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1、人参灰耳病及灰葡萄胞致病机制研究进展AdvancesinPathogenesisMechanismofBotrytisCinereaandgraymo1.donPanaxginsengGinseng(Pmwx嫁C.AMcycr)isoOf1.hCimporamtraditiona1.medicina1.p1.antsinChinnandhassignificantmcdia1.andccxuncva1.ue.Recvn1.1.ygraymo1.dcPtintixt(inxencauedbyHotryiiscine/vaha%becomeaMiverediscaM：innor1.hcastChi
2、nn,whichhusrestrictedWNIairWbICdcw1.opmcntofgincngindustryTbcfngsmain1.yinfectedthe1.eaves,stems,fruitIIndespecia1.1.ypedice1.%!diep1.ant,vrhfedksertoucnpyie1.dkw.Inthisartic1.e,%cien1.icbniofeffiexrn1.Inunagenientstra1.eie%ofgraymo1.dxginsengwaxPnNided1.hmu)haseriesfBCarVhe*miVinI1.CnCCfadnrvandpat
3、hogenicfncchanismofIiotrythcintnu.InfcviionofBoirxiisCineuWaSaresu1.tofsynergyi1.udingregu1.ationofsiga!IranSdIK1.iOaPaIhfay.CXPreoiOnofre1.ativegeneundrxcin.produceoftoxinandSCCre1.iOnofcxt11cd1.1.urhydro1.yticenzyme.KevwoUs:Parwuginseng:Boiryfisc1.nerea:pathogenicmechanism人参(Mma1.xEW7次CA.Meyer)是我国
4、传统的名选中草药,具有极高的药用和经济价值.近年来,人黎灰雾病在我国东北人参主产区新流行成灾，斑曲主要危宙人参叶片、茎秆和果实，特别是每年78月花梗危杏，造成参籽严正减产.一般病株率为15%-3O%,严重卷床都过50%以上，己成为人参产业健援持续发展的限制性因素之一.灰葡荷胞8yisCinerwPcrs.:FQ寄主范围广泛、能够引起200多种植物灰霉病,主要包括多种粮食作物、经济作物、蔬菜、果树和药用植物田”灰矽荀抱菌是邰的胞M真菌中最大的类群,具有繁殖快、遗传变异大和适合强高的特点口例.灰名?苗作为一个双杂群体，在自然界中存在3种苗系，即曲核型(Sc1.erotium,Sc).他子型(Spo
5、nitation,Sp)和前丝型Myce1.ia1.,M),旦序I系间的致病力存在明显筮即UM叽灰期荀抱菌侵染寄主植物过程中产生多种致病因子,其中每种代谢产物在侵染过程中都有可旎起到不同的正要作用1例。细腮壁降解酹(Cd1.wa1.1.-degradingenzymes)有助于病阻赭侵入寄主表皮和将抗物加织转化成病原惭的生物痂：七港素Tbxins).草酸(OXa1.iCaeid)和活性熨(Reactiveoxygenspecies)可诱导寄主植物细胞程序件死亡(Programmedce1.1.death).病原菌侵染寄主植物后可诱导植物合成植保素.我1#萄胞可产生的类及小分子物质,抑制一系列的
