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1、P21基因多态性与华北食管癌的相关性P21基因多态性与华北食管癌的相关性作者：马玉泉，杨晓光，刘晖，李保庆，刘俊峰【摘要】目的：探讨P21基因外显子的3非翻译区第20碱基对的单核甘酸多态性对食管虢状细胞癌发生及淋巴结转移的影响.方法：选择202例ESCC患者和265例健康比照个体，采集静脉抗凝血5m1.,同时收集病史、个人及肿瘤家族史.以蛋白施K消化饱和氯化钠盐析法提取外周血白细胞DNA,分别采纳PCR片断长度分析和PCR限制性片段长度多态性方法检测P樱21外显子的3UTR笫20碱基对单核甘酸多态性基因型.结果：ESCC患者的P21基因3UTR的多态性基因鄢型和等位基因型分布与健康比照组差异无
2、厕统计学意义.ESCC吸烟组患者B21框的T/T基因型频率显著高于健康吸烟组眼.与C/C基因型相比，携带T/T基因姿型可增加吸烟者的ESCC发病风险.而徽在非吸烟的患者和健康个体中，P21的基因型及等位基因型频率均差异无统计学箱意义.有淋巴结转移组的P21的T/T证基因型频率高于无淋巴结转移组.与常见奶基因型C/C相比，携带T/T基因型可闲增加ESCC患者淋巴结转移的风险，经取性别、年龄校正的OR值分别为结论：P统213UTR的T/T基因型可能增加吐中国北方吸烟人群ESCC易感性并可能或增加ESCC患者淋巴结转移的风险性.&【关键词】食管肿瘤；癌，鳞状细胞胭：基因，P21；多态现象，遗传；疾病
3、液易感性；淋巴转移【Abstract咄】AIM:Toexplorethe衾infIuenceofthesing巡Ienucleotidepolymo仞rphismvariants(SNP泉s)inthe3untranslatedrcgion(3UTR)O瘙fP21geneonthedeve1铁opmentand1ymphaticmetastasesofesopha茉goalsquamousce11ca降rcinoma(ESCC).METHODS:Thehospitalbasedcasecontrolst蹒udyinc1uded202ESCCpatientsa11d265hea1欺thycont
4、rols.Genomi三cDNAwasextractedby厄usingprotEinaseKdi儒gestionfo11owedbya丈saltingoutprocedu装re.TheSNPsofP21wer卅eanalyzedbypolymer奘asechainreaction(P铳CR)fragmentIengthIfeanaIysisandPCRrestrictionfragmen11e痈ngthpo1ymorphismanalysis(PCRRF1.P).R遣Esu1.TSzTheoverallg义PcdistributionsofP锂smsinESCCpatientswydiffe
5、rentfromthos涩(P).Stratificatio热hattheP21geneTTal1揍ingpatients(%)wass贲thanthatinhealthys服herefore,compared*睥enotypeandalIeloty软213UTRpolymorphierenotsignificantl摆einhealthycontrols咿nanaIysisrevea1edtClefrequencyinsmok饕ignificantlyhigher鼾mokers(%,2=,P=).T后ithP2IC/Cgenotype,.塔smokerswiththeT/Tg玫Iyhadah
6、igherriskto沁ageadjustedA=,95%C娑enotypesignificant璐developESCC(sexand养1=).However,P21allelewasnotSignificantIydifferentinbotChnonsmokingESCCgr?oupandhealthygroup(P).TheESCCcases落Werefurtherstratif煜StatusoflymphaticmofdiagnosiSandther沉ep21TTalIelcwasmoentSwithlymphaticm铅withou11ymphaIicme零iedaccording
