《QIAGEN-组织提取试剂盒课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《QIAGEN-组织提取试剂盒课件.ppt（25页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、DNA的提取,田秀君,DNA的提取,鉴于从现场收集的麻风标本多为全血，皮肤活检标本，鼻拭子，因此着重介绍从全血，皮肤活检标本中提取DNA的方法。,鉴于从现场收集的麻风标本多为全血，皮肤活检标本，鼻拭子，因此,实验一 皮肤组织中的DNA的提取,实验一 皮肤组织中的,实验目的：掌握从皮肤组织中提取麻风基因组DNA的方法原理及应用：麻风基因组DNA通常先用SDS裂解，蛋白酶K消化细胞，利用酚，酚/氯仿抽提纯化，经异丙醇或乙醇沉淀，获得基因组DNA。适用于PCR扩增，Southern分析等实验。,实验目的：掌握从皮肤组织中提取麻风基因组DNA的方法,商品化的试剂盒不需要酚/氯仿纯化，乙醇沉淀，而是将皮
2、肤组织经裂解液裂解，将裂解后的液体进入含硅藻滤膜的纯化柱，基因组DNA被吸附，洗液穿过纯化柱被抽走。这种方法具有快速，简便，安全的优势。,商品化的试剂盒不需要酚/氯仿纯化，乙醇沉淀，而是将皮肤组织经,方法一：,使用商品化的试剂盒提取基因组DNA,方法一：使用商品化的试剂,实验材料一 试剂盒成分:QIAamp DNA Blood Mini Kit,实验材料一 试剂盒成分,二， 其他试剂，仪器及耗材,1.5ml的离心管旋涡混合器55 水浴箱台式离心机（14000 rpm)96-100%乙醇0.8%琼脂糖凝胶及电泳装置,二， 其他试剂，仪器及耗材1.5ml的离心管,实验步骤,准备样本 将皮肤组织标本
3、从70%的酒精中取出，放入1 TE中浸泡1小时，取出后用消毒的剪刀，镊子将其剪成肉泥状。,实验步骤,消化样本 将肉泥状的皮肤组织放入EP管中，加入消化液ATL180ul和蛋白酶K20ul,55 消化大约72h，期间用旋涡混合器振荡混合助溶。消化好的样本成清亮透明。,消化样本,加入200ul的溶液AL，旋涡混合均匀 70 孵育10min,加热灭活蛋白酶K 加入200ul的（96-100%）的乙醇，旋涡混合数秒 轻轻的将离心管内的混合物转移到 离心柱内（切勿接触到离心柱沿）， 盖上管盖，8000rpm离心1分钟,加入200ul的溶液AL，旋涡混合均匀,将离心柱置于一个干净的2ml 收集管内， 将含
4、有过滤物的旧管丢弃 加入500ul的溶液AW1， 8000rpm离心1分钟 将离心柱置于一个干净的2ml 收集管内， 将含有过滤物的旧管丢弃,将离心柱置于一个干净的2ml 收集管内，,加入500ul的溶液AW2， 14000rpm离心3分钟 将离心柱置于一个干净的2ml 收集管内， 将含有过滤物的旧管丢弃,加入500ul的溶液AW2，,洗脱基因组DNA 将离心柱置于一个干净的1.5ml 的离心管内， 将含有过滤物的旧管丢弃 加50ul的溶液AE 室温孵育5分钟,洗脱基因组DNA,8000rpm离心1分钟 离心后的管底溶液即为所提取的DNA检测：琼脂糖凝胶电泳法观察基因组DNA,8000rpm离
5、心1,实验二 从全血中提取DNA,实验二 从全血中,实验目的：掌握从人的全血中提取基因组DNA的方法。原理及应用：大体与从皮肤组织中提取的原理及应用相同。,实验目的：掌握从人的全血中提取基因组DNA的方法。,实验材料一 试剂盒成分:DNeasy Tissue Kit,实验材料一 试剂盒成分:DNeasy Tissue Ki,实验步骤,（一）准备样本 将冻存在-40 的样本取出，在37 水浴中迅速解冻，融化。,实验步骤（一）准备样本,离心法纯化基因组DNA 在1.5ml 的离心管底加入20ul的蛋白酶 在离心管中加入200ul的全血 再加入200ul的溶液AL，旋涡混合15秒 56孵育10分钟,
6、离心法纯化基因组DNA,瞬时离心将离心管盖上的样品甩下来 加入200ul的（96-100%）的乙醇， 旋涡混合15秒。瞬时离心。 下述步骤同从皮肤组织中提取DNA,瞬时离心将离心管盖上的样品甩下来,提取鼻拭子DNA的方法,刘健,提取鼻拭子DNA的方法,在1.5ml Ep管中放入500ul PBST,.将鼻拭子棉花端剪下，放入Ep管中，使其棉花端完全浸入PBST中,将Ep管放入4C冰箱静置4-6小时,从冰箱中取出Ep管，挤干鼻拭子的水分，并弃去鼻拭子,在1.5ml Ep管中放入500ul PBST.将鼻拭子棉花,将Ep管放入4C离心机，离心20min，13000转,取出Ep管，小心地吸去上清，保留沉淀,加入50ul 0.1M的Tris-Hcl/EDTA，反复冻融（-40C-90C）3次,加入10ul 20ug/ml蛋白酶K，在56C水浴箱中孵育过夜,将Ep管放入4C离心机，取出Ep管，小心地吸去加入50ul,在放入100C中灭活10min,放入-20C冰箱中保存,在放入100C中灭活10min 放入-20C冰箱中保存,
