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1、种子学综合实验实验指导自编教材聊城大学农学院种子科学与工程系2010年3月说明种子学综合实验实跄指导是R合种子生物学、种子贮藏与加工、种子检验与质量控制等课程的课堂教学，结合本校、本地的实际情况，参考局部凡第院校的材料编写而成的。本实验指导的内容主要涉及到种子样样和分样技术、种子冷度分析、种子千粒重和容竟的测定、种子发芽试瞧方法、种子活力和生活力的测定、叶子水分的测定、种和品笄的紫定方法、ISTA小麦和大麦种子呼溶蛋白聚丙烯酰联凝胶电泳婆定品种的标准程序、种子包衣实验、种子储就与仓厚管理、种子健康的测定等实验，根本涵J1.了种子科学与工程专业所开设的专业课程，实酷内容既切合学生理论联系实际，又
2、具有科学性、系统性与瀛合性.本实验指导旨在稳固种子科学与工福专业课程的理论知识，加深对种子生物学、种子心藏、加工、质量检验等根底理论的理解和认识，使学生正项熟练的掌握种子学实酷技术和根本操作，熟悉所用仪器的原理，学会便用和维护，通过学生动手操作、观察记忆、分析归纳，学会种子好态、生理的测定方法，掌握种子加工和仓序管理技术，奉富学生的知识结构，地界学生的综合素质，为学生将来从事种子科学研究和种子生产经营管理奠定良好的专业技术根底.限于时间和水平，本实舱指导疏漏之处在所难免,欢送读者多提珍贵意见,以便修改和提高.编者夏秀红2010年3月目录实验一种子打样和分样技术错误!未定义书签.实验二种子净度分
3、析5实验三种子水分含量的测定8实验四种子发芽试验12第一局部种子发芽习性和幼苗主要构造观察12第二局部种子发芽试脸方法12实验五种子生活力的测定18实验六种子活力的测定20实物七种子容重和千粒重的测定22实验八种子脱匆傩活性的测定24实物九种和品种的种子形态和化学鉴定方法25实验十种和品种的幼苗形态与荧光鉴定方法28实验十一ISTA小麦和大麦种了醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定品种的标准程序30实验十二种子包衣实验33实验十三种子储敏与仓库管理34实验十四种子病宙的检验35实验十五种子虫宙的检验37参考资料38实验一种子杆样和分样技术（2学时）一、实验目的然急各种打样器和分样器的构造、原理及使用
4、方法，常握袋装和放装种子批的托样方法，掌握小容器（小包装）种干批的杆样方法.二、实验要求掌握种子打样和分样的原理以及方法。三、实验f1.（理杆样是用J1.具打取室内检验分析所需样M,而打取样品的数最与整批种子相比数必又很小.因此杆取和分取的样品必须能修代表整枇种子的质量.而且样品必须混合均匀.这样通过细致的分析检验才能获得一致和正确的结果。四、实验材料、仪和试剂小麦、水稻或玉米等袋装或散装种子批、小包装种子批、各式打样器、格式分样器、钟躺分样器、分样板、样品瓶、样品袋等.五、实验方法和步1 .了解情况2 .种子批的均匀度3 .划分种子批4 .打取初次样品（1）袋装种子批打样法首先根据欲检种子袋
5、数确定应打样袋数，其次均匀设置打样点，然后从各抒样点袋中打取初次样品。（2）散装种子批杆样法先按种子堆水平面枳分区设点，再按种子堆高度分杆样层,然后由上到下杆取初次样品.（3）小包装种子批打样法首先将小包装种子批合并成100kK为一个打样的根本单位，然后确定从每个根本单位中取出的数量，并取出作为初次样品。5 .配制混合样M各钱或各点或各抒样单位打出的初次样品.经它白粗查,只要质小大体一致就可将它的充分混合而如成混合样品。6 .分取送验样品用分样器或分样板从混合样从中分出规定数负（或略多）的送验样品，在全面检验时有三份送验样品：其中一份供净腐、发芽测定样品用,可用清洁的纸袋或布袋包装：另一份供水