7、totheCtastasisatthetimeesu11sshowedthatth淞recommoninESCCpati漱etastasiSthanthose蚤tastasis.Comparedw爆ithfamiliarmonadel感phoustheC/Cgenotype,T/Tgenotypesign松ifican11yincreasedmetastasis(sexanda江I=).CONC1.USION:Thereasethesusceptibi-kersinNorthChinaandIcmetastasisinESCC离.旋theriSkoflymphatic延geadjustedA=
8、,95%C蚁扇P21TTalIelemayinc北1itytoESCCamongsmo被theriSkoflymphat畅Keywordsesopha茨geaIneoplasms;CHrC卮inoma,Squamouscel1同;genes,P21;polymo辉rphism,genetic：dis船easesusceptibility芟Hymphaticnictastas戴isO引言P21基因是近年来发觉银的细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂家族中漆的重要成员.P21基因的多态性与一些讯恶性肿痛的易感性有关1.但P21钿基因的多态性与食管癌易感性的探讨尚少粗见报道.我们采纳病例比照探讨方法，咎以探
9、讨P21基因型与食管癌发病及淋巴皓结转移的关系.1对象和方法对象X等X/XX选择河北医科高校第四医院行胃榕镜检查或住院手术治疗，经病理组织学证佥实的食管鳞状细胞癌患者202例，年龄萌33-75岁，其中185例有相关淋巴拶结转移资料记录的ESCC患者均经过外科手术.健康比照265例,年龄33郊69岁，为同期在河北医科高校第四医院便健康查体人员或河北省血站的献血员，无缺肿痛及遗传病史.全部患者及健康比照均葩来臼石家庄市或相邻市县，并均为汉族、瓦无血缘关系.ESCC患者的年龄、性别膛、吸烟状态、家族史、病理类型及淋巴结殒转移状况均来自住院病历；健康比照人员憩的以上信息由2名特地人员询问并记录.艾曾经
10、吸烟或现在吸烟，每日5支以上并持聆续2a以上者被定义为吸烟个体.家族中斗1名以上一级亲属或2名以上二级亲属患涅者属食管痢/贲门癌/胃痢者被定义为上隍消化道肿瘤家族史阳性.两组间性别和年龄构成比均差异无统计学意义.45例健图康比照和7例ESCC患者无相关吸烟资表料记录.在有相关吸烟资料记录的探讨对欤象中，ESCC组吸烟者比例与健康比照舐组相比差异无统计学意义.168例健康比照个体无UGIG家族史记录或记载不三清.ESCC患者中UGIG家族史阳性皙者比例的高于比照组.因此，UGIG闽家族史增加ESCC的发病风险，经年龄过、性别调整后的OR值为185例ESC刹C患者有临床资料，病理结果报告87人制有
11、淋巴结转移，98人无淋巴结转移,没c有远处转移.方法抽取外周静脉血5m怪1.,经枸椽酸钠抗凝，于4C冰箱保存，药并于采血后IWk内提取外周血白细胞D诃NA.P21基因型检测按PCRRF谣1.P方法进行.P21SW扩增引物5坨GAATTTGCCGTTGGGT镀CAAG3和5GGG郎CCGGGATGAGGAG3.盏3UTR发生一个CT的替代，从而产生一个PStl限制性醉切位点，T等蝴位基因存在该识别位点.PCR反应体系攫均为251.,其中模板DNAlOOn媾g,IOPCR缓冲液1.,Taq瑙DNA聚合海U,MgC12三ol/1.dNTPsmmol1.,上、下玩游引物各mo1.P2IPCR反应条件为
12、：94C预变性5min,94C变性45s,64C退火45s,72篇C延长60s,35个循环后，729继7续延长5min.取PCR产物81.进椽行限制性内切腑消化，经30g1.琼脂态糖凝胶电泳分析基因型.P21基因的P涸CR产物为868bp,经限制性内切障论PstI37C过夜消化后，T/T纯和屯基因型表现为133bp和735bp两个DNA片段，而C/C纯和基因型表现垃为133,256和479bp三个DNISA片段,CT杂合型表现133,25绩6,479和735bp四个片段.每一膈批PCR反应均以蒸馀水替代DNA作为赔阴性比照.1/10的DNA标本进行了2次分型以证明分型方法的牢靠性.统浮计学处理
13、：采纳SPSS软件包进行，应操用2检验进行基因型频率的视察值与预驿期值的HardyWEInberg平般衡检验.ESCC组与比照组的基因型辟和等位基因型分布比较均采纳2检验.-T以小条件1.ogiStiC回来法计算经工性别和年龄校正的比值比及其95%的可词信区间.P2结果基因SNP分布全部垸ESCC组与健康比照组的DA标本均经PCRRF1.P方法胜利检测出P2朗1基因的多态性基因型，经市夏检测标本橘的基因型与原始结果100%吻合.P2挎1基因型分布在ESCC组及比照组中均夔符合HardyWeinberg平衡莓.ESCC组和比照组P21等位基因T抹,C的频率分别为乐益和脑%：T/笈T,CT,C/C
