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酶联免疫吸附实验(ELISA),目的和要求,掌握ELISA的原理、操作过程及注意事项了解ELISA实验结果的读取和分析,实验原理,借助酶标记抗体（或抗原）在体外与抗原（或抗体）结合，通过相应底物被酶解后出现显色反应。反应颜色深浅与抗原（或抗体）量的多少有关。特点：灵敏、特异类型：双抗体夹心法、竞争法、间接法等,双抗夹心法ELISA,竞争法 ELISA,实验材料,BSA包被的测定板酶标抗鼠IgG抗体待检血清，阳性血清，阴性血清洗涤液：PBS吐温-20底物液：邻苯二胺（OPD）终止液：10%H2S04,实验步骤,加入稀释好的待测血清每孔100ul，37孵育40min,加入100ul酶标抗体,37孵育30min,洗板3次,每次1min,洗板3次,每次1min,实验步骤,加入100ulTMB底物液避光室温孵育15min,终止反应:每孔加1滴10硫酸,结果观察,注意事项,加样：应将所加物加在ELISA板孔的底部，并注意不可溅出，不可产生气泡。洗板：每次洗液加入后，应静置1分钟使清洗更加彻底。末次洗板尽量将水甩干。液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。底物有毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，尽量避免接触。,将待测血清1:100稀释后，再做倍比稀释到各孔，每孔100l，见表。注意混匀。,100ul,血清稀释及加样,
