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1、薄层色谱中应注意的问题,理想的色谱分离及准确的定量结果的前提是：-色谱条件标准化-操作技术规范化。,主要存在问题：,薄层板点样展开、展开室展开剂显色,一、薄层板,注意：无论使用手工铺板还是商品板，薄层 板都应均匀、并到达试验要求的分离 度。,二、点样,点样前检查完薄层板后，决定用点状点样（鉴别、检查）还是条带状点样（含量测定）。点样后必须将溶剂全部除去后再进行展开，但要避免高温加热，以免改变待测成分的性质。点样量过多会造成原点“超载”，展开剂产生“绕行”现象使斑点拖尾或重叠，使扫描峰形不对称或不能基线分离，并由于超载导致非线型的校正曲线，严重影响定量结果，降低准确度。注意：鉴别样溶解后，放入安
2、瓿瓶中而不要放在蒸发皿中。点样时必须注意勿损伤薄层表面。点样斑点干燥后再展开。样品的粘度要低，否则易扩散。鉴别分不清斑点，可在样中加标再点一点。,工作时的点样位置,三、展开、展开室,要注意展开室的-相对湿度不同，分离效果不同。-展开室预饱和，防止边缘效应。另一种方法是板子 未点样端放入展开剂中后迅速拿出再放入。-温度：有时温度降低，改善分离效果。-展距：过长，斑点扩散；过短，分离效果不好。-展开缸应相对应。10*20的板就用10*20的展开缸，-展开缸盖不宜凡士林，应为毛玻璃盖密封加重物。,控制相对湿度硫酸配制表,四、展开剂,注意每次展开时临用现配展开剂小比例展开剂用移液管准确加入展开剂中有氨
3、水时，如展开效果不好，应考虑氨水易挥发，用未开封的氨水重新配制展开剂。,五、显色,喷雾显色：注意雾滴均匀。浸渍显色 使用CAMAG的浸板器，需要设定浸板器抽出的速度和规定在显色剂中停留的时间。采用这种方法显色，由于浸渍条件可以精确地标准化，并且薄层各部位可以均匀地接触显色剂，因此对改善定量时的重现性极为有利，此外对环境保护也优于喷雾法，故常采用。浸完的板，要立刻小心擦干背面玻璃上残留的溶液后平放于通风橱中晾干后再加热。,苍术,供试品溶液的制备 取本品粉末0.5g，加正己烷2ml，超声处理15分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。对照药材溶液的制备 取苍术对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。,薄层
4、板：硅胶G自制板；固定相硅胶G 60（青岛海洋化工厂），黏合剂0.35%CMC-Na，厚度500m 10*20cm 色谱图-1烟台化学工业研究所TLC-G 10*20cm 色谱图-2MERCK-TLC-G 10*20cm 色谱图-3MERCK-HPTLC-G 10*10cm 色谱图-4MN-HPTLC-G 10*20cm 色谱图-5烟台化学工业研究所HPTLC-G 10*20cm 色谱图-6MN-TLC-G 20*20cm 色谱图-7,点样 供试液点样2l与对照液点样4l展开剂 石油醚（6090）乙酸乙酯(20：1)展开方式 展开缸用展开剂预平衡15分钟，上行展开，展距：8cm。显色 喷以5对