6、植保素活性，这可能是其寄主施国广的原因之一。1人参灰霉病的发生危害1.1人参人介人金(PanoxgbUeHgCAMey为双子叶植物纲，伞形目，五加科，多年生，草本药用植物。人参别名为地精、黄参、神草，主产于亚洲东部，包括中国、期耕、韩国、日本和侬罗斯东部.是我国传统的名责中草西.具有极高的筠用和经济价(ft%神农本草经早有记载“人参.味甘微寒,主补五脏,安精神.定魂魄，正惊悸，除邪气，明目开心益智，久服轻身延年”.现在主要分缶在我国辽宁省东部山区，古林告长白山脉及近地山区和黑龙江省大小兴安岭一带的林区。为保护森林生态系统，正逐步推进林地到平地栽参的转变.目前人工栽培面枳已达200余万亩，占世界
7、产量的80%，分布在吉林集安、抚松、靖宇，辽宁清源、宽甸、新宾及黑龙江伊春和佳木斯等县市.a1-1人的主要分布TAbkI1.T:dftnbim”而十中分布地区经”度主产区中国北f4r-MAttfI1.73-B4tUT.古林、/龙江树3SJ2，东经120231由起令罗南g,北至两江堀HWXH33.7M5.I6,东壮IXr1?1“旭外拿岛金山、雨,比北、佚余、3W丝抱目(Hyphomyccta1.es),葡萄胞属既”今此),其有性组为子囊陆门(Ascomycota)盘的纲(DiSComycctCd核盘菌科(ScIerotiniaceac)货氏i1.葫胞盘菌(Botiyohmafucke1.iana
8、)141.共喜我是人参重要地上部病害,该病害1984年4月在中国浑北河口参场4年生的参地首次发现W,随后该病害在韩国也有发生的.目前，该病害在我国东北人参主产区新流行成灾.主要包括古林省集安市太王钺、榆林钺，辽宁省清源县、桓仁县，黑龙江省饶河和庆安县。1. 3人叁灰耳病的危害人参灰备病在整个人参生长期都可发生,病菌主要危害人参叶片、茎秆和果实特别是每年78月花使危宙，造成参籽严重减产.一般病株率为I5%-3O%,严重金床超过50%以上，己成为入参产业健康持续发屣的限制性因素之一叶片发病多从叶尖或叶边绿开始呈“V”形向内扩展，初呈水浸状,展开后为黄楣色，边缘不规则,深浅相间的轮纹，病地交界明显，
9、火生大麻灰色态层.茎染病时开始呈水湿状小点，后扩展为长圆形或不规则形，浅褐色,湿度大时病斑表面生有人质灰色霉层，严隶时致病都以上茎叶枯死：果实染病，残留的柱头或花IC多先被侵染，后向果实或果柄扩展，致使受害果实不能成熟，并生有厚厚的灰色褥层.2灰匐萄泡研究进展1.1 灰苓病的经济重要慢灰部萄抱(Miy1.iSCMereaPB.NG寄主范附广泛，能够引起200多种植物灰般病，对多种板食作物、经济作物、蔬菜、果树和药用植物的产量造成很大的损失，特别是成为设施园艺生产的主蹙限制因泰之一,t1.1.该病前为低温离湿、潜伏期长的弱新生致病|,不仅能弱危古出间作黝，还是种我要的E玻胡古，危害窖藏果蔬，如胡
10、萝卜、大白菜、蒜茶、甘蓝和草库等U1.1.茄子灰霉病，现已成为茄子保护地生产上的头号病害.现已成为主要危害果实.造成烂果、重发口1块高达4060%以上Uz2013年湖南省湖南的郴州、衡阳、旅阳、长沙、岳阳、怀化等地区的63个种抗草疆的大棚进行谢交,有的草药大棚病果率达到40%以上，且局部地区病杏发生较产业1.2. 2灰葡萄胞生物学特性关于灰窗荀胞生物学特性方面，对来自番笳、烟草、越橘、藤融,海棠等作物的灰霉曲进行了系统研究“川曳灰毒病菌为低温高湿的，赭丝在0C35C的温度范附内均可生长，产生分生胞子的温度范围为IOC25C,微核形成温度范用为15C-22SC,最适温度均为20C分生抱了萌发的最
