《蛋白酶活力的测定课稿.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《蛋白酶活力的测定课稿.ppt（20页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、第十章 蛋白酶活力测定,概 述,蛋白酶定义 水解蛋白质肽链酶类的总称，适宜PH和温度下水解蛋白为肽段和氨基酸。蛋白酶分类 碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶（内肽酶）,应用,发酵：发酵酒精时，蛋白水解充分。皮革脱毛和软化丝绸脱胶医药生产,要求,掌握测定蛋白酶活力的原理理解制备标准曲线的目的和意义学习制备标准曲线的基本操作,一、原 理,酪蛋白 酪氨酸 钼蓝和钨蓝（蓝色）,酶活力单位：1mL液体或1g固体酶粉在一定温度、PH下，每分钟水解酪蛋白产生1ug酪氨酸，为一个酶活力单位。,福林试剂（Folin）：钨酸钠、钼酸钠、硫酸锂）金黄色溶液,二、仪器与试剂,1、仪器电子天平、紫外分光光度计、电热恒温
2、水浴锅2、试剂（1）福林试剂 贮存液和使用液（2）2%酪蛋白溶液（3）pH7.2磷酸缓冲溶液（4）100ug/mL标准酪氨酸溶液（5）0.4mol/L碳酸钠溶液（6）0.4mol/L三氯乙酸溶液（7）c（1/2 Na2CO3）=0.8mol/L Na2CO3溶液（8）c（Hcl）=1mol/mL Hcl 溶液,三、测定方法,1、标准曲线的绘制 取6支10mL具塞比色管，编号，按下表将酪氨酸溶液稀释，配制酪氨酸系列标准溶液：,于上述各管中各吸取1mL于10mL比色管中，分别加入5mL0.4mol/mL碳酸钠溶液、1mL Folin试剂使用液。摇匀，40毒水浴显色20min后，680mn测定吸光度
3、。以吸光度值和酪氨酸浓度绘制标准曲线。,以光密度OD为纵坐标，酪氨酸含量（g）为横坐标，绘制标准曲线。,2、待测酶液的制备（称取、溶解、稀释）,称取0.1g酶粉，用pH7.2磷酸缓冲溶液溶解并定容至100mL，吸取5mL，再用pH7.2磷酸缓冲溶液稀释定容至250mL，即稀释500倍待测。,3、样品测定,以空白为对照，680mn测定吸光度值，求平均值。,从标准曲线上找到酪氨酸的质量A，ug；,四、计算,式中A标准曲线上查的酪氨酸质量，ug；44mL反应液取出1mL测定；N酶液稀释倍数；W样品中水分，%。,注意,严格按顺序加入试剂。先加NaCO3，再加Follin试剂，后者只有 在碱性条件下才能被还原成兰色物质。,说明：酪蛋白在低温下有少量降解为酪氨酸，此操作是与测定样品的条件保持一致，消除系统误差。注意：滤纸不能润湿。,校正：用紫外分光光度计，以蒸馏水作对照，在680nm处测定光密度。用1-6号管的光密度值减去0号管的光密度值。,end,【实验结果】,一、原理,一、酶活力的定义 酶活力是指酶催化某些化学反应的能力二、酶活力和酶促反应速度的关系 酶活力的大小可以用在一定条件下它 所催化的某一化学反应的速度来表示 测定酶活力就是测定酶促反应的速度,【实验原理】,三、酶促反应速度的测定方法及条件,通常用单位时间内 产物的生成量表示 酶促反应的速度。必须测定酶促反应 的初速度。,