5、二甲氨基苯甲醛的10硫酸乙醇溶液，105加热至斑点显色清晰。检视 日光下。,手铺板 色谱图-1,国产烟台化学工业研究所TLC-G 色谱图-2,MERCK TLC-G 色谱图-3,MERACK HPTLC-G色谱图4,MN-HPTLC 色谱图-5,MN-TLC 色谱图-7,谢谢!,在分析工作中，洗净玻璃仪器是一个必须做的实验前的准备工作，也是一个技术性的工作。玻璃仪器特别是容量器皿在使用前必须充分洗涤，化学实验所用的玻璃仪器必须是十分洁净的，否则会影响实验效果，甚至导致实验失败。洗涤时应根据污物性质和实验要求选择不同方法。,1 玻璃仪器的洗涤,常用的烧杯、三角瓶、量筒等一般玻璃仪器洗涤时，先用自
6、来水冲去灰尘，再用毛刷蘸取洗衣粉等洗涤剂直接刷洗内外表面。刷洗时，使毛刷在盛有水的玻璃仪器里转动或上下移动，但用力不得过猛，否则容易把玻璃仪器（尤其是试管）底部损坏。最后用自来水冲洗干净，用纯化水淋洗三次。玻璃仪器洗净的标准是：内壁上附着的水膜均匀，既不聚成水滴，也不成股流下。滴定管、容量瓶和移液管等量器不用毛刷刷洗，根据油污程度选择适当的洗涤剂洗。,1 玻璃仪器的洗涤,附：几种常用洗涤液的配制和使用,铬酸洗涤液,（1）取工业硫酸100ml置于烧杯内，小心加热，然后慢慢加入5g研细的重铬酸钾粉末，边加边搅拌，继续加热至冒烟为止，待冷却后，贮存在有盖的玻璃容器内。（2）称取20g研细的重铬酸钾粉
7、末，置于20 ml水中加热溶解，冷却后缓缓加入360ml浓硫酸，待冷却后，贮存在有磨口塞的小口玻璃瓶中。,器皿用铬酸洗液时应特别小心。因铬酸洗液为强氧化剂，腐蚀性强，易烫伤皮肤，烧坏衣服；铬有毒，使用时应注意安全，绝对不能用口吸，只能用吸耳球。具体操作如下：（1）使用洗液前，必须先将器皿用自来水和毛刷洗涤，倾尽器皿内水，以免洗液被水稀释后降低洗涤的效率。,铬酸洗涤液,（2）用过的洗液不能随意乱倒，只要洗液未变为绿色，应倒回原瓶，以备下次再用。若洗液变为绿色，表明洗液已失去去污力，要倒入废液缸内，另行处理，决不能随便倒入下水道。（3）用洗液洗涤后的仪器，应用自来水冲净，用纯化水润洗内部3次。,铬
8、酸洗涤液,碱性高锰酸钾洗液,取高锰酸钾4g溶于少量水中，向该溶液中慢慢加入100ml 10%的NaOH溶液，混匀。用于洗涤被油或有机物沾污的器皿注意事项：1 洗后的器皿上如残留有MnO2沉淀物，可用盐酸或草酸洗液洗涤；2 洗液不应在所洗的器皿中长期存留。,草酸洗液,5-10g草酸溶于100ml水中，加入少量浓盐酸。用于洗涤KMnO4洗液洗涤后在玻璃器皿上产生的MnO2污迹。注意事项：必要时可加热使用。,碘碘化钾洗液,1g碘和2g碘化钾溶与水，加水稀释至100ml。用于洗涤AgNO3的褐色沾污物。,碱性乙醇洗液,6g氢氧化钠溶于6ml水中，加入50ml乙醇。用于洗涤被油脂或某些有机物沾污的器皿。
9、注意事项：1 洗液贮于胶塞瓶中，不宜久存，易失效；2 防止挥发和着火。,2 玻璃仪器的干燥,2.1 控干干燥法：又叫风干，是最简单易行的 干燥方法。2.2 烘干干燥法：将仪器放入烘箱中，控制温 度在105左右烘干。2.3 吹干干燥法：用电吹风快速吹干玻璃器皿。2.4 烤干干燥法：用酒精灯或红外灯加热烤干 玻璃器皿。,2 玻璃仪器的干燥,2.5 有机溶剂干燥：对一些不能加热的厚壁或有精密刻度的仪器，如试剂瓶、吸滤瓶、比色皿、容量瓶、滴定管和吸量管等，可加入少量易挥发且与水互溶的有机溶剂（如丙酮、无水乙醇等），转动仪器使溶剂浸润内壁后倒出。如此反复操作23次，便可借助残余溶剂的挥发将水分带走。如果
