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1、细菌性食物中毒 实验室检测,湖南疾病预防控制中心王 岚,实验室在食物中毒事件中主要任务是,尽快查出食物中毒原因,实验室在食物中毒事件中主要任务具体包括下列几个方面,1.参与食物中毒应急预案的制定.准备食物中毒应急物品.参与现场采样.对样品进行检验.检验结果与现场调查情况及病人临床症状进行综合分析.食物中毒预防机制的研究,食物中毒检验,食物中毒检验工作是食物中毒调查的重要组成部分，检验技术水平与食物中毒致病物质查明率密切相关，检验结果对提供疾病临床确诊依据、中毒食品和病原因子污染来源等方面具有重要意义。实验室检验工作技术性较强，检验结果的正确性不仅取决于实验室的条件和技术水平，同时还与检验样品的
2、采集、保存、送样方法等方面有关。因此在分析检验结果时，除了应考虑结果是否符合有关实验室判定标准外，还应综合考虑各种困难影响检验结果的因素。有时阳性检验结果不一定都能说明病原因子在食物中毒中的致病作用。阴性结果也不一定能完全否定某种病原因子。,细菌性食物中毒实验室检验,1.根据中毒患者临床特点和流行病学资料分析结果，尽快推断可疑致病因素范围，确定检验项目。2.按照国家标准或行业标准及时对采集的样品进行检验。3.检出致病菌或毒素的，应对致病菌及毒素进行分型，并按照规定鉴定并长期保存菌株。4.必要时，对可疑中毒食品进行毒性实验。5.加强与其他实验室的联系和合作；到遇到困难时，及时请求保证和支持。,细
3、菌性食物中毒样品检验的一般程序,1.样品采集 2.初步检验活菌数、直接镜检(涂片染色镜检)3.分离培养(包括增菌培养和直接平板培养)4.初筛试验 5.纯培养 6.全面鉴定,食物中毒物资准备,承担食物中毒事故现场应急处理的专业技术机构，应配备的物资和设施设备包括但不限于下述物品，并保持其随时处于良好的性能状态可投入正常使用。,食物中毒物资准备,一.食物中毒事故应急处理专用车辆二.采样用物品三.取证工具四.现场快速检验设备五.现场记录表格 六.参考资料：七.其它有关物品,食物中毒物资准备采样用物品,1.食品（包括固体和液体）采集：灭菌塑料袋20个、广口瓶4个、吸管10支以上、刀、剪、勺、镊子、夹子
4、等。2.涂抹样品采集：灭菌生理盐水试管(5ml)至少20支，棉拭子若干包，有条件的单位应配备选择性培养基。3.便样采集：采便管、运送培养基各20支以上。,食物中毒物资准备采样用物品,4.患者呕吐物采集：无菌平皿和特殊采样棉球各20个以上。5.血样采集：一次性注射器、灭菌试管各10支以上。6.保藏样品的冷藏设备。7.防污染的工作服或隔离衣、帽、口罩、手套、靴子等。.其他必备物品：75医用酒精、酒精灯、酒精棉球、洗耳球、打火机、记号笔 等,食物中毒物资准备培养基准备,C-B保存液：保存病原菌亚硒酸盐增菌液：培养沙门菌普通肉汤：培养金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌1%葡萄糖肉汤：培养链球菌7.5%NaC
5、l肉汤：培养金黄色葡萄球菌嗜盐增菌液：培养副溶血性弧菌,食物中毒物资准备培养基准备,碱性蛋白胨水：培养霍乱弧菌肠道增菌液：培养致泻大肠埃希菌GN增菌液；培养志贺菌、变形杆菌LB1增菌液：培养单核细胞增生李斯特氏菌硫乙醇酸盐培养液：培养产气荚膜梭菌布氏肉汤：培养空肠弯曲菌,食物中毒物资准备,以上装备应不少于两套，分别由专人负责准备和管理。消耗性物品用后应不迟于次日及时补充齐全。对采样箱物品储备情况应坚持每月例行检查，凡未经使用的灭菌试管、培养基和采便管等无菌物品应至少每月更换一次，以确保达到无菌要求。,现场样品的采集,现场调查人员应尽一切努力及时完成,对中毒发生现场食物中毒各种样品采集工作，不能
