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1、维生素C的定量测定-2，6-二氯酚靛酚法,一、实验目的二、实验原理 三、器材仪器和主要试剂四、实验操作五、思考题,一、实验目的,从食品原料等提取维生素C、脱色 2,6-二氯酚靛酚钠(蓝色)滴定、计算,二、实验原理,染料2,6二氯靛酚的颜色反应表现两种特性,一氧化还原状态,氧化态为深蓝色,还原态变为无色;二介质的酸度影响,在碱性溶液中呈深蓝色,在酸性介质中呈浅红色。用蓝色的碱性染料标准溶液,对含维生素C的酸性浸出液进行氧化还原滴定,染料被还原为无色,当到达滴定终点时,多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色,由染料用量计算样品中还原型抗坏血酸的含量。,当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定液
2、呈淡红色，即为终点。,VC还原型,脱氢VC氧化型,2,6-二氯酚靛酚氧化型(酸性溶液中,呈玫瑰色),2,6-二氯酚靛酚还原型(无色),三、器材仪器和主要试剂,偏磷酸:2%溶液(W/V)*,盐酸:2%溶液(W/V)抗坏血酸标准溶液(0.2mg/ml):称取50mg(准确至0.1mg)抗坏血酸,溶于浸提剂 中并稀至250ml。现配现用。2,6二氯靛酚(2,6二氯靛酚吲哚酚钠盐)溶液:称取碳酸氢钠52mg溶解在200ml 热蒸馏水中,然后称取2,6二氯靛酚50mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却定容至 250ml,过滤至棕色瓶内,保存在冰箱中。每次使用前,用标准抗坏血酸标定其滴定度。,标定,吸取1ml
3、抗坏血酸标准溶液于50ml锥形瓶中,加入10ml浸提剂,摇匀,用2,6二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色15s不褪色为止。同时,另取10ml浸提剂做空白试验。滴定度(mg/ml)cv/V1V2 s每毫升2,6二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数;C抗坏血酸的浓度,mg/ml;V吸取抗坏血酸的体积,ml;V1滴定抗坏血酸溶液所用2,6二氯靛酚溶液的体积,ml;V2滴定空白所用2,6二氯靛酚溶液的体积,ml。白陶土(或称高岭土),对维生素C无吸附性。本实验结果为:0.088 mg/ml,四、实验操作,1、提取:桔子肉10克(猕猴桃或枣5克)于研钵 加2%HCl约10ml 充分研磨 提取液通过两层纱布滤入
4、50ml容量瓶2%HCl定容到50ml。2、脱色:液干燥锥形瓶 加白陶土一匙(用于吸附生物样品中的色素)充分振摇（约10分钟）过滤 脱色滤液。3、滴定:1）样品滴定：取三角烧瓶两只，各加脱色滤液10ml，用2,6-二氯酚靛酚钠(蓝色)滴定至出现微红色并保持5秒钟不褪色为止，记下二份样品滴定所用的染液毫升数（滴定过程宜迅速，不超过2分钟），取其平均值-VA；2）空白滴定用10ml 2%HCl代替脱色滤液，2,6-二氯酚靛酚钠(蓝色)滴定至出现微红色并保持5秒钟不褪色为止，记下滴定所用的染液毫升数-VB；,计算,维生素（mg/100g）样品（VA-VB）SV100/WD式中：VA：滴定样品用去2,
5、6-二氯酚靛酚钠的平均ml数VB：滴定空白用去2,6-二氯酚靛酚钠的ml数 S：每毫升2,6-二氯酚靛酚钠溶液相当于维生素的mg数V：样品提取液总毫升（定容后的ml数,50或100 ml）D：滴定时所取的样品提取液ml数(10 ml)W：样品的重量（g）,1、为了测得准确的维生素C浓度，实验过程中应注意哪些操作步骤？为什么？,（1）在操作过程中某些步骤一定要快，避免Vc的氧化，因为Vc具有还原性，还要向样品中加入草酸溶液，保护Vc；(2)对于Vc标准溶液要现用现配，尽量精确，避免Vc氧化，避免因为标准溶液的误差造成的误差；(3)整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过2min。滴定所用的染料不应小于1ml或多于4ml，如果样品含维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。(3)本实验必须在酸性条件下进行。在此条件下，干扰物反应进行得很慢,五、思考题,1、指出本实验采用的定量测定维生素C的方法有何优缺点？2、简述维生素C的生理意义。,
