焰上烘干。(2)水解 解:将烘干的载玻片放入装有30ml质量分数为 8%的盐酸的小烧杯中,进行材料的水解;保:将小烧杯放入装有30温水的大烧杯中保 温5分钟。,(3)冲洗涂片 冲:用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片10秒钟;吸:用吸水纸吸去载玻片上的水分。(4)染色 染:用2滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上染色5分钟;吸:吸去多余染色剂;盖:盖上盖玻片。(5)观察 低:在低倍物镜

10、下,寻找染色均匀,色泽浅的区域,移至视野中央,将物像调节清晰;高:转到高倍物镜,调节细准焦螺旋,观察细胞核和细胞质的染色情况。,随堂练习,1、洋葱根尖细胞的遗传物质存在于()A 细胞核B 细胞核、线粒体C 细胞核、叶绿体D 细胞核、叶绿体、线粒体2、关于DNA和RNA在口腔上皮细胞分布的叙述,正确的是()A DNA和RNA大部分位于细胞核中B DNA和RNA大部分位于细胞质中C DNA大部分位于细胞质中,RNA大部分位于细胞核中D DNA大部分位于细胞核中,RNA大部分位于细胞质中,B,D,3、观察DNA和RNA在细胞中的分布时,下列哪项操作是正确的()A 染色时先用甲基绿溶液染色,再滴加吡罗

11、红染液B 将涂片用8%盐酸处理后,接着用染色剂染色C 观察时应选择染色均匀、色泽较浅的区域D 先用低倍物镜找到较清晰的细胞,然后换上高倍物镜4、在处理洋葱根尖细胞时,加入8%盐酸的目的不包括()A 改变细胞膜通透性,加速染色剂进入细胞B 使染色体中的DNA与蛋白质分离C 杀死细胞,有利于DNA与染色剂结合D 水解DNA,破坏DNA分子结构,C,D,用高倍镜观察线粒体和叶绿体,实验原理:叶绿体的辨认依据:叶绿体是绿色的,呈扁平的椭圆球形或球形。线粒体辨认依据:线粒体的形态多样,有短棒状、圆球状、线形、哑铃形等。健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞染料,可以使活细胞中线粒体呈现蓝绿色。,实验目的:使用高倍镜观察叶绿体和线粒体的形态分布实验材料:观察叶绿体时选用:藓类的叶、黑藻的叶。取这些材料的原因是:叶子薄而小,叶绿体清楚,可取整个小叶直接制片,所以作为实验的首选材料。观察线粒体用口腔上皮细胞观察胞质环流以叶绿体作为标志物,随堂练习,1、叶绿体会随着细胞质流动而流动,下列操作中不属于加速黑藻细胞细胞质流动的方法是:A.放在光下培养 B.放在2025的水中C.煮沸 D.切伤部分叶片,C,讲练测 P19 例4,

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