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1、2024年衢州农业职业技能大赛农业技术员（水产）赛项技术文件一竞赛项目农业技术（水产），个人赛。二、竞赛形式竞赛采取理论知识考试（闭卷）和技能操作考核相结合的形式进行。两部分成绩均采取百分制，按照理论知识考试得分的30玳技能操作考核得分70%的合计，计算选手个人总成绩。三、竞赛标准以水产技术员国家职业技能标准高级工（国家职业资格三级）的知识和技能要求为主要依据，适当增加部分技师（二级）知识和技能。四竞赛内容理论知识考试参考书为水产技术员（中国农业出版社），适当结合国家渔业法律法规、方针政策、技术规范等内容。技能操作考核内容为（5个项目选3项）：1 .罗氏沼虾的解剖（附肢、内部器官等）；2 .水
2、生动物疫病快速检测；3 .常见经济水产动物物种的识别；4 .革兰氏染色镜检；5 .水质活性磷酸盐的检测（一）理论知识考试采取闭卷笔试的形式进行，题型为单选题、判断题和多选题。考试时间为120分钟，卷面分值为100分。由3名考官（裁判员）做好监考、评卷、复核、计算、登统等工作。（二）技能操作考核1.罗氏沼虾的解剖（1）考核目的：检验选手解剖罗氏沼虾的能力和实验操作的规范程度。（2）操作时间：30分钟。（3）操作步骤：每个选手操作台上备有比赛用虾一只，放置于解剖盘中。按照裁判口令，比赛开始时同时按下计时器。附肢解剖。取罗氏沼虾置于解剖盘中，观察外部形态与构造是否完整。随后将腹面朝上，用镶子或剪刀镶
3、住或剪下每个附股的基部，由后向前依次将附肢剪下，并按照顺序摆放在比赛用纸的相应位置上。内部器官解剖。将罗氏沼虾头胸甲除去，露出内脏器官。用摄子或剪刀取出完整单侧复眼、鲤（1片）、心脏、胃、肝胰脏、肠道、触角腺（1个），并置于比赛用纸相应的位置上。操作现场和赛后物品整理。参数选手应严格遵守实验室规章制度和考场秩序。操作结束后，将野体、仪器按要求归位，按下计时器，向裁判举手示意操作结束，经裁判许可后，结束比赛。2.水生动物疫病快速检测（1）考核目的：检验选手对于对坏急性肝胰腺坏死病病原、对虾白斑病毒、金鱼造血器官坏死病毒（鲤疱疹病毒II型）等常见水生动物病害实时荧光定量PCR检测能力和实验操作规范
4、程度。（2）操作时间：40分钟。（3）操作步骤：按照裁判的口令，比赛开始时同时按下计时器。待测样品处理检查样品盒，内含3份盲样和1份空白对照，共4份样品。离心约10秒。核酸提取D取出核酸提取试剂盒。向装有样品的离心管中加入4001.溶液1,振荡混匀1030秒。室温静置5分钟，离心3分钟。2）取出离心柱（套管），在管盖和管身处进行标记，移取上清液至离心柱中，离心1分钟。3）取出离心柱，倒弃滤液，把离心柱套回收集管中，加入500U1.溶液2至离心柱中，离心1分钟。4）重复第3步操作一次。5）取出离心柱，倒弃滤液，把离心柱套回收集管中，离心2分钟。6）取4支新的1.5m1.离心管，在管盖和管身处进行
5、标记，将离心柱转移至新的1.5m1.离心管中，加入100U1.溶液3至离心柱的膜中央，滴加时枪头不可触碰柱膜，室温静置1分钟，离心1分钟。7）弃去离心柱，盖好管盖，暂存于离心管架上等待检测。反应体系配制D打开核酸检测试剂盒，取6支检测试剂、NG管（阴性对照）和PG管（阳性对照），离心510秒（离心机离心PCR管时需搭配白色套管使用），在管盖处进行标记。2）打开管盖向各管管底分别加入51.核酸模板。加样顺序为阴性对照、空白对照、待测样品、阳性对照，盖好各管管盖，涡旋混匀510秒，离心510秒将试剂收集至管底并排净气泡。上机反应按照从左到右依次为阴性对照管、空白对照管、样品1号管、样品2号管、样品
6、3号管、阳性对照管的顺序将反应管放入仪器（放置在选手编号对应位置），等待工作人员运行仪器。将仪器、试剂、工具和耗材清理、归位。按下计时器，向裁判举手示意操作结束，经裁判许可后，结束比赛。3 .常见经济水产动物物种的识别（1）考核目的：检验选手对我国常见经济水产动物（鱼类、甲壳类、两栖类、爬行类等）物种的识别能力。（2）操作时间：20分钟。（3）操作步骤：参赛选手通过抽签随机抽取一个印有10种经济水产动物的图册。按照裁判的口令，比赛开始时同时按下计时器。经济水产动物物种的判别与结果记录。根据外观形态特征准确识别经济水产动物物种，并在记录表上按图册顺序依次写出其物种名称以及辨别依据。请使用规范的学