10、实验中急用干燥的玻璃仪器，也可用此法进行快速干燥。,3 样品的过滤处理,在药物分析过程中，样品的溶解必须充分，如过滤时要保证滤液的浓度不能被改变（定量分析），滤纸和滤器必须干燥，根据标准的要求弃去初滤液，取续滤液进行实验或做进一步稀释再进行实验。,3 样品的过滤处理,如果是为了制备样品（非定量），在使用过滤纸前，可用水湿润滤纸后再使用。因为干的滤纸不但过滤效果不佳，尤其是当样品体积较少时，滤纸会吸附样品，影响实验结果。,3 样品的过滤处理,3 样品的过滤处理,对于比较澄清的样品宜选用扇形滤纸折叠方式；对于比较浑浊的样品、胶状沉淀宜选用折扇型滤纸折叠方式。沉淀越细，所选用的滤纸宜越致密。国产滤纸
11、份快速、中速、慢速三种。慢速滤纸质地致密。,可以加热,加热时要使用试管夹,夹持试管的中上部。一般大试管直接加热，小试管用水浴加热。反应液体不超过试管容积的1/2，加热时，液体不得超过试管容积的1/3,管口向上倾斜约45,不准对着自己或他人,防止液体溅出伤人。,4 试管的使用,固体样品加热时生成气体（硫化氢、氨气）的操作，宜选用细的硬质试管。开始加热时，管口略向下倾斜,先使试管均匀受热后,再在固体样品处加热,防止试管受热不均或冷凝水倒流而炸裂。注意（1）该类型的反应生成的气体往往有刺激性 或毒性，操作时应在通风处或室外进行。（2）加热后的试管不能骤冷，防止破裂。（如不能将加热的试管放到冷的实验台
12、上）,4 试管的使用,酒精灯是实验室中常用的加热仪器。酒精的加入量不能超过酒精灯容积的2/3，也不能少于酒精灯容积的1/3；禁止向燃着的酒精灯添加酒精；禁止用燃着的酒精灯引燃另一只酒精灯；用完酒精灯后，必须用灯帽盖灭，不可用嘴去吹；应用外焰部分进行加热；不要碰倒酒精灯，万一洒出的酒精在桌上燃烧起来，不要惊慌，应立刻用湿抹布扑盖。,5 酒精灯的使用,5 酒精灯的使用,6 胶头滴管的使用,滴管在化学实验中经常使用，用于滴加少量的液体。吸取试液时先将滴管提出液面，挤出胶头中的空气，再把滴管伸入试液中吸取。向试管中滴液时，不能把滴管伸入试管中，以免滴管碰到试管壁而被污染。滴加试液要一滴一滴地加，并边加
13、边振摇（另有规定除外），注意观察现象。,6 胶头滴管的使用,吸有试剂的滴管不可倒置，以免试剂流入滴头，沾污试剂或腐蚀橡胶胶帽；不要把滴管放在实验台或其他地方，以免沾污滴管。用过的滴管要立即用清水冲洗干净（滴瓶上的滴管不要用水冲洗），以备再用。严禁用未经清洗的滴管再吸取别的试剂。,6 胶头滴管的使用,使用量筒量液时，应把量筒放在水平的桌面上，使眼睛的视线和液体凹液面的最低点在同一水平面上，读取和凹面相切的刻度即可。不可用手举起量筒看刻度。量取指定体积的液体时，应先倒入接近所需体积的液体，然后改用胶头滴管滴加。,7 量筒的使用,7 量筒的使用,用量筒量取液体体积是一种粗略的计量法，所以在使用中必须
14、选用合适的规格，不要用大量筒计量小体积，也不要用小量筒多次量取大体积的液体，否则都会引起较大的误差(误差可能达到10%）。我们必須在选择使用量筒前考虑此精确度是否可行。量筒是厚壁容器，绝不能用来加热或量取热的液体，也不能在其中溶解物质、稀释和混合液体，更不能用做反应容器。,7 量筒的使用,8 滴定分析仪器,8.1 滴定管,是滴定时用来准确测量流出的操作溶液体积的量器。常用的容量为25或50ml，最小刻度为0.1ml。分为酸式碱式两种。酸式滴定管用玻璃磨口活塞控制液滴的流出，盛放酸性和氧化性溶液。碱式滴定管的一端连接一乳胶管，管内有玻璃珠，用于控制液滴的流出，乳胶管下端接一尖嘴玻璃管。用于盛放碱