11、适温度为20C-25C.在pH212的范困内该菌均能生长,最适PH为5F.灰毒病菌分生他于萌发的温度范围为1025C最造温度为20C。在PH372条件卜均能萌发,最适pH为S。分生饱子和两核的致死温度分别是3742C和46C。不同的曲株时温度的要求有一定的差异，但是无明显的规律，喜欢稍偏酸的环境。灰舜南作为一个复杂忖体.在自然界中存在3种曲系,即菌核型(SdCrOtiU叫Sc),他子型(Sporutation.SP)和菌统型(Mycc1.ia1.,M,且菌系间的致病力存在明显差异.SC菌系产菌核较强.Sp菌系菌落生长较慢,易产他fM菌系气牛.曲丝较发达.初致精力曲株以曲核型为主,苑子里和荷丝型
12、的株致病力较弱.闻。2. 3灰葡荀抱的致癌机制2. 3.1灰葡葡苑的侵入过假分生抱子来源于田间病残体、菌核或被侵染的寄主植物,可通过风传播.发生再次侵染.病害循环从病原曲接触寄主开始，分生抱子在寄主衣面萌发产生芽管,形成阳荷胞或侵染塞，侵入寄主表皮.植勒衣皮是病原菌侵入他物地上部的第一道屏障，角质层是其主要的成分,分别由角质层蜡质(Epicuticu1.arwax),包埋蜡质(Intracuticu1.arwax和角质层基质(CUIinmiUrix)组成,由灰葡前抱苗造成寄主植物表皮的物理伤害和机械损伤的现象很少见到睁”,说明酹类物旗在侵入的过程中起到关键性的作用221.蜡层是在叶片和果实表面
13、形成的一个具有防水功能的保护层，可以防止病原偏在植物表面形成的水膜中吸附、萌发和增用.接种前利除洋葱叶片的蜡层，可以增加ASqWWmS”的侵染概率W1.但非洲菊花和玫瑰花海的蜡层质卅与8.c加e*的敏感性无相关性口1.B.cinema可产生降低寄主表面张力的表面活性剂,进而分解蜡层.8.cM在含有脂肪酸图诱导子的培养基中，可诱导其产生一种分子量为60kDa的胞外脂Iw酷，这种脂舫前降解的不饱和长链脂肪酸酯是角质和蜡质的祖成成分I1.S1.尽管这种脂肪海的动力学性质与角质版的不同,但是它具有降解角粉的活性I矽.利用多克隆抑制活性位点研咒表明,脂肪梅在病原曲秘染寄主植物的过程中有.垂要作用。在接种
14、灰砌奇抱菜悬液之前，将脂肪酪抗体柩干健康的番茄叶片上，该物原|的芽管不能侵入表皮糕】.这种抗体既不能影响分生抱子的i爆发也不能阻码病原南侵染有伤口的植物组织，因此说明脂肪图的作用是有利于病原落侵入寄主龙皮，脂肪酷的一部分的氮疵酸序列被测出,2).鹿防的的相关基因IiPI被克隆.并获得缺失IiP1.基因的突变体灰葡萄胞菌株突变体在透导培养基中不能合成咆外脂肪防，但仍可以侵鎏寄主箱物没有伤口的叶片，说明的IW前不是病原K1.侵鎏叶片的必要因素.在蜡质层下的角质,是多聚腑防酸通过船雄.就化城和嵯健链接形成的更杂混合物.角质陆(CUtina$c)降解角旗分子,将不溶于水的角质多聚物(Cutinpo1.
15、ymer)降解成构成脂肪酸衍生物的单体和低聚物，灰前0抱倒代索物中纯化的角质曲是分子汆为18-kDa的蛋臼痂，由单倍休克隆的非洲嫡花抑制灰简器泡产生丽质f1.减轻了病因的扩展，因此可知角历触在病原陆侵入植物组织过程中起到关键性作刖。分子垃为18-kDa角质版的编眄基cutA被克隆I时.通过启动子(GUS)融合报告基因的方法.来分析CUtA基因的表达,在分生施子萌发和侵入寄主表皮细胞的过程中，该基因的表达艇上调)劭除CU1.A基因获得的转化子，与野生株相比对非洲菊花和番茄叶片的致病力并未降低。这些结论可知角颐的A不是衲原曲成功侵染完整用质层的必要因素I刈.灰胃J荀抱菌分泌系列的细胞毯降解解(Cw
