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1、第六章芳酸及其酯类药物的分析,Chemical structure&featureIdentificationDetection of specific impurities in,Analysis of Aromatic carboxylic acids&esters,Assay,Aspirin,Sodium aminosalicylate&Clofibrate,Aromatic carboxylic acids,水杨酸类,水杨酸 SAsalicylic acid,阿司匹林aspirin,对氨基水杨酸钠PAS-Na,贝诺酯benorilate,双水杨酯salsalate,苯甲酸类,羟苯乙酯e
2、thylparoben,丙磺舒 probenecid,苯甲酸benzoic acid,甲芬那酸 mefenamic acid,sodium benzoate,其他芳酸类,氯贝丁酯clofibrate,布洛芬ibuprofen,特点,均有苯环、羧酸或其酯水杨酸类和苯甲酸类结构中的羧基直接与苯环相连除了酸性基团外，各自具有本身的官能团分子中苯环、羧酸和取代基的相互影响，使芳酸的酸性强度各有不同,紫堇色,赭色,米黄色,鉴别,三氯化铁反应,碱式苯甲酸铁盐（赭色沉淀）加稀HCl，沉淀分解，生成游离,白色,布洛芬,重氮化偶合反应,具体方法见芳香胺类药物的鉴别氧化反应,异羟肟酸铁反应,甲芬那酸H2SO4深蓝
3、色,随即变为棕绿色,水解产物的反应,分解产物的反应,UV特征吸收IR吸收光谱,特殊杂质的由来与方法检查,Acetyl Salicylic Acid,副产物,SA,ASA,Aspirin,生产工艺,SA,溶液的澄清度酚类和酯类,其他副反应产生酯类,易碳化物,炽灼残渣重金属,PAS-Na,间氨基酚Ch.P 样品3.0g用乙醚提取，加入H2O，用HCl滴定液（0.02mol/L)滴定，生成杂质HCl（转溶入H2O相，甲基橙指示剂）。滴定液不得过0.30mlUSP HPLC法 C18 NaH2PO4(0.05mol/L)-Na2HPO4(0.05mol/L)-CH3OH(含氢氧化四丁基铵1.9g)(4
4、25：425：150)254nm检测内标：磺胺,羟苯乙酯 供试品自身对照法BP（1998）反相TLC 高低浓度对比法 取羟苯乙酯丙酮液1.0%和0.01%，2ul，254nm查荧光，前一个任何第二个斑点的大小和强度不应超过后一个。,a.杂质对照品法,方法：供试品供试品溶液杂质对照品对照品溶液,供试品,对照品,判断：供试品中所含杂质斑点不得超过相应的杂质对照斑点。优点：同一物质，同一Rf值比较，准确度高、直观性强。缺点：需要杂质对照品。,b.高低浓度对比法,方法：,判断：,供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液的主斑点（或荧光强度）,控制杂质斑点个数，控制杂质种类,氯贝丁酯,对氯酚（0.0025
5、%）挥发性杂质（0.5%）GC法5%SE-30 2m160，N2FID 杂质以归一化法求得,含量测定,酸碱滴定法 Acid-base titration method 以ASA及其制剂为例苯甲酸pKa 4.20 水杨酸pKa 2.98酸性较强,羧酸邻位-OH，吸电子基团，使酸性增加；并有氢键，更增加了其极性,因此，可采取直接滴定法,直接滴定法,pKa 36 的药物溶于中性醇,可直接用NaOH滴定pKa 69 的药物要用非水溶液滴定法,中性乙醇：对指示剂(酚酞)而言为中性，可消除滴定误差,乙醇作用：溶解ASA；防止ASA在水溶 液中滴定过程易水解,本法特点：简单,注意点：若SA不合格，不宜采用本
6、法,Aspirin 丙磺舒(Ch.P.BP.JP等)苯甲酸(Ch.P等)均采用本法,水解后剩余滴定法 Residual titration after hydrolysis,USP23方法：取本品约1.5g，精密称定，准确加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，水浴上煮沸15min，放冷，以酚酞为指示剂，用H2SO4液(0.25mol/L)滴定剩余的NaOH，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的NaOH液(0.5ml/L)相当于45.04mg的C9H9O4,剩余滴定时消耗酸量 V(ml)同时做空白试验，消耗酸量 V0(ml)Ch.P 00羟苯乙酯的Assay亦采用,反应物质之间的化学计
