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1、ICS 11 100 10CCS C44YY中华人民共和国医药行业标准YY/T18922024断裂点簇集区艾贝尔逊白血病病毒(BCR-ABL)融合基因检测试剂盒Breakpointclusterregion-AbeIsOnIeukemiavirus(BCR-ABL)fusiongenetestingkit2025-03-01 实施2024-02-07发布国家药品监督管理局发布目次前言I1范围12规范性引用文件13术语和定义14要求14.1 外观14.2 核酸提取功能14.3 定量试剂的要求24.4 定性试剂的要求24.5 稳定性35试验方法35.1 外观35.2 核酸提取功能35.3 定量试剂
2、35.4 定性试剂的要求45.5 稳定性56标签和使用说明57包装、运输和贮存51.1 1包装51.2 运输51.3 贮存5附录A（资料性）慢性髓性白血病分子学反应6A.1融合基因水平6A.2分子学反应6A.3分子学反应和国际标准化关系6参考文献7本文件按照GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由国家药品监督管理局提出O本文件由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会（SAC/TC136）归口。本文件起草单位：中国食品药品检定研究院、广州达安基因股份有限公
3、司、上海容昂基因科技股份有限公司、江苏省医疗器械检验所、艾普拜生物科技（苏州）有限公司、苏州思纳福医疗科技有限公司、厦门致善生物科技股份有限公司、北京市医疗器械检验研究院（北京市医用生物防护装备检验研究中心）、迈杰转化医学研究（苏州）有限公司、伯乐生命医学产品（上海）有限公司、苏州锐讯生物科技有限公司、北京蔗准医疗科技有限公司。本文件主簸草人：曲守方、杨勇、陶慧卿、张瀛、窿、吴瑞、耦陈、王瑞霞、王方杰、曹珊、董嘉、叶锋、黄桃生、徐任、李丽莉、贾睁、张文新、璜、孙柿、黄杰。断裂点簇集区-艾贝尔逊白血病病毒（BCR-ABL）融合基因检测试剂盒1范围本文件规定了断裂点簇集区-艾贝尔逊白血病病毒（BC
4、R-ABL）融合基因检测试剂盒的要求、标签和使用说明、包装、运输和贮存，描述了相应的试验方法。本文件适用于检测外周血样本和骨髓样本的断裂点簇集区艾贝尔逊白血病病毒（BCR-ABL）融合基因检测试剂盒，采用的技术方法有荧光聚合醇链反应（polymerasechainReaction,pcR）法、荧光逆转录聚合醇链反应（ReverseTranscription-polymerasechainReaction,RT-pcR）法、逆转录数字聚合醇链反应（ReverseTranscription-DigitalpolymerasechainReaction，RT-dpcR）法和数字聚合醇链反应（Digi
5、talpolymerasechainReaction,dpcR）法等。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T191包装储运图示标志GB/T29791,2体外诊断医疗器械制造商提供的信息（标示）第2部分：专业用体外诊断试剂3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4要求1.1 1外观试剂盒应符合制造商规定的外观要求o外观要求包含但不限于以下内容：试剂盒组分齐全，包装外观清洁、无泄漏、无礴；标志、标签字迹清楚。1.2 核酸提取功
6、能适用时，核酸提取功能应符合如下要求.a）含有核酸提取组分的试剂盒，制造商应对核酸提取做适当要求，并对核酸提取功能进行验证。例如，充分考虑样本提取过程存在的干扰因素，及对后续样本扩增过程可能产生的影响Ob）样本需要提取但不含有核酸提取组分的试剂盒，由制造商说明或指定提取试剂盒，并提供验证资料。C）样本无须提取、直接进行扩增的试剂盒，制造商应能提供充分证据，以证明其产品中醇的抗干扰性。1.3 定量试剂的要求1.1 .1融4.3 .1.1标准品线性BCR-ABL融合基因检测试剂盒内用于绘制标准曲线的标准品应不少于4个浓度，宜包含线性区间上限和下限，线性相关系数Irl0.9800o4.3. 1.2样
