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1、学习情境三放线菌发酵制药,发 酵 制 药,子学习情境3.3 链霉素发酵,任务一 发 酵 准 备,一、发酵罐的清洗,发酵罐的清洗 从接种孔加入70L左右的清水，启动搅拌，转速为100r/min左右，用蒸汽加热清水至121左右，搅拌30min左右，以此清洗发酵罐。清洗完毕，利用空气压力排出洗水，并用空气吹干发酵罐。,二、发酵设备检查,检查项目：管路连接 阀门 密闭性 仪表校正,三、发酵设备灭菌,发酵罐灭菌（空消）灭菌压力：0.1470.18MPa，4560min。注意事项：空消后，先用无菌空气保压，灭菌的培养基、相关物料输入罐内后，打开冷却系统进行冷却。,附属设备的灭菌,分空气过滤器：发酵罐灭菌之
2、前灭菌，灭菌后空气吹干备用。补料系统：补料管路：与补料罐同时灭菌，保温时间1小时。消沫剂系统：蒸汽压力0.15MPa，保温30分钟。消沫剂管路：与补料罐同时灭菌，保温时间1小时。移种管路：蒸汽压力0.300.45MPa，保温时间1小时。,任务二 种子制备,一、培养基配制,1、孢子培养基 葡萄糖 蛋白胨 豌豆浸汁,2、种子培养基 黄豆饼粉 葡萄糖(NH4)2SO4 CaCO3,3、发酵培养基 黄豆饼粉 葡萄糖 玉米浆 CaCO3 磷酸盐(NH4)2SO4,二、培养基灭菌,典型的分批发酵工艺流程图,分批灭菌的注意事项 各路蒸汽进口要畅通，防止短路逆流；罐内液体翻动要剧烈，以使罐内物料达到均一的灭菌
3、温度。排气量不宜过大，以节约蒸汽。灭菌将要结束时，应立即引入无菌空气以保持罐压，然后开夹套或蛇管冷却，以避免罐压迅速下降产生负压而吸入外界空气，或引起发酵罐破坏。在引入无菌空气前，罐内压力必须低于过滤器压力，否则培养基将倒流入过滤器。,连续灭菌流程,三、孢子制备,1、接种 无菌条件，接种斜面。,接种操作程序见下图。注意：整个实验操作过程都要非常小心，不要碰翻酒精灯，以免烧伤。,（1）用左手大姆指、食指和无名指夹住菌种试管和待接种和斜面试管，右手拧松棉塞、不取下。,（2）右手拿接种环，在火焰上烧灼灭菌，特别是箍处。,（3）火焰边取下两个棉塞，不能放下；烧灼管口一周。,（4）将接种环伸入试管内，冷
4、却后，轻轻挑取少量菌体，立即将接种环抽出。,（6）抽出接种环后，烧管口，塞棉塞，接种环灭菌。,（5）火焰旁将沾有菌种的接种环迅速伸到斜面培养基的底部，由里向外画蛇形细线，线要画得细些。,2、培养 将接种后的试管放入恒温箱内，27培养6d7d。,四、种子培养,种子扩大培养流程图1、2-保藏种子 3-斜面 4-摇瓶 5-茄子瓶 6-固体培养 7、8-种子罐 9-发酵罐,实验室种子培养的方法：液体培养法（三角瓶摇床振荡或转式培养）；,液体深层培养：目前几乎所有的好气发酵均采用此法,生产车间种子培养的方法,种子培养条件,温度 通气 搅拌 消泡,任务三 发酵生产,一、发酵参数控制,1、温度的控制,灰色链
5、霉菌对温度敏感，合适的培养温度为26.528。,2、pH的控制,适合菌丝生长的pH为6.57.0。适合链霉素合成的pH为6.87.3。pH低于6.0或高于7.5，对链霉素的合成不利。,3、氧的控制,链霉菌的临界氧浓度：10-3mol/ml溶氧要大于该浓度，能保证较高的发酵单位。,二、接种,从种子罐接种,三、补料控制,补料的内容（1）葡萄糖（2）硫酸铵（3）氨水,四、取样,取样目的 通过定时取样获得培养过程的状态参数，以观察发酵的进行。取样方法 打开取样管，弃去残留发酵液，收集新鲜发酵液。取样结束，取样管口通入蒸汽5min，灭菌。,任务四 发酵结束,一、发酵液的处理,1、菌体的分离方法（1）离心分离 管式高速离心机、碟片式离心机（2）过滤 真空过滤机、板框过滤机,2、细胞破碎 草酸或磷酸处理。,二、发酵罐的清洗,发酵结束，取出发酵液和各种电极，将发酵罐在121，灭菌15min。充分清洗发酵罐内部。,