14、基因型频率分别为受撤G,Ml%K%P2l等位基因锚型及基因型总体分布在ESCC组和健康陈比照组之间均无统计学差异.P21的T/T基因型频率在ESCC吸烟组显著做高于健康吸烟组的.而在吸烟的患者和肆健康个体中，P21的基因型及等位基因确型频率差异均无统计学意义.基因SN焕Ps与淋巴结转移的关系有淋巴结转移组窦的P21的T/T基因型频率高于无淋巴麻结转移组.与常见基因型C/C相比，携禅带T/T基因型可使ESCC患者淋巴结搂转移的风险增高3倍，经性别、年龄校正蟠的OR值为表1P21基因SNP分布分巍析表2P21基因SNPS与淋巴结转移郸的关系3探讨食管癌是人类常见的恶贿性肿瘤之一，其发生与性别、年龄
15、、种族撤有关.大多数食管癌患者年龄在555柄9岁之间，35岁以下的青年人很少发生苒，70岁以后发病率渐渐降低，男女发病菅比例约为2:1.降低食管癌发病率、死嘀亡率最有效的途径就是预防，尤其是病因礼预防.近年探讨表明，抑癌基因、代谢酶味基因、DNA修第基因等基因的多态性与个体对食管癌的易感性有关2-6.懦P21基因是近年来发觉的CDKI家族靳中的重要成员，在很多肿瘤的发生发展中扮演着抑癌基因的角色.探讨发觉,在胃骷癌、结肠癌、膀胱癌、卵巢癌和胆管癌中P21基因的表达与肿瘤的预后明显相关漱7.P21基因的多态性确定了个体哪的差异性，在不同的环境因素作用下，可以表现出对疾病的不同易感性.P21就基因
16、的多态性与一些恶性肿瘤如肺癌、乳节腺癌、子宫内膜癌、前列腺癌1的易感性有关.我们的探讨结果显示，病例慷总体分析并未发觉P21基因3UTR欺第20碱基对的多态性与ESCC的易感触性相关.然而，依据吸烟状况分层分析发状现，P21的T/T基因型频率在ESCC吸烟组显著高于健康吸烟组，与C/CA基因型相比，携带T/T基因型可使吸烟灼人群ESCC的发病风险增加3倍，经性挹别和年龄校正的OR值为而在非吸烟的患寸者和健康个体中，P21的基因型及等位基因型频率均无显著性差异.这说明17T基因型可增加吸烟者患ESCC的风险遴,表明T/T基因型的过量表达可能与吸沫烟所诱导的代谢变更相互作用，从而影响筑ESCC的易
17、感性.我们发觉，与C/C韩基因型相比，携带T/T基因型可使ES.鹦CC患者淋巴结转移的危急性增高3倍.噫这表明携带T/T基因型的ESCC患毛者更简单发生淋巴结转移，提示携带该基楹因型的ESCC患者在临床治疗时应尽可沐能进行淋巴结清扫，并进行相应的术后综合治疗，以削减淋巴结转移病灶的残留.综上所述，P21基因3UTR的多蛆态性分析可作为预料中国北方吸烟人群E嚼SCC易感性的分子指标之一，并可能用K于ESCC患者淋巴结转移风险的预料.【参考文献】etal.CDKN1.AandCDKN1BpoIymorphismsandriSkofadvanccdprostatecarcinomaJ.C姐ancer
18、Res,XX,63(9):2033-2036.2Miao梭X,YuC,TanW1Cta1.Afunctiona1po1ymorphiSminthematrixmetaHoprotEinase2genepromoter(1306C/T)iSassociatedwithriSkofdevelopmentbutnotmetastasIsofgastriccardiaadcnocarcinomaJ.CancerRes,XX,63(14):3987-3990.3ZhangZW,NewcombP,HolIowoodA,ctal.Agcassociatedincreaseofcodon72argininep
19、53frquen1KibelAS萤,SuarezBK1BelaniJ,cyingastriccardiaandnonCardiaadenoc蕊arcinomaJ.ClinCa颗ncerRes,XX,9(6):21喧51-2156.4ZhangJ,1.iY,WangR,etal.AssocIationofcyclinf)1(G870)PolymorphisIiiwithsusceptibilityIoesophagcaIandgaStriccardiaccarcinomainanorthernChinesepopulationJDtJCancer,XX,105(2):281-284.WuMS,W
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