6、分测定样品用.须用密封容器包装：第三份作为品种鉴定用,应尽快于2，1.h内送往检验室.六、作业和思考题1.试述各种袋装和散笠杆样器的优缺点，2 .试述杆样的主要步骤及考曲须知.3 .试述各种分样器的使用及考前须知.实验二种子净度分析（3学时）一、实殴目的种子净度足指种子清洁干净的程度.通过挣度测定.了解种子中净种子所占比例,也为测定其他工程如生活力、发芽率、千粒重等提供种子。二、实验要求识别净种子其他位物种子和杂质，掌提种子净度的分析技术,并练习其他位物种子数目的测定方法和结果计竟方法.三、实验理种子净度测定就是将样品中净种子、杂质和其他植物种子区别开来，如何区分是种子净度测定的根底.目前国际
7、上有精确法和快速法两种.我国目前以快速法作为国家胡准.四、实题材料和仪暑送购样品一份、检脸成、分样器、分样板、套箫、天平、小碟或小盘、镒子、小刮板、放大镜、木盘、小毛刷、电动筛选机、种子净度工作台等。五、实殴方法和步1 .送验样品的称重和重型混杂物的检查（I）将送险样品倒在台稗上称重，得出送脸样品取用V,（2）将送骁样品倒在光滑的木盘中，挑出流型混杂物,在天平上称史，得出董里混杂物的盅f1.tm,并将常型混杂物分别称出其他抗物种子弟麻m,杂质？fti11t11b与世麻之和应该等于.2 .试验样品的分取（1）先将送脸样品混匀，再用分样器分取试脸样品一份，或半试样两份,试样或半试样的重限见有关拿节
8、。（2）用天平林出试样或半试样的重Jit（按规定留取小数位数）.3 .试样的筛理与分析（1）选用箫孔适当的两层套箭，要求小孔箫的孔径小于所分析的f中子，而大孔崎的孔径大于所分析的种子.使用时将小孔崎套在大孔筛的下面，例入（羊）试样，加蔽，置产电动筛选机上或手工筛动两分神.（2）篇理后将各层籥及底盒中的别离物分别倒在净度分析桌上进行分析筌定,区分出净种子、杂质,并分别放入小碟内.4 .各种成分除IR将抵份（半）试样的挣种子其他植物种子、杂质分别称重，其称量精确度与试样称里相同，我中，其他植物种子还应分种类计数.5 .结果计算与处理（1）核位各成分的JR曜之和与样品原来的重玳之差是否用过5G（2）
9、计匏净种子的百分率（P）、其他的物种子的百分率（OS）及杂质的百分率（1）：先求出第一份（半）试样的P；、OSkInP.=（净种子重量各成分重埴之和）X1.OOOS产（其他梅物种子气砍各成分重累之和）X1.OOI.=（杂质更累各成分曲：*之和）X1.OO再用同样方法求出第二份（半）试样的P2、0S?、I”设为全试样，那么各种组成的百分率应计算到一位小数，假设为半试样，那么各种成分的百分率计算到两位小数。（3）求出两份（半）试样间3种成分的各平均百分率及重复间相应百分率差依，井核对容许差距.%（GBT35433-1995表二.（4）各型型混杂物样品的JR后换算结果的计算:P2=P1X（M-In）
10、ZMOSi=OS1X（M-三）1.+m1.M100I1=I1X（M-）M+mM100其中P卜（&、1.分别由分析两份（半）试样所犯的净种子、其他植物种子的各平均百分率，而P：、0S：,I：分别为最后的净种子、其他植物种子及杂筋的百分率.m1.M100为最后混杂物中其他植物种f的百分率，m：/MX1.OO为重型混杂物中杂质的百分率.（5）百分率的修约假设原百分率取两位小数，那么可经四舍五入保存一位。各成分的百分率相加应为oo.o如为的.g%或1.oo.1乐那么在最大的百分率上加上或减去缺乏或超过之数，如果此修约值大于0.%.那么应该检查计算上有无过失。6 .其他植物种子数目的测定（1）将取出（华
11、）试样后利余的送验样品按要求取出相应的数状或全部倒在检验桌上或样品做内，逐数进行检衣，找出所有的其他伎物种子或指定种的种子并计出每个种的种子数,再加上（半）试样中相应的种子数.（2）结果计兑可直接用找出的种子粒数来表示,也可折算为母单位试样重M（通常为每千克）内所含种子数来表示：其他植物种子含量（粒数Jkg）=其他植物种子粒数/送验样品的曳JA（g）X100六、果和处理填写净度分析的结果报告单净度分析的取后结果精确到1位小数，如果一种成分的百分率低于005%,那么填为微强,如果一种成分结果为零，那么须填报“-0.0-”.附表31净度分析结果记我表曳型混杂物检查：M（送验样品）=（g）（曳型混杂
