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1、Egrl基因剔除对雨蛙素诱导小鼠胰腺炎影响1Egrl基因剔除对雨蛙素诱导小鼠胰腺炎影响Egrl基因别除对雨蛙素诱导小鼠胰腺炎影响作者：段佑才，姜泊，智发朝，宋于刚，陈学清【关键词】急性病KnockoutEgrlamelioratesCearuleininducedpancreatitisinmiceAbstractAIM:TostudytheroleofEgrlintheinitiationofacutepancreatitis.METHODS:ExperimentalpancreatitiswasinducedintheEgrlknockoutmicewithhighdoseofcearul
2、ein.Thepancreatitisindicessuchaswatercontentofpancreas,serumamylaseandmyeloperoxidase(MPO)activitiesweremeasured.Thehistologyofpancreasandlungwasobservedundermicroscopy.RESU1.TS:ThewatercontentofpancreatainEgrlknockoutmicewassignificantlyreduced(166.013.5)%vs(132.317.7)%,Plt;0.05.Nosignificantdiffer
3、enceofMPOlevelsinpancreataandserumamylaseswasfoundbetweenthewildtypeandEgrlknockoutmice.However,thelungMPOlevelsinEgrlknockoutmiceweresignificantlyreduced2comparedwiththoseinwiIdtypemice(168.141.7)%vs(274.098.7%),Plt;O.05.InEgrlknockoutmice,thehistologicalappearanceinpancreasandlungimproved,thoughso
4、mevacuolesinacinarcellsandlightedemainpancreaswereobservedinpancreas.CONC1.USION:TheseverityofpancreatitisandlungdamageisamclioratedinEgrlknockoutmicestimulatedbyhighdosageofcearulein,suggestingthatEgrlisoneoftheimportantfactorsintheinitiationofacutepancreatitis.Keywordsacutedisease;pancreatitis;ear
5、lygrowthresponsefactor1;mice,knockout【摘要】I=I的：探讨Egrl在试验性胰腺炎发病中的作用.方法：利用Egrl基因剔除小鼠，采纳大剂量雨蛙素诱导的试验性胰腺炎模型，视察Egrl基因剔除后，胰腺组织水肿，组织愤过氧化物酶(MPO)水平，血清淀粉城水平，肺组织MPO水平，以及胰腺与肺组织学变更.结果：与野生型相比，Egrl基因剔除小鼠胰腺组织水肿明显减轻(166.013.5)%vs(132.317.7)PltjO.05,但组织MPO水平与血清淀粉酶与野生型组间相比无明显变更：肺组织MPO水平与野生型组相比明显降低(168.141.7)%vs(274.098.
6、7)%,Pit:0.05.在组织学3上，Egrl基因剔除组胰腺和肺组织学明显改善，但胰腺腺泡仍有空泡变性及轻度肿胀.结论：Egrl基因剔除可明显减轻试验性腆腺炎胰腺和肺组织的损伤.【关键词】急性病；胰腺炎；早期生长反应因子1；小鼠，基因敲除0引言前炎性转录因子及炎性因子在急性胰腺炎的发生和发展中有重要作用.其中，核转录因子B(nuclearfactorB,NFB)及其靶因子的探讨加深了人们的相识1-4.核转录因子早期生长反应因子1(earlygrowthresponse在试验性胰腺炎早期高表达5.Egrl是炎症启动的关键因子，可能在急性胰腺炎的启动中有着非常重要的作用6.为进一步探讨Egrl在
7、急性胰腺炎中的作用，我们利用Egrl基因剔除小鼠，用大剂量的雨蛙素诱导制造急性胰腺炎模型，对Egrl的作用进行探讨.1材料和方法1.1材料Egrl基因缺失(EgnKo)小鼠(美国华盛顿高校JeffreyMilbrandt同意运用)饲养于12h光明/黑暗环境中，自由进食和饮水.由于EgrlKO的小鼠无生殖实力，故用杂合子的Egrl基因缺失小鼠交配繁殖可得到EgrlKO小鼠，杂合子小鼠及正常小鼠(野生型，wildtype,UT).小4鼠基因型分析鉴定采纳PCR方法.将诞生34wk的小鼠用蛋白酶K55C过夜消化后，加5mol/1.的氯化钠离心得上清，再将上清中入预冷的乙醇中，其沉淀物即基因组DNA.
