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1、实验一 果蝇的观察和饲养,厦门大学生命科学学院,原理和目的,果蝇英文俗名fruit fly或vinegar fly，果蝇广泛地存在于全球温带及热带气候区，而且由于其主食为腐烂的水果，因此在人类的栖息地内如果园，菜市场等地区内皆可见其踪迹。除了南北极外，目前至少有1000个以上的果蝇物种被发现，大部分的物种以腐烂的水果或植物体为食，少部分则只取用真菌，树液或花粉为其食物。,原理和目的,黑腹果蝇(Drosophila)是双翅目昆虫特点：生活史短，易饲养，繁殖快，染色体少，突变型多，个体小 是一种很好的遗传学实验材料，是一种模式生物,背景资料,以果蝇作为遗传学研究的材料，利用突变株研究基因和性状之间
2、的关系已近一百年，至今，各种研究遗传学的工具已达完善的地步，果蝇提供我们对今日的遗传学的知识有其不可磨灭的贡献；从1980年初，Drs.C.Nesslein-Volhard和E.Weichaus以果蝇作为发育生物学的模式动物，利用其完备的遗传研究工具来探讨基因是如何调控动物体胚胎的发育，也带动了其它模式生物（线虫、斑马鱼、小鼠和拟南芥等）的研究，且有非常具体的成果。,果蝇的生活史,图1 果蝇的生活史1.卵 2.一龄幼虫 3.二龄幼虫 4.三龄幼虫 5.蛹 6.成虫,果蝇营养需求,在不供给食物的情况下，果蝇可存活50小时左右，在不供给水的情况下，果蝇无法活过一天。蛹期果蝇在其正常5天生活周期下可
3、取食其体重35倍之食物，雌果蝇在产卵期每日可取用与其体重等重之食物。果蝇成虫的食物内需有醣类，而蛹期果蝇则可只依赖酵母即可生育。,果蝇培养基配制,取三角瓶以适当大小之棉塞密闭开口，置入高温高压灭菌釜内，以121，1.5大气压消毒12至15分钟。消毒完成后，待灭菌釜内压力降至常压后开启釜门使其半开，再以灭菌釜干燥培养瓶之棉塞30分钟，完成后取出使其冷却备用。,果蝇培养基配方,添加丙酸作为防腐剂,果蝇培养操作,果蝇可利用乙醚麻醉，以方便试验操作。麻醉方法取一麻醉瓶，瓶口应与培养瓶大小相仿，取一棉花塞，在塞入瓶口的一面滴加3滴乙醚，将果蝇转入麻醉瓶内，翻转麻醉瓶使其瓶口朝上，迅速将滴有适量乙醚的棉塞
4、盖住麻醉瓶口，约一分钟左右果蝇倒卧于瓶底，即可将果蝇倒出进行操作。注意：过度麻醉将导致果蝇死亡。,果蝇操作方法,搬移果蝇至新培养瓶或麻醉瓶 取新培养瓶一瓶，将棉塞略为松动，放置于右手侧，取欲转移之果蝇培养瓶置于左手侧，以左手握住瓶颈，两指轻扣棉塞顶部，以右手轻拍瓶底使果蝇掉落于培养基表面，将培养瓶置于左手侧，拔起棉塞以左手两指夹住棉塞外端，再将置于右手侧之新培养瓶棉塞拔起，以右手两指夹住棉塞外端，再以右手将新培养瓶倒扣于旧培养瓶上，再以左手握住两瓶口相接处，翻转使新培养瓶位于下方，然后以右手掌心轻拍新培养瓶瓶底，使果蝇掉落于新培养瓶瓶底，然后迅速盖上各瓶棉塞。,果蝇操作方法,进行杂交试验时，为
5、避免麻醉的果蝇直接掉落于培养基表面而粘着于培养基表面致死，可将培养瓶横放，将麻醉的果蝇倒于瓶壁，待其苏醒后再将培养瓶正立。果蝇计数取一白纸，沿对角线对折然后展平，平置于桌面，将麻醉之果蝇倒于对角线折痕上，以尺、毛笔或解剖针拨弄果蝇使其均匀分散于对角线折痕上，然后沿对角线将雌雄果蝇分类拨入各侧。,果蝇操作方法,再麻醉观察或计数过程中，果蝇可能苏醒，可准备一玻璃培养皿，内以胶带贴一小块棉球，滴入适量乙醚，培养皿口朝下置于一旁备用，如见果蝇翻身走动可将培养皿口朝下，盖于果蝇上方待其麻醉后再移开。,果蝇操作方法,果蝇型态观察果蝇具有丰富的外表型态差异，包括眼色、眼形、翅形，刚毛形状与数目，请利用上课所
6、提供的材料，比对下列图形观察。此外性别区分为进行果蝇杂交试验所必须，务必熟悉。,雌雄果蝇主要特征,雌果蝇个体较大腹部末端较尖腹部背面有五条黑条纹外生殖器较简单，有阴道板和肛上板等结构腹部腹面有6个腹片无性梳,雄果蝇个体较小腹部末端较钝腹部背面有三条黑条纹，最后一条极宽，并延伸到腹面外生殖器较复杂，有生殖弧、肛上板、阴茎等结构腹部腹面有4个腹片前腿跗节上有性梳,果蝇雌雄外形判别（体形大小）,雌 雄,腹部体节数目：雌果蝇6节，腹部底部为产卵管，呈现圆锥状凸出。,腹部体节数目：雄果蝇4节，腹部底部为交尾器，呈现黑色圆形外观。,雄果蝇在前肢先端第二节具有性梳,野生型：体色灰，翅膀呈圆卵型，静止时平放交
7、叉重叠，长度约为腹部长度的两倍,双翅目：一对翅膀+一对平衡棒,野生型：翅膀有横隔脉,野生型：眼睛颜色为砖红色，饱满圆形,野生型：刚毛头胸部以及复眼的周围具有平直，先端略弯的长型粗黑硬毛,果蝇常见突变性状,突变型：黄体（y）,突变型：白眼（w）,突变型：朱红眼（v）,突变型：墨黑眼（se）,突变型：棒眼（B）,突变型：小翅（m）,突变型：卷翅（Cy）,突变型：残翅（vg）,突变型：短翅（dp）,突变型：无横隔脉（cv）,突变型：短刚毛（Sb）,突变型：叉毛（f）,器具和药品,器具 棉花、麻醉瓶、毛笔、滤纸、平皿、镊子、解剖镜等药品 乙醚、培养基,步骤和方法,果蝇生活史四个时期的观察果蝇成虫外形的观察和雌雄性鉴别突变型的诱变及观察分别挑取5对野生果蝇和5对白眼果蝇到空瓶中饲养，贴上标签，写明杂交组合、日期、实验者姓名。饲养两周后供下次实验使用,思考题,果蝇突变体可以如何得到？请列出几种方法，并设计实验尝试。,