16、DES)降解植物细胞壁,被降解的低聚物可作为营养物质被其利用。病原曲通常从植物表皮的垂周壁侵入植勒体内.同时这些例会造成抗物表皮细胞增膨胀1.财。细胞壁降解前主要包括果胶酣、纤维素筑等，其中果胶陶可降解细脆空中的果胶，是灰面箱泡倒的JE要致病因子之一川明.在分生抱于萌发之前,灰前面饱菌就可产生内切多聚半乳糖酹酸院(Endopo1.y驴IaCtUrOnaSe).在设入的过程产生两种等电点的多聚半乳精心酸解(Po1.yga1.acturonases)年此用以上结论可知灰葡而饱菌早期产生的醒系可能有助于加快其侵入植物祖织。2. 3.2灰菊的犯诱导植物税的在年性死亡灰初药饱菌穿过表皮,南丝侵染坏死的表
17、皮和叫肉细胞N1.将一些代谢产物和蛋白质施用干植物组织上,导致细胞死亡，其中一些可诱导细胞程序性死亡(PCD)。细胞程序性死亡的诱导有利于灰葡萄抱曲的侵染，可能是桥联的初期侵染成功的必要因素之MM),2. 3.3灰箭苟拖率索的致病作用灰1萄抱菌培养漉液中含有一些次生代谢产生的植物毒素,分别鉴定为高取代内A1.i(botcino1.idc)37.二环倍半祜烯(bo)和灰简荀抱的虫要致病因子.核盘衡突变菌株,无法产生草酸，对拟南芥(AnMdoP东Iha1.ia”Q无致病性,但外源施加草酸,该突变菌株的致病性快更WdW1.灰葡萄饱既可以在国体培养液1.也可寄主植物中产生草酸C.pH可以调控草酸的生成
18、，当周困环境的PH超过5时，就可以检测到草酸向1。2. 3.5灰葡萄施活性Jt的5麦作用在植物与病原菌互作过程中.植物体内活性做(ROS)在梢物的防卫反应抵御病原雨的入设与扩展.H2O2在抗病信号传导中处于水杨酸(Sa1.iCyIiCaCidSA)的下游,并能诱导病程相关蛋白的表达.另外,第化迸发(Xida1.ivcburs”是商主最快的抗病反应,可以在短时间内产生人量的活性氧物质。虽然过量的活性敏枳累会对植物细胞有很强的毒力作用，但其在抗物的抗病反应中却起希武要作用，ROS防娈植物抗性班因的表达和过敏性反应(hypersensitiveresponse.HR),这一系列的物的程序性死亡(PC
19、D)可限制病原菌对水和营养物质的利用.怛是,灰箱电他作为一种坏死营养型病原其菌,桢物细胞的死亡有利于其侵染植物,mi.有研究去明，灰旬旬他在技染川南芥和番茄中，植物的过敢性坏死反应(HR)是其致病的必要因索1例。在灰葡布施致病过程中，不仅可诱导植物产生RQS,该病原菌本身也能产生一些的催化生成HQ-Cu-Zn超氧化物歧化筋展囚(SUperoXidCdiSmUtaSCgCnC)和葡荀糖气化ig1.ucoseoxi(bscgene)被克隆卷定.然而灰葡电饱前的稳融化的魅因的龄除突变体没有降低对菜豆叶片的致病力，但是超氧化物歧化的基因的限除突变体的致病力明显减弱牌1.灰衙奇抱在入侵角质层的过程，触发
20、了弱化进发1.该反应也有助于猜照早期的形成阳1.BcnoxA和BcnoxB是两种柬要的NADPH氧化和，分别在病理的形成和侵入起到柬要作用.这两种基因的敲除突变体，失去致病力.NADPH辄化的也参与灰WJ荀抱菌核的分化,内切多聚半乳鼬!侪酸酹(BcPG1.)是被首次发现的灰前蜀抱致就因子1网，可以促发艳甜的ROS防御反应I木墩轴醉XynIIA)可以诱导罹病祖织的坏死。2. 3.6灰硝荷致场的空传解降的致病作用大多数病原菌都能分泌各种胞壁降解解.降艇组成植物细胞壁的各种多犍物质，从而破坏细胞壁以及中枝层，使植物细胞分离，加织溃散，致病的寄主植物会表现出不同程度的软腐或腐烂。醐动力学研究表明各种病
21、曲的细胞壁降解酸均有各自的最适反件和产醐条件。刘志恒等人的研究去明黄瓜褐斑病(Corytienporacas*iicMG能够产生一系列细胞壁降解陆(PG.PME.PMG.PGE.PMTE.B-Ga1.和Cx,且其在活体、内外的活性有明H不同.水解胸中的PG、PMG.Ga1.和CX表现最大府活性的条件分别PH为6.0,温度为25C、25匕、28C和28匕侬：裂解醉中的PGTE和PMTEJS大诲活的PH和温度分别为8.0和28C。还有,些生物因子如草酸、酚类物质、受寄主外港物、单宁酸、：阶阳离子和木质素等物质.对不同种类的果胶粉会产生不同的效应,即对某种果胶随产生抑制作用,但对其他果股构UJ能没有