12、)=(g)m1.=(g)m2=(g)净种子其他植物种子亚量合计样品原型重最差值百分率第一份（半）试样M(g)百分率（%）第二份（）试样/At(?)百分率（%）百分率样间差值平均百分率附衣3-2其他植物种了刈定记载龙其他植物种子测定试样由量：gJ他植物种子种类和数目名称粒数名称粒数名称粒数名称粒数净度（半）试样I中净度（半）试样11中剩余局部中合计或折成每千克粒数附表3-3净度分析结果报告单样品编号作物名称：学名：成分净种子其他梢物种子杂质百分率其他植物种子名称及数目或每千克含录（注明学名）备注七、思考JI1 .种子净度分析的主要步骤行哪些？2 .对于种子净度分析的实验数据是如何分析和处理的？3
13、 .种子冷度测定时行何考前须知？实验三种子水分含量的测定（4学时）一、实验目的种了水分是影响种子寿命和平安贮藏的重要因素，是分级定价的更要指标.在种了收照、闲运和贮藏期间都需要测定种子水分含量,以保证种子的平安贮敏和运给.本实物的目的就是让学生靠握测定种子水分常用方法的原理、步骤和考前须知。二、实殴要求了解电烘箱的结构.原理及使用方法.掌旌低恒温烘干法与高恒温烘干法刈定水分的方法及操作技术,了解电阻式和电容式速测仪的构造、原理和使用方法。三、实验材料、仪Q和试剂小麦、大豆、蔬菜等作物的种子、电热恒温鼓风枯燥箱(电煤箱)电脑水分测定仪、电容式水分测定仪、天平、样品食、部度计、枯燥器、枯燥剂、电动
14、种子粉碎机、广口瓶地堪钳、手套、角匙、毛笔等。四、实题方法和步1 .低恒溺供干法(032C烘箱法)(1)把电烘箱的温度调节到1IO1I5匕进行预热,然后让其保持在103土2C.(2)把样品盒置于IO32P烘箱中妁一小时左右,放枯燥器内冷却后用感量】/1000的天平称量,记下盒号和盅录。(3)把粉碎机时节到适宜的细度，从送验样M中取出15-25g种子进行磨碎(禾谷类种子磨碎物至少50通过0.511m的铜丝.筛,而留在1.Omm税税筛I：的不超过10%：豆类种子需要粗磨,至少有磨碎成分通过4.OB1.n筛孔：棉花种子要进行切片处理：小粒种子不需要磨碎)。(4)称取试样两份(放于预先烘干的祥品盒内称
15、摩)，每份4.5g5.Og,并加蔽。(5)翻开样品盒蛊放于盒底,迅速放入电煤箱内(样品盒柜温度计水银球22.5cm),持570Inin内温度上升至1032P时,开始计算时间.(6) 1032T烘干8h后，翎开箱门,戴上手您迅速僦上盒前(呆好在箱内箭好)，立即置于枯燥器内冷却，经3015in取出称重，并记录。(7)结果计算：水分%-(样品烘前重量样品烘后重量)/样品烘前重量X1.OO假设一个样品两次测定之间的容许差距不超过0.2%,那么用两次测定的舞术平均数衣示，否那么需要由新做两次测定。2 .高恒涉馔干法(130133C烘箱法)(1)把燃箱的温度调节到MO145T.(2)样品盒的准备,样品的磨
16、碎，称取样品等与1032C烘箱法相同。(3)把盛行样品的称M盒的蒜子置盘底，迅速放入烘箱内，此时箱内温度很快下降，在5IOmin内上升到13OC时，开始计算时间.保持130733。不超过2C,烘干1.h.ISTA规程烘干时间为：玉米4h其他禾谷类2h,其他作物种子Ih.(4)到达时间后取出，将盒盖盖好，迅速放入枯燥器内，经1520min冷却，然后林世，记下结果。(5)结果计算方法同上。3 .1.DS系列电M水分电脏快速刈定仪法(I)测量准备取出传感器周的的泡沫块,如果不取出那么不能IE常刑量.取出手柄(即电池盒)，把四节5号干电池装入电池盒内，然后压下电池，装入仪器中，物混中套在落料筒上.招仪
17、揖放在没有振动的平台上.将待测录样品进行初步筛选.去掉杂物。农表选择&种代号，使用时宜接查品种代号即可直接测量:（水分测Ift按一下电源开关,仪潺自检后故示品种号.按或键选择测量品种代号.将测收样品放入落料筒至漏斗下沿口平待用。物落料筒放于仪器传感器上，左手扶住落料筒.右手轻按落料开关，使样品全部均匀落诳测量传感器.小数点闪动数次后故示水分值.在显示水分值时，按一次“确认-键可显示样品重电，这时按一下“品种”键那么可显示待测品种温度，再按一次“品种”键可显示干电池的电压伯，再按“确认”键那么回到水分显示。关上落料简的科门，倒出传感器内的样品，准备下一次的测量.（3）误差修正确定修正值：一般应以