7、本线性制造商应规定试剂盒的线性区间。在试剂盒线性区间内，线性相关系数Id0.9800o4.3.2 准确度对于BCR-ABL（p210）融合基因检测试剂盒，准确度应符合如下要求之一：a）检测可用于评价常规方法的有证参考物质（CRM）或其他公认的参考物质，绝对偏差不超过士0.5个对数数量级；b）检测企业标准品，绝对偏差不超过士0.5个对数数量级。对于BCR-ABL（pl90和或p230）融合基因检测试剂盒，检测国家或企业标准品，绝对偏差不超过士0.5个对数数量级。注：BCR-ABLS因按照融合蛋白亚型分为p210.pl90和p230三种，p210的基因型为el3a2及el4a2,pl90的基因型为
8、ela2,p230的基因型为el9a2BCR-ABL（p210）融合基因标准品的浓度宜包括0.1%融合基因水平，见附录A.4.3.3 检出限对于BCR-ABL（p210）融合基因检测试剂盒，0.01%融合基因应能检出。对于BCR-ABL（pl90和/或p230）融合基因检测试剂盒，结果应符合制造商的要求。4.3.4 重复性对重复性参考品检测10次，浓度的对数值或G值的变异系数（CV,%）应三5.0%。当样本浓度较低时如不高于0.01%融合基因（p210）,浓度的对数值或Q值的变异系数（CV,%）应三10.0%4.4定性试剂的要求4.4. 1阳性参考品符合率对国家参考品或企业参考品中的阳性参考品
9、进行检测，结果应为阳性.阳性参考品设置应遵循如下原则：a）阳性参考品综合考虑来源、浓度等各种因素；b）阳性参考品组成包含国内常见融合基因型别，p210的基因型为el3a2及el4a2,pl90的基因型为ela2,p230的基因型为el9a24.4.2 阳性参考品符合率对国家参考品或企业参考品中的阴性参考品进行检测，结果应为阴性阴性参考品设置应遵循如下原则：a）包含一定数量的不含被测物的样本；b）充分考虑可能存在的干扰、交叉、非特异等因素；C）包含一定数量不在试剂盒宣称检测范围内的融合基因型别。4.4.3 检出限拷贝数不高于100拷贝/反应的BCR-ABL融合基因应能检出。4.4.4 重复性对重
10、复性参考品检测10次，结果的变异系数（CV,%）应三5.0%或结果应为相应基因型别。4.5. 定性可选用以下方法进行验证。a）效期稳定性试剂盒在规定的贮存条件下保存至有效期末，超过有效期一定时期内进行检测，产品的性能应符合4.3或者4.4要求。b）热稳定性取有效期内试剂盒在制造商规定的温度放置规定时间，产品的性能应符合4.3或者4.4要求。注1：效期稳定性试验，一般情况下，效期为1年时选择不超过1个月的产品进行试验，效期为半年时选择不超过半个月的产品进行试验，以此类推。但如超过规定时间，产品符合要求时也可以接受。注2:热稳定性试验不能用于推导产品有效期，除非是采用基于大量的稳定性研究数据建立的
11、推导公式。注3:根据产品特性可选择a）、b）方法的组合，但所选用方法宜能验证产品的稳定性，以保证在效期内产品性能符合标准要求。5试验方法5.1外观在自然光下，以正常视力目视检查，判定结果是否符合4.1的要求。5.2 核酸提取功能适用时，按照制造商提供的方法进行试验，判定结果是否符合4.2的要求。5.3 定量试剂1 .3.1雌5 .3.1.1标准品线性按照试剂盒说明书进行操作，对试剂盒中标准品进行不少于2次检测，计算每一标准品的G值或浓度对数值的均值，以标示浓度对数值为T1,G值或浓度对数值的均值为/,进行线性拟合，按照式（1）计算其线性相关系数乙判定结果是否符合4.311的要求。士（N-为（,
12、一3）（D，总工.斗广小式中：i一标示浓度对数值；T一所有标示浓度对数值的平均值；/一检测值的平均值；一所有检测值的平均值；/-1,2,3n；为测定样本数。5.3. 1.2样本线性在制造商规定的线性范围内,取接近线性范围上限的高值样本按一定比例（如5倍或10倍）稀释为至少5种浓度,其中低值浓度样本应接近线性范围的下限按照试剂盒说明书进行操作,将每一浓度样本进行不少于2次检测,计算每一样本的检测浓度对数值的均值,以理论浓度对数值为T,检测浓度对数值的均值为，,进行线性拟合,按照式（1）计算其线性相关系数乙判定结果是否符合4.31.2的要求。5.3.2 准确度用试剂盒对有证参考物质（CRM）或参考
13、物质进行检测,合理设置高、低2个浓度,每个样本重复测定3次,取测试结果（M）,按式（2）分别计算绝对偏差（B1）,判定结果是否符合4.3.2a）的要求。BiM,T（2）式中：Bi一绝对偏差；M测试结果，取对数；T参考物质标示值,取对数；1,2,3。或用试剂盒对企业标准品进行检测,每个样本重复测定3次,取测试结果（M1）,按照式（2）分别计算绝对偏差（Bj）,判定结果是否符合4.3.2b）的要求。5.3.3 检出限按照试剂盒说明书操作,对检测限参考品进行检测,判定结果是否符合4.3.3的要求。5.3.4 重复性按照试剂盒说明书操作,用至少高、低2个浓度水平的样本各重复检测10次,计算平均值（W）