15、性和无氧化性溶液。,8.1.1 使用前的准备,酸式管：检查活塞与活塞套是否配合紧密，洁净，然后将活塞涂油。碱式管：检查乳胶管与玻璃珠是否完好。将滴定液直接倒入滴定管中。用滴定液将滴定管洗三次。倒入滴定液至0刻度以上。排气泡,8.1.2 滴定管操作,滴定时，将滴定管垂直夹在滴定管夹上。注意事项 酸管：不要向外拉活塞，以免漏液。碱管：不要用力捏玻璃球，不要使玻璃球 上下移动，不要捏玻璃球下部的乳 胶管。,8.1.3 滴定操作,滴定时要注意：1 摇瓶时，勿使瓶口接触滴定管，不能使溶液溅出。2 滴定时不能打开活塞任其自流。3 开始时，应边摇边滴，滴定速度可以稍快，但不要流成水线，要逐滴加入。4 接近终
16、点时，应改为加一滴摇几下。最后每加半滴就要摇几下，至溶液颜色出现明显的变化。,8.1.4 滴定管的读数,读数时可以在滴定管夹上，也可以取下，用拇指和食指捏住滴定管上无刻度处，两种方法都应使滴定管保持垂直，滴定管装满或放出溶液后，等1-2分钟，使附着在内壁的溶液流下来再读数。每次读数前检查是否挂水珠，管尖是否有气泡。读数要读到小数点后两位，即0.01ml。,8.2 吸管,用于准确量取小体积的液体。无分度吸管又称移液管，由于读数部分管径小，准确性高。但只能量取一定量的溶液。分度吸管又称吸量管，可以准确量取刻度范围内某一体积的溶液，但准确度差。,8.2.1 吸管的使用,吸管在使用前要洗到内壁和外壁的
17、下部都不挂水珠。移取溶液前，将管尖内外的水除去，用待吸溶液洗三次，溶液从下口放出。洗耳球紧接在管口上，吸取溶液，液面上升至标线以上,迅速移去洗耳球，右手食指按住管口，除去管外壁的溶液。,然后将容器倾斜45度，其内壁与管尖紧贴，移液管垂直，稍微松动右手食指，液面缓缓下降，平视刻度，到溶液弯月下缘与刻度相切，按紧食指。左手拿接受溶液的容器，倾斜45度，内壁紧贴管尖，松开 右手食指，溶液沿壁自由流下。下降到管尖后，等15秒取出移液管。,8.2.1 吸管的使用,如果吸量管的刻度刻到管尖并标有“吹”字，并且要从最上面的标线放至管尖时，溶液流到管尖后，从管口轻吹一下。在同一实验中尽可能使用同一吸量管的同一
18、段，尽可能使用上面部分。,8.2 吸管的使用,8.3 移液管的使用图文解释,1 应把吸球内的空气尽量挤压，并把吸球贴近移液管。,8.3 移液管的使用图文解释,2 释放吸球，并让它吸取烧杯中的液体。在吸取少量液体时要留心不要吸入空气，以免污染吸球。,8.3 移液管的使用图文解释,3 完成吸取后，尽快以手指代替吸球阻塞移液管。虽然没有硬性规定要用那一只手指，不过建议您用较灵活敏感的一只。,8.3 移液管的使用图文解释,4 释放液体时，试验人员应将试管侧放，让试管协助液体由移液管释放出来时，试验人员不应强行把有关液体排出。因为这样会影响检测结果。,8.3 移液管的使用图文解释,5 使用移液管时，因为
19、水份子有附着力，能依附在移液管内壁，因此，按正确的方法读取准确结果。,8.3 移液管的使用图文解释,6 另外，当把液体由移液管释放出来时，由于水份子的附着力，会有部份液体依附在移液管的管尖中，这是正常现象。,8.3 移液管的使用图文解释,7 最后，基于传染病、安全及健康理由，试验者应使用吸球吸收液体，而不应使用口部吮取。,试纸的种类很多。常用的有红色石蕊试纸、蓝色石蕊试纸、pH试纸、淀粉碘化钾试纸和品红试纸等。在使用试纸检验溶液的酸碱性时，一般先把一小块试纸放在表面皿或玻璃片上，用沾有待测溶液的玻璃棒点试纸的中部，观察颜色的变化，判断溶液的性质。,9 试纸的使用,在使用试纸检验气体的性质时，一
