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1、精品课件,1,药理学实验,精品课件,2,实验一 药理实验基础知识实验二不同给药途径对药物效应的影响实验三 药物的协同作用和拮抗作用实验四戊巴比妥钠LD50的测定实验五 利尿药对家兔尿量的影响,药理学实验,精品课件,3,实验一 药理实验基础知识,一、目的1.掌握基本操作，锻炼动手、动脑能力；2.更好地掌握药理学基本理论知识；3.培养科学思维,精品课件,4,二、基本要求1.实验前：预习实验内容并复习相关理论知识；2.实验时 实验器材要妥善保管； 实验操作按步骤进行，仔细观察实验中出现的现象，实事求是地做好记录； 注意节约实验药品； 维持良好的课堂纪律。3.实验后 各组同学将实验动物处死，实验台擦干
2、净，将实验方盘送回准备室； 值日生搞好实验室卫生，将死亡动物送至指定场所； 书写实验报告。,精品课件,5,三、实验报告的书写1.题目2.目的3.原理4.材料：实验动物，器材，药品5.方法：用自己的语言简单扼要描述出来；6.结果：要求真实、清楚；7.讨论：将实验结果进行比较、分析；实验中有哪些不足之处；结果异常或失败的原因；8.结论：将实验结果进行归纳总结，应带有提示性质。,精品课件,6,四、实验设计基本原则1.随机原则使每一实验对象都有同等的机会抽到实验组或对照组中，除处理因素外其他因素尽可能均衡一致，从而抵消非实验因素的影响。2.对照原则 组间对照：阴性对照，阳性对照，同因素不同水平对照；
3、自身前后对照3.重复原则,精品课件,7,五、实验动物1.动物的选择 小白鼠：适用于需大量动物的实验，如某些药物的筛选，半数致死量的测定。也较适用于避孕药实验、抗炎镇痛药实验、中枢神经系统药实验、抗肿瘤药及抗衰老药实验等。 大白鼠：比较适用于抗炎药物实验，血压测定、利胆、利尿药实验，也可用于进行亚急性和慢性毒性实验。,精品课件,8, 豚鼠：因其对组胺敏感，并易于致敏，故常被选用于抗过敏药、平喘药和抗组胺药的实验。也常用于离体心脏、心房、肠管实验。又因它对结核敏感，常用于抗结核病药的实验。 家兔：常用于观察研究脑电生理作用，药物对小肠的作用。由于家兔体温变化敏感，也常用于体温实验，用于热原检查。
4、狗：狗是记录血压，呼吸最常用的大动物。还可利用狗做成胃瘘、肠瘘，以观察药物对胃肠蠕动和分泌的影响。在进行慢性毒性实验时，也常采用狗。,精品课件,9,2.实验动物的编号狗、兔等较大的动物可用特制的铝质号码牌固定在颈部或耳上。大鼠、小鼠如为白色可用黄色苦味酸在不同的体表标志上标记。,精品课件,10,3.麻醉药的选择局部麻醉：常采用2普鲁卡因做皮下浸润注射，可用于局部手术。全身麻醉：吸入麻醉：可将乙醚蘸在棉球上放入玻璃罩内，利用乙醚挥发的性质，经肺泡吸收，作用较快，适用于小鼠、大鼠短时间麻醉。注射麻醉：常用戌巴比妥钠和乌拉坦。,精品课件,11,4.动物捉拿及固定方法 小白鼠右手抓住其尾部放在鼠笼盖铁
5、纱网上，用左手拇指及食指沿其背部向前抓起颈背部皮肤，并以左手的小指、无名指固定其尾部，便可将小鼠固定在手上。 大白鼠用右手提起尾部，放在粗糙面上，左手的拇指和食指捉其头部，其余三指夹住背腹部即可固定。,精品课件,12, 豚鼠豚鼠性情温和不咬人，用手握住躯干即可。 家兔可用一手抓住家兔颈背部皮肤，将兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿势。在进行仰位手术操作时，可用绳带将其四肢仰位捆绑在兔手术台上。头部用兔头固定夹固定。,精品课件,13,5. 动物的给药方法 小白鼠 灌胃法(i.g.)：以左手固定小鼠后，使其腹部朝上，颈部伸直。右手持配有灌胃针头的注射器，自口角插入口腔，再从舌面沿上腭进入食道。小
6、鼠灌胃容量一般为0.1-0.3m110g。 腹腔注射(i.p.)：以左手固定小鼠，方法同灌胃，右手持注射器，取30度角将针头从下腹部向头端刺入腹腔。进针部位不宜过高，刺入不宜太深，以免伤及内脏。小鼠腹腔注射量一般为0.1-0.3mll0g。,精品课件,14, 皮下注射(s.c.)：用左手固定小鼠后，右手持注射器于拇指和食指捏起的皮肤处进针即可。 静脉注射(i.v.)：将小鼠置于特制的固定筒内或倒置的大漏斗下，让其尾部露出。用酒精或二甲苯涂擦尾部，或将鼠尾在50C热水中浸泡半分钟使血管扩张。左手拉尾端，右手持注射器将针头刺入尾静脉，推入药液。,精品课件,15, 家兔 灌胃：需两人合作进行。一人取
