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1、X-YBiotEdinologyC人肿瘤坏死因子可溶性受体I（TNFSRI）4）检测试剂盒AIL）检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人肿瘤坏死因子可溶性受体I（TNFsR-I）4）检测试剂盒AlL）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人肿瘤坏死因子可溶性受体I（TNFSR-I）4）检测试剂盒AlL）水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人肿瘤坏死因子可溶性受体I（TNFsR-I）4）检测试剂盒AlL）抗原、生物素化的人肿瘤坏死因子可溶性受体I（TN
2、FsR-I）4）检测试剂盒AIL）抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人肿瘤坏死因子可溶性受体I（TNFsR-I）4）检测试剂盒AlL）呈正相关。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20mlXl瓶7终止液6mlXl瓶2酶标试剂6ml1瓶8标准品0.5mlXl瓶3酶标包被板12孔X8条9标准品稀释液1.5mlXl瓶4样品稀释液6mlXl瓶IO说明书1份5显色剂A液6mlXl瓶11封板膜2张6显色剂B液6mlXl/瓶12密封袋1个标
3、本要求1 .血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。2 .血浆：应根据标本的要求选择EDTA,柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。尿液：用无菌管收集。离心20分钟左右（20003000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。4 .细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。5 .培养细胞
4、：检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。6 .组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4o用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8C的温度。加入一定量的PBS（PH7.4）,或组织蛋白萃取试剂，用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。7 .标本采集后尽早进行提取，提取按相
5、关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-2（C保存，但应避免反复冻融8 .不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1 .标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。2000pgml5号标准品150l的原倍标准品加入150l标准品稀释液1OOOpgZml4号标准品150l的5号标准品加入150l标准品稀释液500pgml3号标准品150l的4号标准品加入150l标准品稀释液250pgml2号标准品150l的3号标准品加入150l标准品稀释液125pgml1号标准品150l的2号标准品加入I5l
6、标准品稀释液2 .加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酣标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在前标包被板上标准品准确加样50l,待测样品孔中先加样品稀释液40l,然后再加待测样品10l（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于醐标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3 .温育：用封板膜封板后置37温育30分钟。4 .配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸储水30倍稀释后备用5 .洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6 .加醐：每孔加入醐标试剂50l,空白孔除外。7 .温育：操作同3。8 .洗涤：操作同5。9 .显色：每孔先加入显色
7、剂A50l,再加入显色剂B50L轻轻震荡混匀，37避光显色10分钟.10 .终止：每孔加终止液50l,终止反应（此时蓝色立转黄色）。11 .测定：以空白空调零，45Onm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结:准备试剂，样品和标准品计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟
8、后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2 .浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3 .各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4 .请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）。5 .封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6 .底物请避光保存。7 .严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8 .所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9 .本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1 .试剂盒保存：；2-8Co2 .有效期：6个月
