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1、大实验三 米曲霉固体发酵制曲,1、学习固体发酵工艺 2、制备米曲霉固体曲，测定蛋白酶活力,实验目的要求,实 验 原 理,实 验 步 骤,1、制备麸皮固体培养基：25g麸皮，加15ml水（加水量40%60%），拌匀；装茄瓶。,2、灭菌：0.1Mpa 灭菌2030min，冷却至室温。,已培养好的米曲霉孢子斜面一支，加入约10ml无菌水，洗下孢子，制成孢子悬液。注意：勿使孢子飘落实验室,3、制备孢子悬液菌种：,实验步骤(continued),实验步骤(continued),每茄瓶加入孢子悬液2ml，抖动茄瓶，使孢子悬液与麸皮培养基混匀。,4、接种：,28培养4天其间，于接种2448h左右抖动茄瓶翻曲
2、一次观察记录菌丝生长及孢子形成情况,5、培养：,实验步骤(continued),另一次实验,实验步骤(continued),6、蛋白酶活力测定：,1）粗酶液制备：向一茄瓶中加入无菌水约100ml，浸泡固体曲1h；过滤得粗酶液。,2）倒平板：融化酪蛋白明胶双基质固体培养基，每人倒一平板。,实验步骤(continued),3）打孔：打孔器经酒精燃烧灭菌后，每平板打13孔，并在酒精灯火焰上稍稍加热打孔处，使孔周围的培养基微融，然后平放冷却。,4）加样：往孔内加入粗酶液适量（约100ul），可设对照。,实验步骤(continued),5）培养（反应）：将加样后的平板小心平端放入30培养箱，放置20小时
3、左右。,6）观察结果：可直接观察透明圈有无、测定透明圈直径；也可向平板滴加少量10%三氯乙酸，以增强观察效果。,实验结果,实验报告,1、实验原理、方法步骤、结果及分析 2、思考题,准 备：,1、10%三氯乙酸,2、双基质固体培养基（以对应的L-R组配制，每L-R组配400ml，分装3瓶）,配方：10g干酪素，10g明胶，18g琼脂，1000ml，pH7.0,配法：干酪素先用0.2N NaOH溶解，倒入热水中加热搅拌至完全溶解；适量1N HCl调至pH7.0；加入明胶和琼脂，继续加热至完全融化。,附：大实验四“苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis;B.t）杀虫剂液体摇瓶发酵”方案设计 研究内容：1）培养基组成对B.t芽孢形成的影响 2）通气状况对B.t芽孢形成的影响 以实验小组为单位，根据研究内容自行查阅资料，拟定实验方案，于下次实验课提交教师审阅、修改、确定实验方案。,