6、及时赶到现场采样或者采样不全面或采样方法不正确均可能直接影响致病物质的查明。各种食物中毒的采样各有侧重点，应根据初步掌握的食物中毒性质确定采样的重点，一般根据病人出现的临床症状和流行病学特点和卫生学调查结果,初步确定进行现场或实验室检验的项目,有针对性采集现场样品,以便能够明确找到中毒食品。,现场样品的采集,现场采集的样品包括：1.可疑食物的剩余部分，2.生产设备上的残留物,3.食品的加工工（用）具、容器、餐饮具、抹布、操作人员手等接触食品物品的涂抹样,4.中毒患者的大便、血液、呕吐物等.5.从业人员大便、肛拭子、咽拭子、脓液等。6.其他与食物中毒有关的可疑样品。,现场样品的采集食品样品采集,
7、食品采集应遵循以下原则.尽量采取中毒患者食用后的剩余食品.无直接剩余食品时，采集可疑中毒食品的包装或者用灭菌生理盐水洗涤盛过可疑中毒食品的容器，取洗涤液；.采集同一加工场所加工的其它直接入口食品；.必要时采集半成品或原料，,现场样品的采集涂抹样品采集,包括生产设备上的残留物，食品加工工具、用具、炊具 及食品容器、餐饮具、抹布、操作人员手等可能直接或间接接触可疑中毒食品的物品表面进行涂抹采样，即用无菌棉拭子浸沾生理盐水，反复抹擦表面，然后将棉拭子置于盐水管中。也可用刀刮物品表面取样。,现场样品的采集大便样品采集,大便样品对诊断细菌性食物中毒非常重要，尤其是在无法采集到剩余食品时，主要靠大便样品明
8、确诊断。,现场样品的采集采集大便样品应注意：,1.必须用采便管采集腹泻病人大便，若让中毒病人自行留便可能影响致病菌的检出率；2.无论中毒病人是否已经服药，均应进行大便采集。有人认为中毒病人服药后再采集大便没有意义，实际经验表明，病人服药后仍可检出致病菌，只是致病菌检出率可能减低。决不能因为病人已经服药而放弃大便采集，贻误明确诊断的机会。3.应采集严重腹泻中毒病人的大便，对一起较大规模的食物中毒事件一般至少采集20名病人的大便。,现场样品的采集呕吐物采集,出现呕吐病人时，应尽量多采集病人呕吐物，呕吐物已被处理掉时，涂抹被呕吐物污染的物品。,现场样品的采集血液采集,怀疑感染型细菌性食物中毒时，采集
9、中毒病人急性期(3天内)和恢复期(2周左右)静脉血3ml,至少采集5名病人，同时采集正常人静脉血作为对照，观察抗体效价的变化，以便明确致病菌。,现场样品的采集食品加工人员带菌情况采样,当怀疑细菌性食物中毒时，厨师或者其他食品加工人员是常见的污染源之一，应根据对食品加工人员带菌情况调查结果进行采样，可用采便管对厨师进行采便，涂抹食品加工人员的手、鼻、咽和有感染灶的皮肤等。,现场样品的采集,水样采集 当怀疑水污染事故时，应采集水样。其它采样 食物中毒的情况复杂多变，根据实际需要可以采集含有或可能含有有毒物质的各种物品。,样品保管与送检,1.样品采集后登记好详细信息，对每个样品作唯一标志，以防错乱；
10、并严密封闭包装，置冰壶冷藏，应在4小时内送至实验室。2.样品送检应附详细送检单，填明样品的名称、来源、件数、重量、采样的条件、时间、送检时间、检验项目、受理编号、送样人等。并向检验人员说明中毒情况。3.检验人员接到样品必须签字,注明接到时间,并立即进行检验。4.如发现采样的条件(容器或采样)可能影响结果时,应在检验报告上注明。,食物中毒样品采集注意事项,1.食物中毒采样量不受常规食品卫生监督工作规定数量的限制，可根据食物中毒调查处理工作需要进行采样；2.怀疑细菌性食物中毒必须采用无菌操作采样，采样人员必须掌握无菌采样技术，用于采样的工具、容器等必须经过高压灭菌；3.样品在送检之前应妥善保存，夏
11、天应置于放有冰块的隔热保温箱内，最好冰箱内保存。,食物中毒样品采集注意事项,4.使用卫生部统一制定的采样记录文书，经有关陪同人员签字后送检；5.样品应尽快送实验室检验。调查大规模食物中毒时，需要边调查，边采样，把已经采集的样品分批送实验室检验。,初步检验,直接涂片染色镜检,观察存在于检品中特种形态的细菌如霍乱弧菌、弯曲菌，为进一步的检验提供有用的信息,一般活菌数的测定,按国标菌落总数测定方法进行，以了解可疑食品被污染情况,增菌及分离培养,将非病源样品包括可疑食物、水样及环节样品,服过抗生素后采集的病源样品及从业人员带菌查源的样品按检验项目要求接种各相应增菌液培养；增菌培养后接种于各相应分离培养