22、影响，有时甚至有增加其活性的作用。用钾、氯离子混合液诱导黄瓜叶片，CX活性在一定时间内逐渐上升收)；儿茶素的培养液培养棉花枯萎病菌Fm“，+nr?Wru)，P1.和PG活性显若降低】；没食了酸、水杨酸等酚类物质可诱导人参桃腐病菌(C)，加dmww?$“,“)PG和CX的活性升高2.3.7灰防荀地果4的我在作用有些病菌在狭嵇过程中产生细胞增降解醒时，首先绛放的是果胶醉，其次是纤维泰酹和半纤维素陶，果胶桢是植物细咆中胶层的主要物质，是植物初生壁纤维索之间的主要填充物质，果胶质首先被降解，可造成植物组织结构松驰，其它细胞即成分暴露于各种降解的作用之下，有利于病菌进一步扩大侵染.果胶悔是一组诱导夏合梅
23、,对果胶分子中鼠李半乳精般酸链行不同的作用部位,主要包括果胶甲基图IW(PeC1.inmethyIeSterase.PE或PME).果胶水解/(Pcc1.ichydro1.ases)和果胶裂解醉Pectin1.yases.P1.)果胶裂解说和果胶水解陆的共同作用,是使*-1.4域伊覆断裂.果胶裂解防除作用于-1.,4ftHN外，还消除了第5位碳原子上的匆，形成不饱和逢.择放出不饱和的二米体.果胶水解最主要包括多聚半乳精心酸fi(Po1.yga1.acTuconascPG)和果胶甲基半乳糖繇酸陶PortinIncthy1.gaIactuitMiasc.PMG).作用于1.4助昔键，使聚半乳糖酸酸
24、水解，徉放出多聚体的半乳轴酸酸或单体。果胶甲基反式消除陆(PeCtinmcJhykrans-c1.iminasc.PMTE)和多聚半乳抵除酸反式消除PHygaIaciuronicMidtrans-e1.iminase.WjTE)就是分别以果胶酸和果胶质为基质的裂解解.果胶裂解版PI在8.09.0之间,最适PH偏减性,因此裂解作用需要Ca2+参与；水解解的p1.在60-8.0之间，最适PH偏酸性，在4.55.5之间。1990年，灰御奇剂的首个PG堪因(BePG)被克隆器定，至少包括6个法因(BCPgI6),经研究去明，灰蓟前抱在4种植物(番茄、菜豆、苹果和西葫芦)上不同的致病阶段，发达不同的BP
25、Ci.Bcpg1.在所有的植物中表达.Bcpg5只在苹果中表达,Bcpg2除了在苹果中未表达,在其它植物中均表达,突变体ABCPg2降低了对济茄和菜豆的致病力,病现抑制率为50X0%,说明BCPg2是灰削荀他重要的致病因子网.在果胶质中，果胶甲基隙唧(Pe1.inme1.hy1.esterases.PM)UJ以除去聚半乳胞解酸中的甲基基团以产生果胶酸(糖C6部位的理处水解)，产生卬野和糖醛酸殴茶，从而促进内切多聚半乳糖旌酸陆和果胶裂解酷的活性回1.RCignaUIt(1994)G纯化分离果胶甲基配用3有两个果胶甲脂解基因(BCPme1.和BCPme2)，P1.在7.17.4之间.纯化灰葡萄胞的
26、果胶甲南陶的P1.为74突变体Bcpmc1.催化产生形成NO网。研究表明，NO在植物与灰葡的饱互作过程中起关键作用。在人工培养条件下的苗丝、分生抱子和芽管中均可以产生NO,灰俯箱抱与寄主植物互作时也可以产生NO.灰匍而饱和植物黑织自身产生的NO都行助于灰匍荷饱荫丝的生长.在队前场他侵染植沏组织过程中,灰荀电池产生的NO可以参与寄主植物的过敏性坏死反应，NO作为植物的一个有效信号分子，跨过疏水漠，从而促进植物细胞的过敢性坏死反应如地。当灰俅勘他和植物产生的No达到定浓度就可以对机物有毒害作用，甚至细胞死亡.灰葡荀抱硝酸还限的Benr是No的主要合成途径，另外，灰期而他Bcihg1.基因的编码产物