18、105C标准烘箱法测得的水分为标准，与测量值相减，即为修正值.如水分仪测吊出的水分值为9.6%,而需要显示的实际水分假为10.0,那么该品种应提裔。.九修正值即为。.九反之那么为负数.进入蟋正状态：倒出仪静内的样品.长按住“品种”犍不放.待显示数开始闪烁后松开.仪H示屏左卜角红色指示灯亮，同时仪器显示出厂时设定的欣认修正值为-oo,指示仪器已进入修正状态.修正：按“”溟将修正值提高0.4,然后按“确认”键保才，仪器将闪烁向认修正完成，按“品种”键或关机退出修正状态.（4）定标制备标准样品：用105C标准烘箱法制招高、中、低三个标准样品，进入定标状态；例出仪器中的样品，长按住”确认”键不放，待显
19、示数开始闪烁时松开，仪器显示屏左下痢红色指示灯亮，同时显示品种代号，指示仪器已进入定标状态.选出品种代号：按“”或“”犍盘选择品种代号.注意定标顺序：定标时应按照先低水分，再高水分，描后中间水分的顺序进行。标定低水分：取低水分的标样放入传想器，等待仪器显示测盘结果，将测盘结果修改为修正伯，然后按住“确认”迸直至数字开始闪烁后松开，一点定标完成.标定将水分：倒出样品.不要关机,再取高水分标准样品放入传感涔.等待仪器械示测址结果.将测地结果蜷改到标准值，然后按住“确认”键白.至数字开始因爆后松开，二点定标己经完成.复测标样；复测标准样品，测双误差WO.5%即表示定标成功，美机退出定标状套,如果误差
20、过大，那么需要曳新定标.标定第三点：如果上下水分样品的差距较大.可用中间水分进行第三点定标.方法与定低（或拓）水分样品相同。1.PM4115型电脑水分测定仪（电容式）（1）宜接测定法接通电源：按“开关”键翻开电源.选择品种：按“选择”键，母按一次，品种编号将增加一个,品种阑号12以后会回更到1.将样品装入自动料斗：在自动料斗上部套上料斗，但入样品直至样品从自动料斗中溢出，不要一下子倒光，要线慢均匀倒入.水平移开料斗，割掉多余样品，使其为平满的一杯.安装台座和自动科斗：将自动料斗的台座安装在本测定仪上使定位槽间前.对准台座的定位槽.自动料斗安装到台座上。测定：按“测定”过，小数点闪烁显示。倒掉样
21、品：格自动格斗的问门向前拉到关闭，把底部恢任成原样，从测定仪上卸下自动料斗和台座.倒掉样品.此时水分值显示保持不变.继续测定时.请从步骤开始.花生仁的测定：将料斗套在样品杯上，在56杪内均匀投入样品，直到样品从样品杯溢出为止。水平移开料斗，刮抻多余样品，使其为平满的一杯。按几次“选择”键.使从种名称显示为“8PEAN”花生仁.按“测定“键，小数点闪烁显示.“POCR”闪烁后开始倒入样品,“POUT消失,小数点闪烁4次后,显示水分值和测定次数.倒掉样品：此时水分值保特不变。连续测定时，清从步躲开始.(2)平均值的显示按“平均”犍后显示平均值：测定次数在29次时,会显示“AVE”，测定次数和平均值
22、.，再按“平均”健后下一次测定水分时的测定显示次数将从1开始.(3)水分值修正方法各品种的水分值可在-9.9%+9利的莅国内进行修正。设定为修正值怆入模式：请确认电源已经关闭，按“开关”键.在显示型号和其他内衣的期间内，连续按“选择”健,直至所有显示都消失,出现“BIAS”、修正值、“林”显示,修正值的初始值为0.选择品种：按“选择”键，母按一次“选择”键，品种编号将增加一个。修正值输入：增加修正值时，请按“测定”键，集按一次埴加01.%减少修正值时，请按“平均”谈，每按一次减少0.1%.切断电源：按“开关”健.可以切断电源.五、实殴结果及数据处理根据实验结果侦写下表：附&6-1种子水分测定标
23、准法记教友测定方法作物样品称重盒(R)试样(g)试样加盒重烘失水分烘前烘后g%低恒温烘干法12平均高忸温烘干法I2平均附衣6-2种子水分电子仪器速测法记载去测定方法作物编号123平均I,M4II5型1.DSSt六、思考题1.试述测定种子水分各种方法的原理和步骤.2.试述烘干法种子水分溯定时有何考前须知.实验四种子发芽试验（4学时）第一局部种子发芽习性和幼苗主要构迎虱家一、实验目的了解种子发芽的子叶出土型与子叶用土蟹发芽习性和有关种子种类，了解的子叶幼苗和双子叶幼苗的主要构造。二、实验要求掌握主要作物幼苗的主要构造.三、实殴材料和仪器洋葱、小麦、玉米、甘蓝、果豆、粒豆等不同作物的种子、无照发芽箱
