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1、肠道杆菌(enteric bacilli), 一大群居住在人和动物肠道中生物学性状近似 的杆菌, 广泛分布于水、土壤或腐物中。 分类学上的地位:伯杰氏系统细菌学手册 (第版)的第大类的兼性厌氧杆菌。 多数是肠道的正常菌群,少数为致病菌 至少有30个菌属，120多个菌种,肠道杆菌共同特点,形态结构 G中小杆菌，无芽孢，多数有周鞭毛（除志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌和EIEC），无芽胞，少数菌属细菌可形成荚膜。及菌毛,培养特性 需氧或兼性厌氧营养要求不高，普通培养基可生长，菌落相似，形成灰白色中等大小S型菌落。生化反应发酵葡萄糖产酸、或产酸产气；乳糖发酵试验：非致病菌 +，致病菌 -（除外变形
2、杆菌）。触酶阳性；氧化酶阴性；硝酸盐还原为亚硝酸盐。,EMB（伊红美兰培养基），乳糖、伊红、美兰,选择作用（弱选）,大肠埃希菌（非致病菌）,乳糖,发酵,产酸,伊红,结合,美兰,形成紫黑色金属光泽化合物,有色的乳糖发酵菌落,伤寒沙门菌等（致病菌）,乳糖,不发酵,伊红美兰不能结合,无色的乳糖不发酵菌落,EMB平板上的E.coli,SS培养基（沙门志贺培养基）乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌绿等抑制剂,选择抑制作用（强选）,大肠埃希菌 产酸 桃红色乳糖发酵菌落,伤寒沙门菌 无色乳糖不发酵菌落,胆盐、煌绿：抑制大肠埃希菌及G+菌，提高肠道致病菌检出率,乳糖发酵,中性红呈红色,乳糖不发酵,微生物检验1.分离
3、培养,2.鉴定（1）初步鉴定：确定肠杆菌科的细菌，应采用葡萄糖氧化-发酵试验及氧化酶试验与弧菌科和非发酵菌加以鉴别；肠杆菌科细菌的分群，多采用苯丙氨酸脱氨酶和葡萄糖酸盐试验，将肠杆菌科的细菌分为三个类群；选择生化反应进行属种鉴别。KIA和MIU将细菌初步定属。（2）最后鉴定：根据生化反应的结果初步定属、种，再根据血清凝集反应才能作出最后判断。,甲基红试验,原理：细菌分解糖，产生丙酮酸，进一步生成大量混合酸，使培养基pH维持在4.4以下，加入甲基红后，使甲基红呈现红色反应。此为甲基红试验阳性。培养基：葡萄糖蛋白胨水试剂：甲基红试剂结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+ 培养基不变色： 应用：是肠道
4、杆菌常用的生化反应试验，主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌,葡萄糖,丙酮酸,大量混合酸,H降至4.4以下,甲基红试剂,培养基变红,甲基红试验,甲基红试验,V-P试验,原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中乙酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的精氨酸所含的胍基结合，生成红色化合物。培养基：葡萄糖蛋白胨水结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+ 培养基不变色： 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌,葡萄糖,丙酮酸,乙酰甲基甲醇,二乙酰,V-P试剂,培养基变红,VP试验,脱酸,葡萄糖发酵形成丙酮酸后的不同代谢途径,葡萄糖,丙酮酸,
