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1、医学微生物学,病毒感染的检查方法与防治原则,重点及难点,标本的采集和送检病毒分离培养方法病毒感染的血清学诊断方法人工主动免疫和被动免疫及其常用制剂,第一节 病毒感染的检查方法,标本的采集与送检病毒的分离与鉴定病毒感染的诊断,一、标本的采集与送检,采集急性期标本使用抗生素冷藏保存，快速送检采集双份血清,二、病毒的分离与鉴定,（一）病毒的分离培养,动物接种鸡胚培养细胞培养,动物接种,应用：无敏感细胞培养的病毒优点：结果易观察，可建立动物模型缺点：要有饲养条件，费用高，有潜伏病毒，对许多人类病毒不敏感,动物接种,鸡胚培养,优点：对多种病毒敏感，条件易控制，操作 简单，成本较低缺点：无病毒增殖指标；有
2、些病毒可致鸡胚死亡,鸡胚接种部位示意图,细胞培养,1.原代细胞 primary cells对多种病毒敏感来源困难,获取成本高可携带潜伏病毒,2.二倍体细胞 diploid cells对多种病毒敏感不带病毒，无致癌潜能用于病毒疫苗生产,3.传代细胞 continuous cell对多种病毒敏感繁殖能力高，传代时间长不能用于病毒疫苗生产,病毒在培养细胞中的增殖指征:,细胞病变红细胞吸附病毒干扰作用细胞代谢的改变,细胞病变效应 cytopathic effect,CPE,正常细胞,细胞病变早期,细胞病变晚期,红细胞吸附 hemadsorption,带有血凝素的病毒感染细胞后，能与脊椎动物红细胞结合,
3、鸡红细胞吸附于流感病毒感染的细胞,风疹病毒 人胚肾细胞CPE(),埃可病毒 人胚肾细胞CPE(),人胚肾细胞,埃可病毒,CPE(-),CPE(+),待检标本,风疹病毒(-),风疹病毒(+),病毒干扰作用 viral interference,某些病毒不引起CPE,但可干扰感染同一细胞另一病毒增殖，抑制该病毒的CPE。,（二）病毒的鉴定,形态学鉴定血清学鉴定分子生物学鉴定,1.形态学鉴定,光学显微镜 巨细胞病毒包涵体,透射电镜 SARS病毒,方法包括,Ag,2.血清学鉴定,用已知特异性抗体对病毒进行种、型和亚型的鉴定,ELISA中和试验血凝抑制试验补体结合试验,方法包括,3.分子生物学方法鉴定,
4、对病毒的蛋白抗原、核算进行检测,蛋白印迹技术核酸扩增核酸杂交基因芯片基因测序,新病毒的鉴定,核酸类型的测定理化性状的检测基因测序和生物对比,（三）病毒数量与感染性测定,50%组织细胞感染量红细胞凝集实验空斑形成试验,1.50组织细胞感染量 50 tissue culture infectious dose,TCID50,原理：测定50%细胞出现CPE的最小病毒量以CPE作指标，判断病毒感染性和毒力测定活病毒数量,2.红细胞凝集实验 red cell agglutination test,原理：测定使红细胞发生凝集的最小病毒量测定病毒总量（活病毒+死病毒）,凝集效价：能使红细胞呈+凝集的病毒最高
5、稀释度为凝集效价，该稀释度记为一个血凝单位,3.空斑形成试验 plaque formation test,原理：将适量病毒接种单层细胞，病毒增殖使感染的细胞脱落，形成肉眼可见的空斑,空斑形成单位（plaque formatting unit，PFU）：由一个感染病毒增殖所致,测定活病毒数量,三、病毒感染的诊断,形态学检查病毒成分检测血清学诊断,（一）形态学检查,电镜和免疫电镜检查光学显微镜检查,（二）病毒成分检测,病毒蛋白抗原检测 EIA、FIA、Wb病毒核酸检测核酸扩增技术核酸杂交技术基因芯片技术基因测序技术,（三）血清学诊断,中和试验血凝抑制试验补体结合试验凝胶免疫扩散试验特异性IgM 抗
6、体检测,血清学诊断的用途,分离病毒为时已晚无法分离或难以分离的病毒证实分离病毒的临床意义血清流行病学调查,原理：病毒中和抗体 病毒失去感染性,1.中和试验 neutralizing test,检测血清中抗体的水平鉴定未知病毒对病毒进行半定量较少用于临床诊断，用于人群免疫情况的调查,原理：病毒特异性抗体鸡红细胞 不凝集带血凝素病毒感染辅助诊断鉴定病毒型和亚型,2.血凝抑制试验Hemagglutination inhibition test,35,3.补体结合试验Complement fixation test,原理：用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中相应的补体抗体特异性低，抗体出现早，消失快
7、近期感染指标,第二节 病毒感染的特异性预防,人工主动免疫人工被动免疫,1.人工主动免疫,灭活疫苗减毒活疫苗亚单位疫苗基因工程疫苗重组载体疫苗核酸疫苗,2.人工被动免疫,免疫球蛋白血清丙种球蛋白细胞免疫制剂细胞因子,逆转录病毒复制示意图,第三节 病毒感染的治疗,第三节 病毒感染的治疗,抗病毒化制剂干扰素和干扰素诱生剂中草药新抗生素类治疗性疫苗治疗性抗体基因治疗剂,抗病毒化学制剂,核苷类药物阿昔洛韦、利巴韦林、拉米夫定等非核苷类反转录酶抑制剂奈韦拉平、吡啶酮、甲酸磷霉素蛋白酶抑制剂塞科纳瓦、英迪纳瓦、瑞托纳瓦其他抗病毒药物金刚烷胺、甲酸磷霉素,42,干扰素和干扰素诱生剂,干扰素干扰素诱生剂Poly
8、 I:C、甘草甜素、芸芝多糖,43,以流感病毒为例，试述病毒分离培养的一般程序。病毒感染血清学诊断常用的方法及原理？病毒感染早期的实验室快速诊断有哪些方法？病毒分离培养时对临床标本的采集和送检有哪些要求？病毒检测和细菌检测有什么区别？,复习思考题,中英文关键词,红细胞吸附 hemadsorption血清学检测 serological diagnosis细胞病变效应 cytopathic effect,CPE 血凝抑制试验 hemagglutination inhibition test50%组织细胞感染量 50%tissue culture infectious dose,TCID50,1 Neal Nathanson.Viral Pathogenesis and Immunity.(second edition)，北京：科学出版社，2008。2 Martn-Carbonero L,Poveda E.Hepatitis B Virus and HIV Infection.Semin Liver Dis.,2012,32(2):114-9.3 LaRussa P.Pandemic novel 2009 H1N1 influenza:what have we learned?Semin Respir Crit Care Med.,2011,32(4):393-9.,课外阅读资料,