24、、智能人工气候相、发芽盒、消毒砂、发芽纸，淡子，烧杯.滴灌等.四、实验方法和步1（1）将上述6种种子,分别搭入砂床,按规程规定的发芽条件,光下培养幼苗至幼苗主要构造发开出%（2）观察记毅:洋葱幼苗旗子叶出土型的单子叶植物.其幼苗主要构造包括初生根、不定根.芽、子叶带膝.小麦幼苗属子叶用上型的单子叶植物，其幼苗主要构造包括种子根（通常3条）、胚芽鞘、初生叶等。玉米幼苗及子叶留土型的电子叶植物，其幼苗主要构造包括初生根、次生根、不定根、中胚轴、芽精、初生叶，甘蓝幼苗属子叶出土型双子叶植物.其幼苗主要构造包括初生根、下胚轴、子叶、原芽等.菜豆幼苗属子叶出土型双子叶抗物，其幼苗主要构造包括初生根、次生
25、根、下胚轴、子叶、上胜轴、初生叶和芽。豌豆幼苗瓜子叶留上型双子叶机物,其幼苗主要构造包括初生根、次生根、子叶、上胚轴、瞬叶、初生叶和1芽.五、实融结果绘出主要作物幼苗的构造图，六、思考Je（I）绘画主要种f幼苗构造形态图,并注明各局部名称.（2）分析幼苗主要构造对播种后发芽出上和长成正常植株的重要性。第二局部料子发芽祓疆方法一、实殴目的种子是有生命的生产资料.种子发芽力的上下是决定种子质量的重要指标之一.因此,正确测定种子发芽力是一项重要的应用技术,本实脸自在让学生拿握标准发芽成脸方法。二、实验要求掌握主要未谷类和堆子叶植物种子小麦、玉米等种子的标准发芽技术规定、发芽方法、幼苗鉴定标准和结果计
26、算方法常提主要豆类和蔬菜种子的发芽技术规定、发芽方法、幼苗鉴定标准和结果计算方法.三、实殴M理水分、温度和空气是种子前发的必需条件，对于某些作物的种子来说还窗要光照或案暗条件，不同作物由于长期系统发行的影响，使得其种子形成了各自不同的萌发特性,HP不同作物萌发所需条件各有差异.因此在进行种子发芽试验时,必须根据作物种类、杼粒大小、种子的化学成分以及发芽床的保水供水性能等，选择适宜的发芽床，控制与供试种子相适应的发芽条件，以获得能代表种子质量状况的发56小麦品种种子笨酚染色纯度测定：取小麦品种的净种子样品,数取K）O粒X4次理更,预先用冷水浸种过夜，然后移到用用1%笨酚浸润游纸的培养血里盖上蕊子
27、，放在室温卜Yh后进行观察鉴定，按照颜色不同,区分本品种和异品种,计算品种纯度（%）.井埴入下表：附去8-3小麦品种籽粒米酚染色测定窃记衣品种各称景比本品种异品种颜色籽粒数目颜色籽粒数目1234合计品种纯度（K）3.大豆种皮愈创木酚过氧化物的柒色测定大豆种皮愈创木的过辄化物梅染色鉴定：取数个不同愈创木的-过氧化初番显色的大豆品种种子.每个品种数取5粒，每粒种子剥下种皮，分别放入试管并参加EI无离子水浸泡60分钟后.参加】0滴O5%愈创木酚溶液放田IO分钟后，参加1滴0.2%过氧化乳溶液，擢晃后，观察并记录好个品种的反响颜色，并填入下表：附表84大豆种皮愈创木的过辄化物筋显色登记表编号品种名称显
28、现颜色12315大亚品种愈创木的-过氧化物酹皿色签定的应用：取欲鉴定的大Q品种,按照上述方法进行鉴定,最后根据醐色反响，与标准样品相比拟，盥定品种的真实性。六、实验结果和数知处理根据实验结果填写上述各表格并填写实聆报告.七、思考题1 .种子种和品种纯度签定时，形态签定法的依据是什么？2 .籽粒藻的染色法胶定种和品种的原理是什么？试述具体的操作方法.3 .愈创木的过辄化物陆染色测定的原理和方法是什么？实验十种和品种的幼苗形态与荧光鉴定方法（3学时）一、实殴目的同一种作物的不同M种之间由于遗传根底不同，其幼苗的形态特征也有差异.此外，通过不同M种的幼苗或种子对紫外光的荧光反响不同.也可以将不同品种