14、和标准差（5）,按照式（3）计算变异系数（CV）,判定结果是否符合4.3.4的要求。CV-sX100%（3）r式中：S-IO次测试结果的标准差；T-1。次测试结果绝对值的平均值。5.4定性试剂的要求5.4. 1阳性参考品符合率按照试剂盒说明书操作,对国家参考品或企业参考品中的阳性参考品进行检测,判定结果是否符合4.4.1的要求。5.4.2 阴性参考品符合率按照试剂盒说明书操作,对国家参考品或企业参考品中的阴性参考品进行检测,判定结果是否符合4.4.2的要求。5.4.3 检出限按照试剂盒说明书操作，对国家参考品或企业参考品中的检测限参考品进行检测，判定结果是否符合4.4.3的要求。5.4.4 重
15、复性按照试剂盒说明书操作，用至少高、低2个浓度水平的样本各重复检测10次，计算平均值（E）和标准差（5）,按照式（3）计算变异系数（Ck）,判定结果是否符合4.4.4的要求。5.5稳定性5.5. 1效期稳定性试剂盒在规定的贮存条件下保存至有效期末，按照5.3或5.4进行检测，判定结果是否符合4.5a）的要求。5.5.2热稳定性取有效期内试剂盒在制造商规定的温度放置规定时间，按照5.3或5.4进行检测，判定结果是否符合4.5b）的要求。6标签和使用说明应符合GB/T29791.2的规定。7包装、运输和贮存1.1 1包装应符合GB/T191的规定。1.2 运输试剂盒应按制造商的要求运输。在运输过程
16、中，应防潮和防止重物堆压，避免阳光直射和雨雪漫淋，防止与酸碱物质接触，防止内外包装破损.1.3 贮存试剂盒应在制造商规定条件下保存O附录A（资料性）慢性髓性白血病分子学反应A.1融合基因水平慢性髓性白血病诊疗指南要求分子学检测应采用国际标准对BCR-ABL融合基因的拷贝数水平进行报告。以BCR-ABL拷贝数与ABL拷贝数的比值（%Ratio）代表BCR-ABL融合基因的表达水平。国际标准化（ImematiOnalscale,IS）将标准化的基线值定为100%,并采用对数标尺报告BCR-ABL融合基因的表达水平相比于基线的下降程度以反映分子学反应深度.可以按照式（A.1）和式（A.2）计算得出：
17、%Ratio-M/NX100（A.1）%IS-M/NX100XCF（A.2）式中：MBCR-ABL基因拷贝数；N-ABL基因拷贝数；CF一转换系数，通过WHO标准物质获得。A.2分子学反应分子学反应（MoIecUIarResponse,MR）的程度和发生的时间是疾病诊断或治疗的关键指标之一。主要分子学反应（MajorMoIecUIarResponse,MMR）为慢性髓性白血病患者（CML）在治疗开始后BCR-ABL转录本下降了3个对数级的分子学反应水平，用国际标准化单位表示为BCR-ABL0.1%（IS）或MR3.Oo深层分子学反应（DMR）为慢性髓性白血病患者在治疗开始后BCR-ABL转录本
18、下降了不低于4个对数级的分子学反应水平，用国际标准化单位表示为BCR-ABL0.01%（IS）MR4.0BCR-ABL0.01%（IS）和MR4.5BCR-ABL三00032%（IS）是在主要分子学反应（MMR）的基础上所追求的深层分子学反应（DMR）,是实现无治疗缓解的前提O分子学反应可以按照式（A.3）计算得出：MR-2Logi0（%S）（A.3）A.3分子学反应和国际标准化关系临床实践中常用的慢性髓性白血病患者（CML）分子学反应和国际标准化IS的关系，如表A.1所示。表A.1分子学反应分子学反应MR国际标准化IS临床意义1.010%治疗3个月时的早期分子学反应（EMR）2.01%治疗6个月时的早期分子学反应（EMR）3.00.1%主要分子学反应（MMR）4.00.01%深层分子学反应（DMR）4.50.0032%深层分子学反应（DMR）参考文献1 YY/T0466.12016医疗器械用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号第1部分：通用要求2 YY/T11822020核酸扩增检测用试剂（盒）3 国家药品监督管理局.慢性髓细胞白血病药物临床试验中检测微小残留病的技术指导原则.2021年11月4国家卫生健康委员会.慢性髓性白血病诊疗指南.2022年版.2022年4月