12、基。,分离培养,将无须做增菌处理的病源样品按检验项目要求直接接种于各相应分离培养基,根据分离培养基及其菌落特征,选取可疑菌落,初筛试验,克氏双糖/三糖铁/肠道综合发酵管PCRVIDAS,可疑菌的鉴定,全面生化试验（API、VETIK、手工鉴定等）；噬菌体试验；血清分型；毒素或毒素基因测试；,毒素或毒素基因测试,霍乱弧菌肠毒素、葡萄球菌肠毒素、EIEC侵袭毒素、ETEC肠毒素按国标方法进行动物试验或酶联免疫试验（VIDAS等）毒素基因测试：霍乱弧菌肠毒素、葡萄球菌肠毒素、致泻性大肠埃希菌的所有毒力基因均可用PCR检测。,患者血清的试验,疑似伤寒或副伤寒的患者应取发病一周的血清做肥达氏反应，用作辅
13、助诊断；将患者急性期和恢复期的血清做凝集效价的对比，4倍增长可确诊。,检验结果的判定,应以找到病原体或其毒素为最终结论，在此之前所有的快速检验方法如PCR、VIDAS等得到的结果仅供参考；应注意非病源样品与病源样品检出的病原体的统一性。,常见细菌性食物中毒 实验室诊断,沙门氏菌食物中毒实验室诊断,从可疑食品、病人呕吐物或腹泻便中检出血清学型别相同的沙门氏菌。如无可疑食品，从几个病人呕吐物或腹泻便中检出血清学型别相同的沙门氏菌也可。有必要时可观察分离出的沙门氏菌与病人血清的凝集效价，恢复期应比初期有所升高(一般约升高4倍)。沙门氏菌检验方法按GB/T4789.4进行。,副溶血性弧菌食物中毒实验室
14、诊断,从中毒食品、食品工具、患者腹泻便或呕吐物中检出生物学特性(见GB/T4789.7)或血清型别一致的副溶血性弧菌。动物(小鼠)试验具有毒性或与患者血清有抗体反应。（有条件时做）按GB/T4789.7进行检验。,金黄色葡萄球菌食物中毒实验室诊断,从中毒食品中直接检测肠毒素，并确定其型别。从中毒食品、患者呕吐物、粪便中经培养分离出金黄色葡萄球菌，菌株再检测肠毒素，证实为同一型别。符合以上其中一项者即可 金黄色葡萄球菌检测方法见GB/T4789.10。,变形杆菌食物中毒实验室诊断,从中毒食品和患者吐泻物中检出占优势、且生化及血清学型别相同的变形杆菌。取患者急性期和恢复期(中毒后1215d)的血清
15、，用分离的菌株做血清凝集效价测定，恢复期滴度高于急性期滴度四倍，即有诊断意义。同时以健康人做为对照，应为阴性。,病原性大肠艾希氏菌食物中毒实验室诊断,从中毒食品中和患者吐泻物中均检出生化及血清学型别相同的大肠艾希氏菌。侵袭性大肠艾希氏菌应进行豚鼠角膜试验，产肠毒素大肠艾希氏菌应进行肠毒素测定。按GB/T4789.6方法进行。,产气荚膜梭菌食物中毒实验室诊断,从采集患者粪便(最好是发病2日以内的)及可疑中毒食品检测产气荚膜梭菌，方法按GB/T4789.13执行。分离菌株血清型鉴定，以分离菌株按一般方法制备的免疫凝集素血清进行凝集试验。按培养分离菌株检查其肠毒素产生性，取同上粪便检样检测产气荚膜梭
16、菌肠毒素.,蜡样芽胞杆菌食物中毒实验室诊断,中毒食品中蜡样芽胞杆菌菌数测定(按GB/T4789.14)，食品中一般均105cfu/g(mL)。中毒病人呕吐物或粪便中检出的蜡样芽胞样杆菌与中毒食品检出的菌株，其生化性状或血清型须相同。,肉毒梭菌食物中毒实验室诊断,从中毒食品(或患者粪便、血液)中检出肉毒毒素，并确定其型别。肉毒毒素的检测方法见GB/T4789.12。,志贺菌食物中毒实验室诊断,从可疑食品、病人吐泻便中检出志贺菌。观察分离出的志贺氏菌与病人血清的凝集效价，恢复期应比初期有明显升高(一般约升高4倍)。志贺菌检验方法按GB/T4789.5进行。,单增李斯特菌食物中毒实验室诊断,从可疑食品和粪便中检出单增李斯特菌。,椰毒假单胞酵米面亚种食物中毒实验室诊断,按GB/T4789.29进行。从中毒可疑食品中检出椰毒假单胞酵米面亚种。从中毒可疑食品或菌株培养物中检出椰毒假单胞酵米面亚种的代谢产物米酵菌酸。动物试验具有毒性。,谢谢！,