20、般先用纯化水把试纸润湿。粘在玻璃棒的一端，用玻璃棒把试纸放到盛有待测气体的试管口（注意不要接触），观察试纸的颜色变化情况来判断气体的性质。注意：使用pH试纸测定水溶液的pH值时，不 能用纯化水润湿试纸。,9 试纸的使用,用于搅拌溶液帮助固体物质的溶解，搅拌时不可用力过猛，勿碰击器壁，以防止破裂；过滤时引流液体；蒸发时搅拌液体防止局部过热而飞溅；蘸取少量液体，注意随时洗涤，不可将浸液的棒端放在桌面上，以防污染。,10 玻璃棒的使用,萃取是利用溶质在互不相溶的溶剂里的溶解度不同，用一种溶剂把溶质从它与另一种溶剂所组成的溶液中提取出来的方法。选择的萃取剂应符合下列要求：和原溶液中的溶剂互不相溶；对溶
21、质的溶解度要远大于原溶剂。,11 萃取,11 萃取,操作要点：在实验中用得最多的是水溶液中物质的萃取，最常使用的萃取器皿为分液漏斗。1、漏斗盖和活塞应用细绳系于漏斗上，防止滑出跌碎。,2、在使用分液漏斗前必须仔细检查：玻璃塞和活塞是否紧密配套。然后在活塞孔两边轻轻地抹上一层凡士林（或甘油淀润滑剂），插上活塞旋转一下，再看是否漏水。甘油淀润滑剂配制：取甘油22g，加入可溶性淀粉9g，加热至140，保持30分钟并不断搅拌，放冷，即得。,11 萃取,11 萃取,3、将漏斗固定，关好活塞，将要萃取的溶液和萃取溶剂依次从上口倒入分液漏斗，溶液量不能超过漏斗容积的2/3，塞好塞子。,11 萃取,4、振荡时
22、右手捏住漏斗上口的颈部，并用食指根部压紧塞子，以左手握住旋塞，同时用手指控制活塞，将漏斗倒转过来用力振荡。萃取时，振荡初期应放气数次，以免漏斗内气压过大。5、然后将分液漏斗静置，待液体分层后进行分液，分液时下层液体从漏斗下口放出，上层液体从上口倒出。将水溶液倒回分液漏斗，再用新的萃取剂萃取。如此重复35次。,11 萃取,11 萃取,值得注意的是：（1）分液时一定要尽可能分离干净，有时在两相间可能出现一些絮状物，也应同时放去（下层）。（2）要弄清哪一层是水溶液。若搞不清，可任取一层的少量液体，置于试管中，并滴少量自来水，若分为两层，说明该液体为有机相，若加水后不分层则是水溶液。,11 萃取,（3
23、)在萃取碱性液体或振摇漏斗过于激烈时，往往会使溶液发生乳化现象，有时两相液体的相对密度相差较小或因一些轻质絮状沉淀夹杂在混合液中，致使两相界线不明显，造成分离困难。,11 萃取,解决乳化问题的办法是：A 较长时间静置；B 加入少量电解质，以增加水相的密度，利用 盐析作 用，破坏乳化现象；C 若因碱性物质而乳化，可加入少量稀酸来破坏；D 也可以递加数滴乙醇，改变其表面张力，促使两相 分层；E 当含有絮状沉淀时，可将两相液体进行过滤。,11 萃取,（4）分液漏斗使用完毕，应用水洗净，擦去旋塞和孔道中的凡士林，在顶塞和旋塞处垫上纸条，以防久置粘结。,1 试剂试药的取用 1.1 固体试药的取用 1.2