29、鉴别出来.本实验旨在让学生掌握不同品种作物的幼苗形态与英光签定方法.二、实验要求了解品种幼苗形态特征鉴定和种子及幼苗荧光鉴定的原埋和操作方法.三、实验原理幼苗形态鉴定的原理是，在ifi室或培养箱中,提供植株以加速发行的条件，当幼苗到达适宜评价的发育阶段时，根据幼苗芽撕的颜色、幼苗的形态等对全部或局部幼苗进行格定，荧光鉴定的原埋是依据不同从种的种子和幼苗含有炎光物质的差异,利用紫外规照射物体后有激发光的现望.招不可见的短波光转变为可见的长波光.不同品种和类型的种子,其种皮结构和化学成分不同，在紫外光照射卜发出的荧光也不同。四、实物材料和仪试剂小麦玉米等作物芽鞘颜色不同的种子样品、不同荧光特性的大
30、麦等作物的种子样品和幼苗荧光特性不同的细麦草种子样品、发芽食、发芽纸、培养箱、智能人工气候箱、紫外荧光灯,放大饿被子等.五、实殴方法和步1 .禾谷类芽耨醐色胶定玉米芽鞘颜色鉴定：将玉米种子置于芽床，放在光照下25P培养35天，进行芽鞘颜色盥定.小麦芽鞘颜色鉴定：将小麦种子样品置于纸床放在20C光下培养57天,进行芽鞘颜色鉴定.以上签定结果记录于卜表：附去8-5禾谷类幼苗芽颜色恐定登记表作物名称品种名称幼苗芽拓颜色和特征2.大麦籽粒荧Jt特性胶定取几个不同荧光特性的大麦品种,分别放在荧光灯下籽粒不同部位的颜色，并记录于下表:附表8-6荧光特性记录表品种名称种子部位和荧光颜色芒内移外称秤尖腹沟小基
31、刺3.黑麦草幼苗根际戋光膝定法取黑麦草种干样M两份，各100粒，过于无荧光的白色酒纸上发芽，粒与粒之间保持一定距离，预先在201C恒温或1525C变温条件下发芽.在思暗或者漫射光照射下,发芽床保持湿润.至第十四天.将幼苗移至能外灯卜冬定，区分样品中幼苗根际有荧光的一年生组麦草和无荧光的多印生黑麦草，并记录于附表；附我8-7黑麦草幼苗根际荧光登记丧样品编号样品数及（粒）幼苗根际英光特性有荧光苗数无荧光苗散六、实验结果和数据处理将实验结果填入上述表格并填写实验报告.七、思考JI1.品种的幼苗形态特征睡定法的依据是什么？2 .种子及幼苗灵光鉴定的原理是什么？&总结种和品种鉴定各种方法的优缺点.实验十
32、一ISTA小麦和大麦种子醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定品种的标准程序(4学时)一、实设目的通过本实验.了解种子醇溶蛋白酸性聚丙烯胺凝胶电泳鉴定品种的原理,掌樨具体电泳方法,明了该方法的先进性和实用性.二、实殴娶求掌握种手酹溶蛋白酸性聚丙烯Itt胺凝胶电泳鉴定品种的电泳方法.三、实验展现从种子中提取出来的小麦和大麦籽粒的静溶蛋白，可用P1.1.值为3.2的鬃丙烯酰胺凝枝电泳(PAGE)进行别离，其电泳所出现的蛋臼侦谱带类型，与同品种的遗传组成有关，并可做为品种的“指钗”,，即为盥定品种的生化性状,因此可利用这种“品种指纹”来鉴定乩种的真实性，以及分析单粒种子个体的“指纹”来测定品种的纯度.四、实
33、险材料和仪舞试剂电泳仪、电泳槽、离心机、离心管、分析天平、电动种子粉外机、广口腋，核液管、吸耳球、微吊进样器、注射器等电泳用品，丙饰Rt胺、亚甲基丙烯酹胺、尿素、冰的酸、甘级酸、硫酸豆株、抗坏m酸、过就化氢、2-筑基乙酹、甲基绿、三斌IW酸、乙醉2一辄乙醉、考q斯克蓝R250或G250、低温低湿储藏箱、冰箱、酸度计，速纸,小烧杯。溶液的配制方法：1.提取液小麦提取液COOm1.):称收甲基绿粉剂0.05g,参加2552一氯乙醇，内参加无离子水定容至100m1.低温保存。大麦提取液(100m1.)：称取卬茶绿粉剂0.05g,蓼加20m1.2一氯乙解，参加18g尿素，再参加1.m1.2一遹基乙醇，
34、参加无离子水定容至1001，低温保存，2 .电极缓冲原液(500m1.)：吸取20m1.冰甜酸,参加2g甘氨酸.再参加无离F水定容至50O三1.,低温保存，使用时再稀释IO倍。3 .凝胶银冲液(2501.);吸取冰醋酸5b1.卷加0.25g甘氨酸，再参加无离子水定容至2505，低温保存.4 .0.6%过轨化乳液(30m1.)：吸取30%的过叙化氢溶液0.6m1.参加无黑子水定容至30三1.装入100m1.的流瓶，低温保存.5 .染色液10的三氯醋酸液(500.1)：称取50g三氯精酸,参加无理予水定在至500m1.考马斯亮蓝液(50111.),称取0.5g考斯斯亮蓝.溶于5(1无水泗精.6 .