5、大量混合酸,H降至4.4以下,甲基红试剂,培养基变红,乙酰甲基甲醇,二乙酰,V-P试剂,培养基变红,脱酸,靛基质试验,原理：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。培养基：蛋白胨水试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛）结果：加入试剂后，培养基出现红色液面：+ 培养基液面为黄色： 应用：用于肠道杆菌的鉴定,靛基质试验原理,色氨酸酶,色氨酸,靛基质（吲哚）,玫瑰靛基质（玫瑰吲哚）,对二甲基氨基苯甲醛,靛基质试验,尿素酶试验,原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。培养基：尿素培养基试剂：酚红指
6、示剂结果：培养基变红：+ 培养基不变色：-应用：肠杆菌科属间鉴定,尿素酶试验原理,尿素,尿素酶,氨+CO2,培养基pH升高,酚红呈碱性变色,枸橼酸盐利用试验,原理：某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一的碳源，也能利用其中的铵盐 作为唯一碳源，细菌生长过程中分解枸橼酸盐产生碳酸盐和分解铵盐生成的氨，使培养基变碱，是指示剂呈碱性反应。培养基：枸盐酸盐培养基试剂：溴麝香草酚蓝（pH6.0以下呈黄色，pH7.6以上呈蓝色）结果：培养基变蓝：+ 培养基不变色：应用：肠杆菌科属间鉴别,枸橼酸盐利用试验原理,枸橼酸盐,铵盐,碳酸盐,氨,培养基pH下降,溴麝香草酚蓝 呈碱性变色,培养基变蓝,培养基,22
7、,埃希菌属,埃希菌属（Escherichia）有6个种，只有大肠埃希菌（E.coli）是临床最常见、最重要的一个菌种。 大肠埃希菌是肠道中重要的正常菌群； 在宿主免疫力下降或细菌侵入肠外组织器官后即可成为机会致病菌，引起肠道外感染； 一些血清型的大肠埃希菌具有致病性，能导致人类胃肠炎； 在环境卫生和食品卫生学中常被用作粪便污染的卫生学检测指标。,23,生物学性状,中等大小的G-杆菌、无芽胞、有周鞭毛、菌毛营养要求不高。肠道鉴别培养基形成有色菌落，SS平板上呈红色大菌落发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇产酸产气，分解蔗糖因菌株而异，尿素酶试验阴性。吲哚、甲基红、V-P、枸橼酸盐试验（IMViC试验
8、）为+ + - -。克氏双糖铁琼脂（KIA）：斜面和底层均产酸产气，H2S（-）。动力-吲哚-尿素（MIU）培养基为+ + -。,24,志贺菌（Shigella),人类细菌性痢疾的病原菌，俗称痢疾杆菌一、生物学性状形态与染色：G、短小杆菌、无芽胞，无鞭毛，无荚膜，有菌毛。培养特性：营养要求低，SS平板上呈无色半透明菌落生化反应：葡萄糖+，乳糖- H2S - ，动力- 可与沙门菌、大肠埃希菌区别。,25,培养SS平板,有色菌落,无色菌落,26,抗原构造及分类： O抗原（分类依据）：包括群和型特异性抗原A群:痢疾志贺氏菌 B群:福氏志贺氏菌 C群:鲍氏志贺氏菌 D群:宋内氏志贺氏菌 K抗原无分类意
9、义抵抗力：比其它肠道杆菌弱，粪便标本立即送检；易形成抗药性。,沙门菌属,是肠杆菌科中最复杂的菌属，有2000种以上血清型 对人类有致病性肠热症伤寒沙门菌，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌食物中毒鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌败血症猪霍乱沙门菌最常见,生物学性状,形态染色符合肠杆菌特点，多为周毛菌，有菌毛,伤寒杆菌的周身鞭毛,培养特性EMB、SS上呈无色透明乳糖不发酵菌落,麦康凯培养基上的伤寒杆菌菌落,EMB培养基，上为E.coli，下为伤寒杆菌,生化反应乳糖（-），葡萄糖（+），多数H2S+，动力+，尿素（-）抗原结构O抗原特异性低、稳定、分群（组）H抗原特异性高，不稳定，分型