24、 液体试剂的取用2 试剂试药的存放,12 试剂、试药的取用和保存,12 试剂、试药的取用和保存,1 试剂试药的取用 试剂试药的取用在满足鉴别的前提下，从经济和环保上考虑，取用量应越少越好。如果没有说明用量，一般应按最少量取用：液体1-2mL，固体只需要盖满试管底部。实验剩余的试剂试药既不能放回原瓶，也不要随意丢弃，要放入指定的容器内。,1.1 固体试药的取用 取用固体试药一般用药匙。往试管里装入固体粉末时，为避免药品沾在管口和管壁上，先使试管倾斜，把盛有试药的药匙（或用小纸条折叠成的纸槽）小心地送入试管底部，然后使试管直立起来，让药品全部落到底部。有些块状的药品可用镊子夹取。,12 试剂、试药
25、的取用和保存,1.2 液体试剂的取用 取用少量液体时可用胶头滴管吸取。取用较多量液体时可用直接倾注法：取用细口瓶里的试液时，先拿下瓶塞，倒放在桌上，然后拿起瓶子（标签应对着手心）、瓶口要紧挨着试管口，使液体缓缓地倒入试管。为防止残留在瓶口的药液流下来，腐蚀标签。一般往大口容器或容量瓶、漏斗里倾注液体时，最好用玻璃棒引流。,12 试剂、试药的取用和保存,注意：取用硫酸、硝酸、浓氢氧化钠等腐蚀性较强的液体时，千万不能溅在手上或身上。另外，硝酸易挥发，应在通风处或室外使用。,12 试剂、试药的取用和保存,12 试剂、试药的取用和保存,2 试剂试药的存放 碘易升华且具有强烈刺激性气味，盛放在磨口的广口
26、瓶里。浓硝酸、硝酸银见光易分解，应保存在棕色瓶中，贮放在黑暗而且温度低的地方。氢氧化钠固体易潮解，应盛放在易于密封的干燥大口瓶中保存；其溶液盛放在无色细口瓶里，瓶口用橡皮塞塞紧，不能用玻璃塞。,13 化学试剂,我国生产的化学试剂按化工部标准规定分为三级：（1）一级品 为优级纯，也称保证试剂，Guaranteed reagent，用G.R表示，标签颜色绿色。（2）二级品为分析纯，Analytical eagent，用A.R表示，标签颜色红色。(3)三级品 为化学纯，Chemically pure 用C.P表示，标签兰色。,除上述三个等级外，还有纯度更低的实验试剂，Laboratorial rea
27、gent 用L.R表示，标签为棕色或其他颜色。纯度较低用于做实验辅助试剂。此外，还有基准试剂，纯度相当于或高于一级品。主要用于定量分析的基准物质，要求其纯度高、稳定、组成与化学式符合。,13 化学试剂,光谱纯试剂S.P主要用于光谱分析，其杂质含量低于光谱分析法检出的量。色谱试剂是用于色谱分析的标准物质，杂质含量用色谱分析法检不出或低于某一限度，纯度要求高，价格较贵。,13 化学试剂,14 药品检验中样品的取样注意事项,1 对于液体制剂，鉴于其本身样品的均匀性，标准中没有其他规定的前提下，取样可以不考虑均匀性的问题，但推荐用装量差异或最低装量检查项下的混合样品进行检验，尤其是含量测定项。2 对于
28、半固体制剂，要求用装量差异或最低装量检查项下的混合样品进行含量测定检验。以保证取样均匀的最大可能性。,14 药品检验中样品的取样注意事项,3 对于固体制剂，在各检品标准含量测定中大多规定了取样方式，即取重（装）量差异项下的样品进行含量测定。一般固体制剂（片剂、胶囊剂、颗粒剂等）含量测定时，均应用乳钵研磨（手拈无颗粒感）后取样。4 除另有规定者外，原料药一般等量混合后检验。制剂样品和包装材料取样后，可不经混合，再随机取样检验。,14 药品检验中样品的取样注意事项,5 低剂量的冻干粉针在做装量差异或含量测定取样时，一定要将瓶子放气后再称量，否则由于真空，瓶中的空气重量，会影响测定结果而产生较大的系统误差。,