27、F1.aVohCmogkbn参与No的解毒和转.4. 问题与展望近年来.人参灰客病在我国东北人参主产区新流行成灾，病菌主要危害人参叶片、茎秆和果实,特别是每年78月花槐危宙，造成参籽严重减产，已成为人参产业健康持续发展的限制性因素之一.目前对人参灰碌病的病原特性和发生规律均有一些研究，但对不同地区人参灰样病苗致病机制研究尚未见报道，灰葡葡胞作为一个复杂群体,是葡荷胞屈真菌中最大的类群.具彳j繁殖快、遗传变弁大和适合度高的特点，该病菌具有较强的抗药性,且人参必须进行GAP栽培,禁止高褥、高残留农药的使用,为该病害的粽合防治带来困难.近年,在灰霉病生物防治方面，取得了一些成果，利用木零曲分生胞子、
28、胶粘红解母、植物精油、内生拈抗萌芽抱杆带和大怒素可抑制灰旬的布南的生长，分离纯化生防物粒成分，对人参灰卷病的综合治理具有曳要速义.灰前蜀死曲侵染有主板物过程中产生多种致病因子，其中种代谢产物在侵染过程中都有可能起到不同的我要作用。细胞壁降解陂、毒素、草骸和活性氧相互协同，可诱导寄主板物细胞程序性死亡，导致病害的发生.曲帮分子生物学和生物技术的不断发展,国内外对灰仙筠泡的致病机制研究日益深入，主要包括致病基因、病程蛋白、毒素和信号转导在致病过程中的作用的研咒,以期为灰福病寻找新的病害防治方法提供有价值的参考.第二章人参灰霉病菌生物学及其致病性比较研究人参5XRMmxCAMcycr)是我国传统的名
29、贵中草药,具有极高的药用和经济价值U汽近年来.人参灰毒病在我国东北人参主产区新流行成灾，病菌主要危杏人参叶片、茎秆和果实，特别是旬年78月花便危古，造成茅籽严正制产.-殷病株率为15%3O%,严IR卷床超过50%以上，己成为人翁产业健持续发展的限制性因素之一.灰胃斶抱(BonfiscinemaPem:FQ寄主范用广泛、能够引起200多种植物灰露机主要包括多种粮食作物、经济作物、藐菜、果树和药用植物1刈。灰荀矽他曲是劭奇施属JX茵中生大的类群，具有繁殖快、遗传变异大和适合度裔的特点P呵。灰新曲作为一个友杂群体，在自然界中存在3种曲系，即带核型(Sc1.erotium.Sc).胞子型(Sporut
30、ation.SP)和菌娓型(Mycc1.ia1.,M).且茵系间的致病力存在明显若异1.为保护森林生.态系统，正逐步推进林地到平地栽参的游变,发展非林地就参，而部分参园临近其它疏菜、果树等作物，使得入参灰毒病与不同作物间交互感染成为可能。然而，不同地域来源的人参灰毒病阳的差异比较尚未见有系统研究的报道,因此，对不同地区人参灰毒病的萌生物学及其致病性进行比较研窕，招会为灰部荀抱菌种级及种以下单位的分类提供有益参考,也可为今后进一步研咒其致病机制、发病规律乃至制定有效的防控措施提供理论依据。1材料与方法1.1 材料供试菌株：2013和2014年生长季中，由解病组织样品分离到以卜.13个东北地区人参
31、灰霉菌、1个草莓灰霉菌和2个番茄灰霉菌菌株，供试菌株的编号等相关信息见表1.A2-1.Wft!ttrt1.R*y.fft.分底酢也、乘处地点及时间TaWe21.Number.bt.oqun.c*MkctioIOGniOMdtimeofXStediwMKtofB.cnyrd侑株Iwb1.cax1.e布主IhHI分内般快Or)：j1.1.cv1.ion100JtiiHi采集“刈Co!1.cvtiMi1.imePJA1.I人辞叶片立林谛方女巾2013年8J1.PJA1.2人警叶片AHViiVftitf2014年8月PJR1.3人等叶片小M省2次市2014年XJ1.FJARI人彩楸他古林由古安市2OI