10、Vi抗原（毒力抗原）不稳定，可阻止“O”凝集,流感嗜血杆菌,名称由来,于1892年由费佛博士在流行性感冒的瘟疫中发现。曾误认为它是1889年流感大流行的原因。直至1933年，发现流行性感冒的病毒性病原后，才消除了这种误解。,与流感的关系,是流感时继发感染的常见细菌,嗜血杆菌属（Haemophilus）,根据Bergys鉴定细菌学手册第九版（1994）记载，嗜血杆菌属列为群5中的亚群3，其中和临床有关的有9个种即：流感嗜血杆菌（H.influenzae）副流感嗜血杆菌（H .parainfluenzae）溶血嗜血杆菌（H .haemolyticus）副溶血嗜血杆菌（H .parahemolyti
11、cus）杜克嗜血杆菌（H .ducreyi）埃及嗜血杆菌（H .aegyptius）嗜沫嗜血杆菌（H .aphrophilus）副嗜沫嗜血杆菌（H .paraphrophilus）迟缓嗜血杆菌（H .segnis）代表菌：流感嗜血杆菌（H .influenzae）,1. 初次分离为G短小杆菌；2.陈旧培养基或恢复其病灶中，具有多形性（球杆、长杆或丝状）;3.无芽胞，无鞭毛，不能运动;4.毒力株（粘液型菌株）在营养丰富的培养基上，68h有明显荚膜，在陈旧培养物中荚膜消失。,流感嗜血杆菌（H.influenzae）,需养菌。培养较难。培养基中需加入血液，以提供X因子和V因子 （巧克力色培养基） X
12、因子 血红素 V因子 辅酶或辅酶 5%10%CO2,培养特性,巧克力色平板上培养：经35，1824h培养形成微小（0.50.8mm）无色透明，不溶血，呈露滴样小菌落。 48h后形成灰白色较大的菌落。,培养特性,当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在同一血平板上培养时，由于金黄色葡萄球菌能合成较多的V因子，并弥散到培养基里，可促进流感嗜血杆菌生长，故在金黄色葡萄球菌菌落周围菌落较大，而离金黄葡萄球菌越远者则流感嗜血杆菌的菌落越小。,卫星现象（satellite phenomenon）：,取流感嗜血杆菌分别接种于兔血肉汤和10%兔血清肉汤，35孵育1824h，观察生长情况。因流感嗜血杆菌生长需要X因子和
13、V因子，故只能在兔血肉汤中生长。也可在MH琼脂平板上密划细菌，再贴上含X因子和V因子的纸片，结果有三种可能：a.仅需X因子，如杜克嗜血杆菌和嗜沫嗜血杆菌；b. 仅需V因子,如副流感嗜血杆菌和副嗜沫嗜血杆菌；c.同时需要X因子和V因子，如流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌。,X因子、V因子需要试验：,生化反应： 对糖发酵不稳定。一般分解葡萄糖只产酸，不分解乳糖或甘露醇，对麦芽糖、蔗糖或糊精的发酵不稳定。 还原硝酸盐。有荚膜菌株产生吲哚。典型菌株不溶血。产生自溶酶，可被胆汁溶解。,流感嗜血杆菌,致病性, 致病物质为内毒素、荚膜、菌毛和酶类。 通过呼吸道感染，引起原发性或继发性感染。 原发性感染多由b型荚膜强毒株引起，为急性化脓感染，如脑膜炎、鼻咽炎、咽喉会厌炎、化脓性关节炎、心包炎及败血症等。 继发感染主要在流感、麻疹、百日咳、肺结核等后发生，多为无荚膜菌株引起。如慢性支气管炎、中耳炎、鼻窦炎等,微生物学检查方法,微生物学检查方法,抗原检测：检测体液或脓汁中的b型多糖抗原，用包被兔抗体的乳胶微粒凝集反应免疫荧光、荚膜肿胀试验亦可获得较高阳性结果分子生物学技术：PCR技术鉴定临床标本中的流感嗜血杆菌，并作为确定分离株的一种试验,鉴定依据,革兰阴性小杆菌、多形性培养采用巧克力色培养基，CO2培养血平板上有“卫星现象”X、V因子需求试验,