8、基因型鉴定用常规PCR方法，引物为：egrl上游5ACCGGCCCGCGCC3,下游5GGGCACAGGGGATGGGAATG3产物片段400pb；neo基因：5CTCGTGCTTTCGGTTCGC3,和egrl上游引物一起运用，产物片段420bp.1.2方法小鼠(雌雄不拘，2226g)在试验前禁食24h,但可自由饮水.雨蛙素(CearUlein,Sigma)溶于生理盐水中(50g1.),ip50g/(kg#12539;h)5h诱导试验性胰腺炎结束时，用乙醛麻醉后翦开胸腔，抽取心内血液，并取少量肺组织.然后，剪开腹腔，显露胰腺组织，当心剪下放入预冷的中性PBS液(pH7.4)中，并剔除脂肪.一
9、部分固定于中性100g/1.的多聚甲醛，其它放入液氮中冷冻后，-70C保存.血液离心后取血清，分装后-70保存.正常比照组(Contr01,Con)小鼠注射同体积的生理盐水.试验分正常比照组，野生型雨蛙素组(WT)和Egrl基因剔除雨蛙素组(KO),每组5只.血清淀粉酶(PhaCIebaS淀粉酶试验)、组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO组织含水的比5率的检测，以及组织学检查参考文献3进行.其中酶活性和含水量，均为与比照的百分比来表示.统计学处理：数据均用(XS)表示.用SSPS数.0软件F检验对数据进行分析.2结果大剂量的雨蛙素可明显引起胰腺炎，胰腺组织表现为急性水肿、组
10、织间隙增宽，脯腺腺泡细胞明显肿胀，少数细胞表现为空泡变性(Fig1A),而正常比照组胰腺组织在组织学上没有明显的变更(Fig1B).在组织学上，KO组(FigIO无明显水肿，组织间隙无明显增宽，其组织水肿与正常比照组相比也无明显的差异.但是，胰腺腺泡细胞仍轻度肿胀及空泡变性，并可见少量炎性细胞的浸润.血清淀粉的(624.924.3)%、组织MPO(235.364.5)%和组织含水量(166.013.5)%在WT组与正常比照组织相比也均明显上升(FiglD),与文献报道相像.但是，大剂量雨蛙素不能诱导EgrlKO小鼠出现典型的试验性腆腺炎.对胰腺炎指标的检测表明，KO组的血清淀粉醉(565.03
11、8.0)%和组织MPO(235.049.6)%与WT组间无明显差异，但KO组的组织含水量明显减低(1323177%(Fig10).结果表明，Egrl基因剔除，可明显减轻胰腺组织的水肿.在组织学上，与正常比照组(Fig2A)和KO组(Fig2B)相比，6WT组(Fig20肺组织有大量的炎性细胞浸润.对肺组织VPo的检测(Fig2D)也表明，WT组(274.098.7)%明显高于比照组和KO组(168.141.7)%,但同时，KO组与正常比照组相比，MPo水平也明显增高.结果提示，Egrl基因剔除，可以明显减轻试验性胰腺炎肺组织的炎症.3探讨我们利用Egrl基因剔除小鼠,对Egrl在急性胰腺炎中的
12、作用探讨发觉，在雨蛙素诱导的胰腺炎模型中，Egrl基因剔除可明显减轻胰腺组织的水肿，表明Egrl对TF有调整作用5.Egrl基因剔除对于组织MPO及血清淀粉酶无明显影响.由于NFB是急性胰腺炎炎症的重要调整因子3,而且胰腺炎发生时腆酶本身对于胰腺组织的可能的干脆损伤作用，所以，我们认为胰腺本身的炎症和损伤在很大程度上可能与NFB和胰腺激活有关7.我们的结果提示,NFB和胰酶的激活在对胰腺组织干脆损伤方面可能起着较为重要的作用.虽然Egrl基因剔除不能完全减轻胰腺腺泡细胞损伤，但可明显减轻肺组织的损伤.以前的探讨表明，假如削减炎症因子如ICAMl,C5a在肺组织中的表达2,8,可明显减轻肺组织的
13、炎性浸润.所以，肺组织的炎症损伤是急性胰腺炎全身炎症反应的一部分.因此我们推想，Egrl基因剔除减7轻肺组织的炎症和损伤可能是通过削减胰腺组织所释放的炎性因子所致.【参考文献】1马茂，耿志琴，和新奇，等.地塞米松抑制炎症介质改善重症急性胰腺炎的预后J.第四军医高校学报.2002：23(10):932-934.MaM,GenZQ,HeXY,etal.ImprovingtheprognosisofsevereacutepancreatitisbyusingdexamethasoneinhibitinginflammatorymediatorsJ.JFourthMiMedUniv,2002：23(1
14、0):932-934.2刘学民，徐军，刘青光，等.ICAMl基因表达对大鼠急性重症胰腺炎肺损伤的影响J.第四军医高校学报.2004:25(17):1555-1557.1.iuXM,XuJ,1.iuQG,etal.InfluenceofiDtrapulmonaryexpressionofintercellularadhesionmoleculeonacutelunginjuryfollowingacuteseverepancreatitisinratsJ.JFourthMi1MedUniv,2004:25(17):1555-1557.3ChenX,JiB,HanB,etal.NFkappaBac
15、tivationinpancreasinducespancreaticandsystemicinflammatoryresponseJ.Gastroenterology,82002(2):122:448-457.4李振江，陈威，徐月清，等.重.症急性胰腺炎患者HV2CVVH清除细胞因子的作用J.第四军医高校学报.2004;25(9):846-848.1.iZJ,ChenW,XuYQ,etal.ClearanceeffectsofhighvolumecontinuousvenovenoushemofiItrationoncytokinesinpatientswithsevereacutepanc
16、reatitisJ.JFourthMi1MedUniv,2004;25(9):846848.5陈学清，姜泊，宋于刚，等.早期生长反应因子1和组织因子在大鼠胰腺炎组织中的表达J.第一军医高校学报.2004:24(11):1245-1247.ChenXQ,JiangB,SongYG,etal.Expressionofearlygrowthresponse1andtissuefactorinCaeruleininducedacutepancreatitistissuesinratsj.JFirstMilMedUniv,2004:24(11):1245-1247.6YanSF,FujitaT,1.uJ
17、,etal.Egrl,amasterswitchcoordinatingupregulationofdivergentgenefamiliesunderlyingischemicstressJ.NatMed,2000;6(12):1355-1361.71.erchMM,GorelickFS.EarlytrypsinogenactivationinacutepancreatitisJ.MedClinNorthm,2000;84(3):549-63.98BhatiaM.,Saluja.,SinghVP,etal.ComplementfactorC5aexertsanantiinflammatoryeffectinacutepancreatitisandassociatedlunginjuryJ.mJPhysiolGastrointest1.iverPhysiol,2001:280:G974-G978.