35、凝胶溶液(200m1.)：称取丙烯俄胺20%亚甲基丙烯械胺0.8*,尿索12g,抗坏血酸0.2g,流酸业铁0.018.再参加120m1.凝胶缓冲液溶解，并用该液定容至2001,低温保存。五、实疆方法步1.样品醉溶蛋白提取取快设干个清洁枯燥的1.5m1.聚丙烯离心管.分别插入适宜的试管架即孔内，取小麦或大麦种子样品逐粒用电动种子粉碎机粉碎，邮粒夹碎的种子粉块放入一个离心管。出实性称定时，饵个样品近或35次.样品纯度测定时，每个样品测定50100粒种子，然后参加样品提取液，每管小麦参加0.21,每管大麦参加0.3m1.盅好后再室温下浸提一夜,加样前用5500r,Gin肉心15分钟,2 .凝枝玻璃封
36、缱从低温低湿储藏箱内取出凝胶溶液和过敏化双液，fH块胶版吸取这种凝胶溶液3f111.,放入小烧杯后立刻参加0.6%的过氧化乳液小半滴，摇匀后迅速导入封I1.处，梢加黑动，使整条继11充满胶液,让其在510分钟聚合.3 .濯制别肉胶和插入样品检从低湿低湿储藏箱内取出凝胶溶液和过氧化履液年块胶板吸取凝胶液17-18m1.,放入烧杯后立即参加一滴0.6%过氧化乳液，迅速摇匀，倒入凝胶玻板之间,马上插好样品梳,让我在510分钟聚合，4.加样在加样前，小心平衡的拨出样品梳，用沌纸吸去多余的水分，然后用做比进样器吸取醉溶去白提取液，版姆个样品加样1020ng,假设加样曜太多，会使蛋白质诺带模糊而难以分阴。
37、5 .电泳在电泳前.先将电极缓冲液稀科十倍.殷每个电泳楙1.U80a1.电板缓冲原液,加无离f水稀程到800m1.,分别注入前槽和后槽。注意整确保前后槽电极能连通。接好电极引跳，前槽接正极，后梏接负极，翻开电源，逐渐将电压调至500丫。电泳时要求在1520C下进行，如果气温偏高，可放在冰箱内、空网室或者接通自来水冷却,电泳时间一般为6080分钟.6 .固定和染色在固定和染色之前，按照好块胶版吸取35m1.1.0%考马斯克找液，再加上100m陶三氯醋酸液，配成染色液.小心的刹下胶版,切去样品槽局部的胶版,并切去胶版一小角以作左右标记.然后用无离子水漂洗.浸入染色液染色12天。7 .保存倒去染色液
38、.用清水源洗，并用湿状毛笔刷去胶版外表的沉淀物,然后用T渊酸液保存.也可制成干胶版或者装在聚乙烯薄眠袋里在4C冰箱内保存数个月而不变质.8 .电泳图谱鉴定(1)真实性赛定按电泳胶版蛋R痂显色的蓝色诣带绘下电泳图谢，并计算出Rft.与其品种的标准图谱比拟,以签别品种的真伪.(2)品种纯度测定按照品种标准图咯K别出不同的异品种种子粒数，计算出品种纯度百分率，六、实皖结果和数据处理根据实脸测定结果填写实验报告.七、考前须知1 .在选取种子时，不能选择再烂的、IIif1.质己分解的或变质的病粒，以免造成误检，粉碎好粒种子的程序和细度应根本一致，种干含水量应保持一致，每管参加提取液的量也应根本一致.2
39、.凝胶溶液必须保存在接近零度的温度下,而且存放时间不宜过长.灌制别禹胶时加过班化氮溶液、混匀、灌胶、插入样品梳等过程中动作一定要迅逑。3 .加样数此一定要掌握好，严防加样过多或过少。4 .电泳温度应保持在152（C范围内.5 .本实验中.股版较弱,且与玻板粘地较牢固.因此在制高股版时应尽Ift小心.八、思考题1 .醉溶蛋白酸性蜜丙烯限胺凝胶电泳器定品种的原理是什么？2 .醉溶蛋白酸性聚丙舔或胺凝胶电泳鉴定品种的具体方法步骡足什么？实验十二种子包衣实验（2学时）一、实目的种子包衣剂是由农药脱药、肥料、生长调节剂、成胺剂及配套助剂经特定工艺流程加工制成的，可直接或经稀糅后包覆干种干外衣，形成具有一