7、量关系,滴定度计算,0.5,两步滴定法 Two-step titration,用于Aspirin片测定片剂中有稳定剂,水解产物水杨酸SAHAc,枸橼酸Citric acid,酒石酸Trataric acid,为了避免这些酸类的干扰，采用两步滴定法,Ch.P.阿司匹林片,取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于阿司匹林0.3g)，置锥形瓶中，加中性乙醇(对酚酞指示剂显中性)20ml，振摇使ASA溶解，加酚酞指示液3滴，滴加NaOH液(0.1mol/L)至显粉红色，再精密加NaOH液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加热15min，并时时振摇，迅速放冷至室温，用H2SO4液(0.0
8、5mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正每1ml的NaOH液(0.1mol/L)相当于18.02mg的C9H8O4,第一步：NaOH滴定所有的酸：ASA，CA，TA，SA，HAc,第二步,放冷后，用H2SO4滴定液滴定剩余的NaOH V；空白滴定消耗H2SO4 V0；,(V0-V)H2SO4则为用于中和水解ASA所需的 NaOH,计算：称取10片重 1.8240g,CNaOH 0.1032mol/L,片粉重 0.5312g,C 0.05120mol/L,标示量 0.1g V 3.02ml V0 20.18ml,直接水解后 两步 滴定法 剩余滴定法 滴定法,优点 操作简便 水杨酸干扰少
9、结果准确，避免了游离 SA以及片剂 中稳定剂的 干扰,缺点 游离水杨酸 不能完全 不合格时结 排除干扰 果偏高,Ch.P 氯贝丁酯的Assay采用两步滴定法,双相滴定法 Titrimetry in two phases,Ch.P 2005用于苯甲酸钠的测定 苯甲酸钠为芳酸碱金属盐，易溶于水；苯甲酸不溶于水，不利于终点的正确判断 因此，利用苯甲酸能溶于有机溶剂的性质，采用双相滴定法,分出H2O层，置具塞锥形瓶，乙醚层用H2O 5ml洗涤，洗液并入锥形瓶，加乙醚20ml，继续用HCl滴定，至水层显持续的橙红色,柱分配色谱-紫外分光光度法Column Partition Chromatogr.,AS
10、A capsule 等制剂除用上述两步滴定法外，最好用色谱法，可以分离酸性杂质和辅料以及稳定剂等，经分离后同时测定ASA与SA 如USP用柱分配色谱-UV测定ASA Capsule,Column Partition Chromatography,CPC担 体：硅藻土(Celite 545)固定相：一定pH的缓冲水溶液流动相：与水不相混溶的有机溶剂(洗脱前必须先用水饱和),CPC-UV法测定ASA Capsule,SA测定供试液制备用CHCl3 50ml洗涤，弃去(洗去ASA)10ml冰HAc-水饱和乙醚液(110)(使紫色配位化合物被分解，SA析出)洗脱液收集于已盛有10ml甲醇和2滴HCl的
11、50ml量瓶中，继用30mlCHCl3洗，并稀释至刻度SA对照品溶液：75g/ml，取10ml 50ml量瓶中盛有：10ml甲醇，2滴HCl和10ml冰HAc-水饱和乙醚液(110)，CHCl3至刻度,测定：306nm测定供试液和SA对照品液,SA与试剂生成紫色水杨酸铁配位化合物，在柱上移动慢，带窄，色泽较深若有Fe3+洗下，黄色影响测定结果 消除干扰方法：迂底部拌有磷酸的硅藻土，生成不溶解的FePO4,A供试液 A对照品液,ASA+SA测定供试液制备洗脱 5,25mlCHCl3，弃去CHCl3洗脱 10ml冰HAc-CHCl3(110)*；85ml冰HAc-CHCl3(1100)，并稀释至1
12、00ml对照品溶液50g/ml 冰HAc-CHCl3(1100),CPC-UV法测定ASA Capsule,测定：280nm 空白：CHCl3,NaHCO3使ASA和SA成盐保留于柱上 用CHCl3洗脱的目的：去除中性或碱性杂质冰HAc酸化的目的：使ASA游离，易被 CHCl3洗脱,含量测定计算公式,所取胶囊细粉中ASA(mg),CPC技术的类型,利用固定相酸碱性的不同进行分离利用药物和固定相起化学反应而进行分离利用生成离子对进行层析分离单纯靠选择流动相进行分离,阿司匹林栓 Aspirin suppositories,测定法 咖啡因乙醇溶液4mg/ml,2.0ml,HPLC,血清中ASA&SA
13、的测定,色谱条件 C18 5m 1504.6mm 甲醇-水-正丁醇(30:20:1)经0.5 m 滤膜减压过滤后5 l H3PO4 超声脱气 237nm 内标：苯甲酸血清样品的处理血清样品100 l 加入HClO4(30%)50 l、不同浓度ASA&SA对照品稀释液、内标(各浓度均为10 g/ml混合2min离心进样,血清ASA，SA和内标物对照品色谱图,0.溶剂峰1.ASA2.内标物3.SA,样品预处理方法,样品方法血清中阿司匹林HClO4沉淀蛋白血浆中布洛芬甲醇沉淀蛋白尿中丙磺舒C8固相萃取柱,药物及其代谢产物从血浆或尿中分离的实验步骤,药物从蛋白结合或缀合物中释出蛋白变性：如应用三氯醋酸、HClO4、有机溶剂(甲醇、乙醇、丙酮、乙腈等)使蛋白沉淀盐酸水解酶消化法：最常使用蛋白水解酶中枯草菌溶素(一种细菌性蛋白分解酶，可在pH 7.011.0使肽键降解),
