实验五SDS-PAGE蛋白质电泳准备实验.ppt

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1、实验五 SDS-PAGE蛋白质电泳准备实验,-溶液的配置,实 验 内 容,一、变性蛋白质电泳系列溶液,1、单体母液(第一小组)25 ml 丙烯酰胺 7.50 g 甲叉双丙烯酰胺 0.20 g 去离子水定容至25 ml,定性中速滤纸过滤,棕色试剂 瓶4存放。2、10(w/v)SDS(第一小组)10ml SDS 1.0 g 去离子水 10 ml,3、分离胶缓冲液(4,pH=8.80,25 ml)(第二小组)Tris-Base(1.5 mol/L)4.54 g 10(w/v)SDS 1 ml 用20ml去离子水溶解,再用浓HCl调节pH到8.8,过滤,定容到25ml,4存放。,4、浓缩胶缓冲液(4,

2、pH=6.80,50 ml)(第二小组)Tris-Base(0.50 mol/L)3.03 g 10(w/v)SDS 2ml 加去离子水40 ml溶解,用浓HCl调pH到6.80,定容到50ml,4存放。,5、10的过硫酸铵(1ml)(现配现用)(第三小组)过硫酸铵 0.10 g 去离子水1.00 ml,4密闭存放。6、电极缓冲液(pH=8.30)500 ml(1))(第三小组)Tris-Base 1.5g 甘氨酸 6.25 g SDS(10%)2.5ml 去离子水溶解。,7、样品缓冲液储液(2)(第四小组)2.5 ml 浓缩胶缓冲液(4)1.25 ml SDS(固体干粉)0.1 g 甘油 0.5 ml 溴酚兰 1 mg 加去离子水0.75ml 溶解,加50ul巯基乙醇,室温保存。8、染色液 400ml 考马斯亮兰R250 1.0 g 甲醇 182ml 冰醋酸 36.8 ml 水 182 ml,9、脱色液(第四组)500 ml 甲醇 228.00 ml 冰醋酸 36.00 ml 水 236.00 ml,表3 分离胶的配制Table 3 The confect of separating gel,表4 浓缩胶的配制备Table 4 The confect of concentrating gel,

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