40、定强度和通透性的保护层服的农药制剂.种衣剂用于农作物良种包衣可以提高良种质fit,实现种子标准化、商品化和产业化,能踪合防治作物苗期病、虫、鸟、有利于种子保健,种子产前奴劳,同时苦种、省药、省工.具有明品的增产墙收作用；种子包衣用药哙收集中，靶标性强，最大限度减少了农药公杏，实现了经济、社会、生态效益同步增长。本实验旨在让学生学会种子包衣的方法.二、实验要求掌握常用的人工种子包衣方法的操作方法。三、如材料和仪参试剂小麦、玉米等不同作物的种子、包衣剂、一次性手套、型料袋、圆底大锅、大玻搪瓶或小铁桶等得四、实验方法和步1 .圆底大锅包衣法：将磔联大锅固定，洗净踪干，称取一定数成的种子倒入锅内，把相
41、应数处的包衣剂倒在种子上，用铁铲或木棒快速翻动搅匀，使包衣剂在种子外表均匀迅速的固化成膜后取出，装入聚丙烯编织袋，妥善保存.2 .切料袋包衣法：将适量的种子倒入到结实的塑料袋中再按照适宜的比例参加包衣剂,扎紧强I.上下快速摇动，均匀为止.3 .大瓶或小铁桶包衣：将一定数H的种子倒入带族的大玻璃瓶或者小铁通内，然后参加适当数员的包衣剂，蛊上就子，立即快速摇动，摇勾为止，五、实险结果和数据处理根据实验过程埴写实险报告.六、思考题1种子包衣的意义是什么？2.种子包以后应如何储存？实验十三种子储藏与仓库管理（2学时）一、实殴目的了解种子仓库类型、种子堆放方式，学会查仓、仓降温湿度测定的方法步骚，了解种
42、子仓麻内气体成分的动态变化.二、实I求掌握种子仓底温湿度以及：氧化搬含尔测定的意义和方法。三、实段材料和仪I1.试剂温湿度计、CO1.分析仪、测班仪等.四、实殴方法和步1 .观察种子仓底类型、种子堆放方式、种子入底时的品质、成熟度和玻静粒率等指标。2 .空气温湿度的检查：根据种子仓库的大小和形状设刈定点，用品湿度计测定各测定点的空气温湿度.3 .种子温度的检查：散装种子仓分上、中、下三层抽样检查.袋装堆放种子也应该定层、定点,检查上、中、下三层的种子温度。4 .空气二弱化碳和氧气浓度的桧,：仓库内设点，分别用C0；分析仪和数字测算仪测定各待测点处的C0；和6浓度.5 .根据所测定的种温、种子仓
43、库的温湿度、氧气以及二班化碳浓度等指标来分析种子的储减情况.并提出改良方窠。五、实验结果和数据处理根据测定结果填写实验报告.六、思考题1 .影响种子储藏情况的因素有哪些？2 .种子体该仓底：氧化搬和氧气浓度测定时要注意什么问题？实验十四种子病害的检验（3学时）一、实殴目的种子捕杏浮重危害农业生产,影像种子的繁ff和推广。在引种调种以及收购过程中要进行标宙检验.种子病H种类很多，检验方法也很多，应根据病晚曲的种类和侵染方式等确定具体的桧验方法，本实验旨在让学生掌握几种雷规种子病出的检始方法.二、实险要求掌握常规种子病害的检粉方法.三、实Ift材料和仪试剂小麦、玉米、大豆、水稻、绿豆等种子样品、显
44、微镜、天平、:角瓶、燕薄机、离心机、吸管、城病悻、盖破片、载玻片、培养皿、吸水纸、智能人工气候箱、2.4D溶液.%次氯酸钠、含0.01%琉酸桂霉素的麦芽或马铃磐左旋铺琼脂的培养域、麦芽或马铃普左板蒯萄糖琼脂的培养基、商镭酸钾溶液，放大镜等。四、实改方法和步1 .比接检验数取样品100粒X4次重笈，用肉眼观察种子外表有无病原体，如麦角、怨趣病胞子等。也UJ以借助于双目显微镜观察,取出病原体或病粒，珍重或计算其粒数，2 .吸张种干检验数取样品100粒X4次重更.浸入水中充分吸胀后用显微饿检查其外表或内部病害发生情况.3 .洗涤检麴分取样品2份，好份5g,分别例入100m1.三角腋内，参加无的水101,以了振荡机上振荡5-1。分神，将洗涤液移入/心管内，窗心3-5分钟.用吸管吸取上清液.留F1.mI的沉淀“部，粕加震荡.用干冷的细玻璃棒将悬浮液分别滴于5片我破片上.盖上前玻片,H1.100500倍的显微及观察.称片检查卜个视野,计算每个视野的平均胞子数，计兑出标的包子负荷量，根据下面的公式来计算：N=(nni115)nN：每克种子的抱子负荷收：n；：每视野平均池子数：n：盖破片面枳上的视野数：th：Im1.水的滴数；n.:供试样品的柬房.4 .培养后检脸(1)吸水锻法:*稻痛病取试样400粒种子，将培养皿内的吸水纸用水湿润，株个培养皿播25粒种子，22X:条件下用2h黑暗和1