32、3FSPJAR2人务m出林Vf衣女巾2013年8月PJ1.1.I人畲叶片古林由K在市占林农业大学20M年9月W1.U人等叶片。林方氏仔巾力林农业大学2U4年9J|PYe1.1人案叶片吉林VFiy安疥太EM2014年7月PY1.1.I人簪叶W比杵行泮女rt!榆林领2014年了PRH1.1.人参叶片黑龙江双，Ihitf密浇包丛20MF8月PQA1.I人叶H重龙江行盛化市庆女足2(II3H4年PH1.1.t人零叶片aW4tFtrHM2014年8月FSY1.I草体梁实辽宁普沈阳市沈阳设4火学2013年2J1.1.SYFi“实JC产省虎IH巾沈阳农业大学2014年7月1.SYF2范品果实江十省沈阳市沈阳
33、农业大学工“，年PB1.I.I人等叶片Jrr密本温而出(从八把包子20M年7月供试人参：用于供试菌株致病性鉴定的健康人参叶片来自2年生人冬移栽苗购买自辽宁省新宾县人参种植区。1.2 人参灰霉菌比较生物学研究1.2.1 培养基对病菌的影响将供试菌株直径为7mm的菌片分别接于PDA、PS.查氏、燕麦和水琼脂培养基平板上,J20C下培养，观察记录3d后菌丝生长情况，每处理每菌株重复3次。1.2.2 温度对病曲的影响将供试菌株直径为7mm的菌片接于PDA培养基平板上，分别于5、10、15、20、25、30C下恒温培养，观察记录3d后菌丝生长情况，每处理每菌株全夏3次。1.2.3 pH值对病菌的影响PD
34、,培养基灭菌后分别用HC1.、NaOH调PH为3、4、5、6、7、8、9.10.11,并制成平板培养基，将供试菌株直径为7mm的菌片接于PDA平板上，于20C下培养，观察记录3d后菌丝生长情况，每处理每菌株重现3次。124氮源对病菌的影响采用查氏培养基为基础培养基，以偷荀糖、麦芽糖、淀粉、乳犍和缺氮代替基础培养基中的旅糖，将供试菌株直径为7mm的菌片接于上述培养基平板上，于20C下培养，观察记录3d后菌丝生长情况，每处理每菌株重更3次。125氮源对病菌的影响采用查氏培养基为基础培养基，以牛肉酱、蛋白豚、酹母膏、丙氨酸和缺氮代替基础培养基中的硝酸钠，将供试菌株直径为7mm的菌片接于上述培养基平板
35、上，于20C下培养，观察记录3d后阑丝生长情况，每处理每菌株重复3次。1.2.6 光照对病菌的影响将供试菌株直径为7mm的菌片接TPDA培养基平板上，分别连续光照、光暗交替、连续黑暗处理的20C培养箱中生长。观察记录3d后菌丝生长怙况，每处理每菌株全复3次。1.3灰霉菌致病性比较将16个供试菌株（表1）于2（TC条件下，PDA平板上培养3d菌落边缘的7mm菌片接种于健康2年生人参叶片。每个曲株3个豆叶，每复叶接种3-5个叶片。取接种后置.于20C、RH为95%700%保湿培养3d,每日观察结果，每个处理3次JR复。根据各处理的病斑大小来评价各菌株致病力的差异”叫。1.4数据分析试验数据的分析均
36、用SPSSII.5和EXCd2003完成。2结果与分析2.1 人参灰耳病菌生物学特性比较2.1.1 培异基对病菌的影响由表2-2可知，供试商株在这几种培养地上均能生长，但在PDA和PSA培养基上的生长速度明显快于其它培养时PMRhPJA1.3、PYC1.I和PJ1.1.1.以适培养基为PSA,FSY1.kPJA1.1、PJA1.2,PY1.1.hPB1.1.kPQA1.kPH1.1.1.和1.SYH/适培养基为PDA,其余菌株为适培养基为查氏培养基.由此可见,不同菌株的最适培养基存在差异.经方差分析.不同菌株在相同培养基匕菌地生长速度存在显著差异.2-2境界基对*丝饯长的影笔TSb1.C32E