7、名名称，勿用俗称。操作现场及赛后物品的整理。参赛选手应严格遵守实验室规章制度和操作规程。操作完成后，将材料、仪器按要求归位，按下计时器，向裁判举手示意操作结束，经裁判许可后，结束比赛。4 .革兰氏染色镜检（1）考核目的：检验选手对于水产养殖常见细菌的染色鉴定和显微镜观察操作。（2）操作时间：25分钟（3）操作步骤：按照裁判的口令，比赛开始时同时按下计时器。在载玻片上滴一滴蒸馆水，无菌挑取少量菌落，在载玻片上均匀涂布开，干燥。将制好的片在火焰上灼烧几秒，固定涂片。草酸铁结晶紫（A液）染1分钟，自来水冲洗。加碘液（B液）覆盖涂面染约1分钟；水洗,用吸水纸吸去水分。加95蛤酉精（C液）数滴，并轻轻摇
8、动进行脱色，直至无紫色液体流出，水洗,吸去水分。蕃红染色液（D液）染1分钟后，水洗，干燥。镜检,将视野调清晰后示意裁判，并将结果写在答题纸上。操作完毕整理台面。按下计时器，向裁判举手示意操作结束，经裁判许可后，结束比赛。5 .水质活性磷酸盐的检测（1）考核目的：检验选手对于水质活性磷酸盐检测能力和操作规范程度。（2）操作时间：30分钟（3）操作步骤：按照裁判的口令，比赛开始时同时按下计时器绘制标准曲线。1）分别量取0111.,0.50111.,1.00m1.,2.00m1.,3.00m1.,4.00ni1.磷酸盐标准溶液于50m1.带刻度具塞比色管中，加水至50m1.标线，混匀；2）各加1.0
9、m1.混合溶液、1.Oin1.抗坏血酸溶液，混匀。显色5min后，注入5cm测定池中，以蒸修水作参比，于882nm波长处测定其吸光值Ai并记录。其中零浓度为标准空白吸光值A0；3）以吸光值（Ai-AO）为纵坐标，相应的磷酸盐浓度Gng/1.）为横坐标，绘制标准曲线。水样测定。1）量取50m1.经0.45m微孔滤膜过滤的水样，加入1.Om1.混合溶液、1.Om1.抗坏血酸溶液，混匀。显色5min后，注入5cm测定池中，以蒸修水作参比，于882nm波长处测定其吸光值Aw并记录；2）同时量取50血，水按相同步躲测定分析空白吸光值Ab并记录。记录与计算。将吸光值（AwTb）代入标准曲线线性回归方程计算
10、，并记录最后数据。操作台面及物品整理。操作完成后，将材料、仪器按要求归位，并清理操作台面。按下计时器，向裁判举手示意操作结束，经裁判许可后，结束比赛。五比赛规则（一）竞赛裁判农业技术员（水产技术员）技能竞赛聘请省内高校、科研院所、省内水产技术推广站等相关涉渔领域单位技术人员共3人为裁判员。大赛裁判工作按照公平、公正、客观的原则进行。（二）比赛规则1 .我市范围内，从事水产技术推广或相关工作满2年，年龄不超过55周岁。2 .参赛选手必须持本人身份证原件与参赛证参加比赛；不得携带移动通信设备、移动存储、参考书籍等进入赛场。3 .参赛选手出场顺序、位置、比赛所用材料、工具由抽签决定，不得擅自变更、调
11、整。4 .参赛选手提前15分钟检录进入赛场，并按照指定位号参加比赛。迟到15分钟者，取消比赛资格；比赛开始15分钟后，选手方可离开考场。5 .选手在比赛过程中不得擅自离开赛场，如有特殊情况，需经裁判同意。选手若需休息、饮水或去洗手间等，耗用时间计算在比赛时间内。6 .比赛在规定时间内结束时，参赛选手应立即停止操作，不得以任何理由拖延比赛时间。选手操作完成后，在技能操作现场记录表上签名确认，方可离开赛场。（三）注意事项1 .参赛选手须按规定的时间报到和参加各项竞赛内容。2 .参赛选手不得穿有单位标识的服装。3 .比赛所用材料、仪器、工具均由承办单位提供。4 .遵守纪律，尊重裁判，尊重选手，服从指挥。六、申诉与仲裁1 .参赛选手对不符合比赛规定的实验材料、有失公正的检测、评判、奖励，以及对工作人员的违规行为等，均可提出申诉。2 .比赛过程中或比赛后发现问题（包括反映比赛或其他问题），应由领队在比赛成绩公布后30分钟内向大赛组委会仲裁组提出书面陈述。领队、选手不得与比赛工作人员直接交涉。3 .大赛组委会仲裁组的裁决为最终裁决。七、其他本比赛办法与规则的最终解释权归大赛组委会。
