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1、,专题2 微生物的培养与应用,微生物,病毒细菌放线菌真菌原生动物,是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。,一、微生物,特点：小 简 低,病毒的结构,病毒,病 毒,SARS冠状病毒、 禽流感病毒,朊病毒（蛋白质病毒）,吸附,注入,合成,释放,组装,病毒的增殖,病毒的增殖一般可分五个阶段，即：吸附注入核酸合成核酸和蛋白质组装释放,病毒的营养方式,：寄生,细菌的外形与大小,细菌,A. 球菌 B. 杆菌 C. 弧菌 常见的细菌三种典型形态,A,B,C,细菌的结构,芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可
2、以萌发，形成一个细菌。,芽孢：细菌形成的椭圆形的休眠体,菌落,单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。,菌落,细菌的菌落特征因种而异,放线菌,结构：单细胞原核生物分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）,（2）繁殖,孢子丝|孢子,链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素,微生物中发现了几千种抗生素，其中2/3是由放线菌产生的,应用:,真菌,酵母菌,酵母菌和霉菌,青霉,生 殖,腐生生活,孢子生殖,微生物的实验室培养条件：,（1）合适的营养和环境条件,（2）确保其他微生物无法混入,二. 培养基,1. 概念：
3、,按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。,液体培养基固体培养基,据物理性质分,天然培养基合成培养基,据化学成分分,选择培养基鉴别培养基,据用途分,2.类型及应用：,常用于工业生产,用于微生物的分离、鉴定、计数,加琼脂,常用于工业生产,常用于分类、鉴定,培养、分离出特定微生物,鉴别不同种类的微生物,在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。,根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成。,加入高浓度食盐的培养基: 不加氮源的无氮培养基: 不加含碳有机物的无碳培养基: 加入青霉素等抗生素的培养基:,选择培养基,分离
4、酵母菌、霉菌等真菌,分离金黄色葡萄球菌,分离固氮菌,分离自养型微生物,伊红和美蓝,和大肠杆菌的代谢产物结合,使菌落呈深紫色,并带有金属光泽,可以用来鉴别大肠杆菌,鉴别培养基,大肠杆菌,碳源,氮源,无机盐,水,3.营养要素,还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。,如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、碱基),牛肉膏,牛肉膏当中含有多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素等物质。该产品广泛应用于生物制药发酵及各种培养基的制备。,牛肉膏是采用新鲜牛肉经过消化、过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。有牛肉自然香味，易溶于水，水
5、溶液呈淡黄色。,蛋白胨,不同的生物体需要特定的氨基酸和多肽，因此存在着各种蛋白胨，一般来说，用于蛋白胨生产的蛋白包括动物蛋白（肉类）和植物蛋白（豆类）等两种。,蛋白胨是一种外观呈淡黄色的粉剂，具有肉香的特殊气息。它可以作为微生物培养基的主要原料。,三.无菌技术,1.无菌技术的概念,无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。,2.消毒与灭菌的概念及两者的区别,吸管、培养皿等160170、12h,接种环、接种针等,7075、30min 80、15min,100、56min,较为温和的理化方法，杀死物体表面或内部的部分微生物,（不包括芽孢、孢子）,使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的
6、微生物。,（包括芽孢、孢子）,煮沸消毒法,巴氏消毒法,化学药剂消毒,灼烧灭菌,干热灭菌,高压蒸汽灭菌,酒精、氯气、石炭酸等,紫外线,培养基，100KPa、121、1530min,四. 实验操作-大肠杆菌的纯化培养,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 计算称量溶化灭菌倒平板,（冷却至50）,倒平板操作,（二）纯化大肠杆菌,最常用的方法：平板划线法和稀释涂布平板法,接种环,接种针,平板划线的操作方法,平板划线法,一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。,一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单
7、菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。,稀释涂布平板法,涂布器,菌落数在30300间计数效果较好。,实验结果,菌种的保存,1、临时保藏法： 对象： 温度： 缺点： 2、甘油管藏法： 对象： 温度：,结果分析与评价课题延伸,（P20）,频繁使用的菌种,4（冰箱）,容易被污染或产生变异,长期保存的菌种,-20（冷冻箱）,【典例解析】,1.关于微生物营养物质的叙述中，正确的是( ) A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量,D,B,2.下面对灭菌的理解不正确的是
8、()A.防止杂菌污染B.消灭杂菌C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前,3.某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。（1）培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了 和 。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是 和 。（2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是 。（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于 中培养，培养的温度设定在37。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种 作为对照进行实验。（4）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有 种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越 。（5）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐 细菌，这种培养基被称为 。,氮源,碳源,无机盐,水,高压蒸汽灭菌,恒温箱,无菌水,多,高,选择培养基,盐,