37、ffeCtofehurcmediumonmycdia1.gnwhhy,B.niweG搐也号.Iw1.a1.cwkr18倦11i?mmMycv1.ia1.diyne1.crPSAPDA燕麦玷舞达木轮标箱舞MFSY1.I61Mta36W61.97tO.85de49.25X1.05d26.71101.32e21.1.8t0.20XhPJARI755G32h75J31I.ISb4K7M57d36t1.921.h3.I5ME2IbPJAR273.9110.44c72.58tO.37K4.3OXI.I7Cf“43623c29.24如.57d5K.1.1.2ih24MMX32f2).7KH1.29hPMU7
38、1a3f0.85046cf65*X24ub2O75G41.h22.55tO.7OfPJAUJB.722Xaaa.58i.a62X*34be4X71tt26a37.MM1.(I7aPY1.1.I49M10Pi48.4SI,3?h“67如觑c892闻40iZToto.43jPB1.U67925dC.X4i1.(Hcd泡73UIjDgh26JWQ42c23.77HI.39cPYC1.I671Xa38d62.73t1.,99c585521h24IUO.26f2O.37tO.I4bPJUJ77.1.72h75.7511.93b49.2SM25dJ6u21.*a21.h29.X7.57hPQA1.I68H
39、G2S”61.8St2.68c42.31.3c2O68iG27h18.7710.35iPH1.1.J661.4XI.66dC1.)1.3.23CdfKI5IIc29.1110.54d25.49MI.51d1.SYFI623OtaSSc63.OtO.74c.1.9g(KI.72MJ.11C34JW26c3D.97(3Kb2.1.2摧度计病菌的彬脸由表2-3可知，供试菌株在525C均可生长.FSY1.1.PJ1.1.2.PRH1.kPH1.1.1.和1.SYp2最适生长温度为25匕，其余菌株在201时生长最快.从上述结果可知,不同灰仙葫他菌株菌丝生长温度范围相同,但最适生长温度存在差界，在20C下
40、，PJ1.1.3由丝生长最快，生长速度为2553m11Vd,PY1.1.I菌丝生长最极，生长速度为I382mmA1.经方差分析，相同温度条件卜茵株间生长速度差异显著，S2-3患度对Bte生长的影卑TaWe33Effect“InrpemiurewthbyArnvrd的煤整1.o1.ecgh2176x033曲41MtU464.97iO.85de67.1511.19cPJAR1.9451040hi4.21O71)hi592O17be75.33I.I5b7I,2MI32HbCPJR2I6j6J11J)2c46J7iO67C6.II.I7b7158tO.5?Z6941.12bePJAI.I1823416
41、3bJSI5IO5b44322O55cf6I.68fO.57d56TM.36dePJR1.215.171017dWJMt1.%d51.94*5.76cd6O.85t3.46de51.6910.90cPJR1.32(U7MX3MWMIS6738I52,83.5RiO.Iu75371.5OAPY1.1.I16奶ambe21.%037be3X71IF48.45t1.3?b4I,91I.74fPBI1.I9hi15TOiOWhiJ73241.y1.03Cd57.478.71dPYC1.I12j(Mia6cfI9.762I&cf494tO,3Z6173t1.99d41.1511.95fPJIJJI1.1.)32a33仪2D&2ON(15X83234be75.75O,93b72.5I.9JnbcP
