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1、实验七果蝇的双因子杂交实验,湖州师范学院 生命科学学院生物系,遗 传 学校 级 精 品 课 程,一、实验目的,1、学习果蝇两对因子杂交实验的原理和方法。2、验证两对非等位基因间的自由组合现象和遗传规律。3、掌握果蝇的杂交技术，并学会记录交配结果和数据统计处理的方法。,二、实验材料,黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）品系灰体残翅：EEvgvg黑檀体长翅：eeVgVg,果蝇的灰体基因（E）与黑檀体基因（e）为一对相对性状，位于R70.7位置，而长翅（Vg）与残翅（vg）为另一对相对性状，位于R67.0位置。这两对基因是没有连锁关系的，位于不同染色体上的非等位基因。,三、实验
2、仪器设备药品,体视显微镜、恒温培养箱、培养瓶、麻醉瓶、毛笔、滤纸、培养皿等。乙醚、玉米粉、琼脂、红塘、酵母粉、丙酸等。,四、实验原理,自由组合规律：位于非同源染色体上的两对非等位基因，其杂合体在形成配子时，等位基因彼此分离，进入不同的配子中，非等位基因可自由组合进入同一配子，结果产生4种比例相等的配子。若显性完全，F1自交产生F2代表现出4种表型，比例为9：3：3：1。,P：灰体残翅（）黑檀体长翅（）F1：灰体长翅 EeVgvg F2,四、实验原理,正交：灰残 Eevgvg（）黑长 eeVgVg（）反交：黑长 eeVgVg（）灰残 EEvgvg（）,注意：双因子杂交也可做反交，但因残翅果蝇不能
3、飞，只能爬行，用做母本比较好。,正交,自交,EEvgvg,eeVgVg,四、实验原理,1 EEVgVg 1 EEvgvg9 E_Vg_ 2 EEVgvg 2 Eevgvg 2 EeVgVg 1 eeVgVg 4 EeVgvg 2 eevgvg 1 eevgvg,3 E_vgvg,3 eeVg_,F2,配子,五、实验步骤,1.选处女蝇：每组做正交1瓶，正交选灰体残翅为母本，黑檀体长翅为父本，将旧瓶中的果蝇麻醉全部处死，在8h内收集处女蝇至少5只，雌雄分开培养，可提前2-3天收集。2.杂交：将处女蝇5只和5只黑檀体雄蝇麻醉、转移到新的杂交瓶中，确保杂交瓶中各只果蝇完全苏醒，没有死蝇。贴好标签，于2
4、5培养；3.处死亲本：7d后，处死杂交亲本。4.观察F1：再过4-5天，F1成蝇出现，连续观察23天，或在处死亲本7天后，集中观察记录F1表型。,五、实验步骤,4.F1互交：选取5对F1果蝇，分别转入一新培养瓶（不需处女蝇），贴好标签，于25培养。5.处死亲本：7d后，杀死F1代亲本果蝇6.观察F2：再过5d，F2成蝇出现，开始观察记录F2，连续统计7-8d。注意：（统计过的果蝇放入酒精瓶中，杀死）,六、实验结果,1.观察并统计F1代表型及个体数，分析相对性状间的显、隐性关系；把你的统计结果，填入表1。2.观察并统计F2代表型及各种表型的个体数，特别要注意新性状组合个体的出现。计算不同表型个体数的比例，确定这两队基因的遗传规律。把你的统计结果，填入表2。3.根据你的结果，对该实验F2代的统计结果作X2测验，填入表3。,表1 F1代表型数量统计表,六、实验结果,表2 F2代表型数量统计表,自由度n1,表3 F2代的统计结果做X2测验,六、实验结果,x2(O-E)2/E,x2表,六、实验结果,六 作 业,1.交实验报告，完成各种统计表格内容。2.为什么要选择处女蝇做杂交？七、思考题1.基因间发生自由组合的前提是什么？2、如何判断两个基因是连锁遗传还是自由组合？,
