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1、中性粒细胞杀菌功能的检测一全血化学发光测定【基本原理】过氧化物生成系统在杀菌过程中起重要作用。中性粒细胞被激活时，其NADPH氧化酶亦被活化，发生氧化还原反应，形成过氧化离子，随后通过超氧化物歧化酶(SOD)将其转变为H2O2,参入细胞内杀菌。H2O2在过氧化物酶作用下,形成次氯酸和卤化物是另一种杀菌机理。过氧化离子不稳定，在其分解过程中可激活鲁米诺(氨基苯二酰脱)类物质，并使之发生荧光，通过生成荧光的强度可直接或者间接地测知过氧化离子生成的状况，即中性粒细胞细胞内杀菌力量。本法是氧化爆发检测中最为敏感，并可直接定量的方法。【试剂及材料】(1)肝素抗凝血标本(2)鲁米诺发光剂：先用DMSO溶解
2、鲁米诺，再用无菌的生理盐水配制成10-2molL的贮存液,盛于棕色瓶内(或外包黑纸)，4。C保存，可使用1月左右。(3)酵母多糖：将酵母多糖用生理盐水配成10mgml的混悬液，置水浴煮沸20min,1500rmin离心IOmin,沉淀物重新悬于EM-H液中(5mgml),4保存。(4)含0.05molHEPES的Eagle簸培育液(EM-H液),pH7.4(5)发光测定仪(6)金黄色葡萄球菌悬液【操作方法】(1)取一只小鼠，抽取静脉血0.5ml,加入肝素抗凝。在聚苯乙烯小管内加入肝素抗凝血(Mml及EM-H液0.8ml,混合后放入37C水浴保温20min;(2)加入鲁米诺发光剂20l(终浓度为
3、1051olL),混匀后置于仪器的测定室内,37C平衡IOmin,连续测本地5次,每次IOs;(3)加入酵母多糖液0.1ml,启动吞噬发光。每间隔3-5min,测6s或10s的化学发光一次，直至测动身光峰值；(4)给小鼠腹腔注射金黄色葡萄球菌悬液0.6ml后一段时间用上述方法测发光值及发光强度。前后比较中性粒细胞的氧化杀菌力量和中性粒细胞的吞噬功能。【结果分析】以发光强度(cps)为纵坐标，测定时间(s)为横坐标，绘制化学发光反应曲线。峰值主要反映中性粒细胞的氧化杀菌力量，发光强度的积分值反映中性粒细胞的吞噬功能。化学发光法，中性粒细胞在吞噬经调理的金黄色葡萄球菌过程中，伴有化学发光的产生，故可用化学发光仪测定中性粒细胞的吞噬功能及其代谢活性。试验证明全血化学发光试验可同时获得两种信息，即中性粒细胞的吞噬功能、代谢活性及受检血清的调理功能。由于中性粒细胞的氧代谢活性与对细胞的吞噬率亲密相关，杀菌力量与发光强度相平行，因此化学发光法可检测细胞杀菌功能。因此吞噬细胞化学发光测定法可用以讨论中性粒细胞的吞噬功能，代谢活性和血清调理功能，它可在生理温度和中性环境下测定，能较好地反映生理条件下吞噬细胞的功能，具有精确灵敏、样品用量少，简便快速等优点。其敏感性高于NBT还原试验。