7、坐位用两腿夹持兔身，左手握家兔双耳，右手抓住两前肢。另一人将木制开口器横插家兔口内，压住舌头并固定之。取8号导尿管从开口器中部小孔插入食道。插管时如误入气管会出现动物的挣扎和呼吸困难。也可将导尿管的外端浸入水中，如有气泡吹出，表示插在气管内，此时应拔管重插。当判明导尿管在食道以内后，用注射器接通导尿管将药液推入。,精品课件,16, 皮下、腹腔注射：给药方法基本上同小鼠，唯针头可稍大，给药量可稍多。皮下与肌内为0.5-1.0/mg，腹腔为1.0-5.0ml/mg。 静脉注射：将家兔置固定箱内，拨去耳壳外缘的毛，选择一条比较明显的耳缘静脉，用酒精棉球涂擦皮肤，使血管显露。用左手拇指和中指捏住兔的耳
8、尖部，食指垫在兔耳注射处的下面，右手持注射器，将针头从近耳尖处刺入，当确认针头在血管中后，将药液推入。,精品课件,17,6.动物的处死：大、小鼠通常用颈椎脱臼法处死。,精品课件,18,一、实验目的 1.观察不同给药途径对同一药物的作用速度、强度的影响；2.观察同一药物从不同途径进入机体可产生不同的作用。,二、实验材料 注射器、针头、小鼠灌胃针头、烧杯、普通天平、硫酸镁溶液,实验二不同给药途径对药物作用的影响,精品课件,19,三、实验内容1.观察不同途径给小白鼠使用戊巴比妥钠后，麻醉开始时间、维持时间和麻醉深度的不同。,观察指标 观察给药前后的活动及翻正反射等情况。,精品课件,20,实验方法取体
9、重相近的小白鼠3只随机分为三组，称其体重分别放入钟罩内，观察它们的正常活动及翻正反射情况，然后按下表给药；观察小白鼠用药后的反应及活动情况，以翻正反射消失时作为麻醉开始指标。记录麻醉开始时间，麻醉维持时间，麻醉深度有何不同（用镊子夹其后肢看其反应）。,精品课件,21,实验结果 实验结果填入下表中不同途径对药物效应的影响,精品课件,22,2.观察同一种药物硫酸镁，给小白鼠肌内注射和灌胃给药引起的作用性质的不同。,观察指标 动物活动增加情况、呼吸急促、反射亢进、震颤、惊厥及死亡时间、炭末推进率等。,精品课件,23,实验方法 取禁食12h的小鼠3只，称重，分别标为对照组、灌胃组和肌内注射组按以下给药
10、：A：对照组：灌胃给生理盐水0.2ml/10g；B：灌胃组：灌胃给3.5硫酸镁溶液0.2ml/10g；C：肌内注射组：肌内注射给3.5硫酸镁溶液 0.2ml/10g。,精品课件,24,给药后注意观察动物的活动情况，是否有肌肉松弛的表现。15min后每只小鼠均灌胃给予5%炭末阿拉伯胶混悬液0.2ml。炭末灌胃后15min，将小鼠脱臼处死，剖开腹腔，取出胃肠道。剪去附着在肠管上的肠系膜,将肠管不加牵引地轻轻地平铺在玻璃板上(玻璃板上滴少许盐水)。以幽门为起点,测量炭末在肠管内的移动距离和小肠(自幽门至回盲部)的全长,计算每只小鼠炭末的移动距离占小肠全长百分率，比较3组动物的活动状况和胃肠炭末推进率
11、有何不同。,精品课件,25,实验结果 实验结果填入下表中不同途径对药物效应的影响,炭末推进率计算公式：,炭末的移动距离（cm） 小肠推进率 = 100% 小肠全长（cm）,精品课件,26,六、思考讨论题 1、灌胃和腹腔注射给硫酸镁的效应有哪些不同？为什么？2、给药前动物禁食12小时的原因。 3、为何比较炭末推进率，而非小肠全长或炭末在小肠内的推进距离？4、本次实验结果对临床用药有何提示？,精品课件,27,实验三 药物的协同作用和拮抗作用,目的观察激动剂与拮抗剂之间的相互作用材料兔子只，0.05%硫酸阿托品注射液,0.1%盐酸肾上腺素注液,0.2%硝酸毛果芸香碱注射液,精品课件,28,方法、取兔
12、放于兔固定箱内固定，避免阳光直射眼睛，用毛剪剪去兔两眼睫毛，然后用瞳孔量尺测量瞳孔大小，连续三次，取平均值。、在兔左眼滴入.2%毛果芸香碱3滴，滴药时用姆指和食指将下眼睑提起,使成囊状,再用中指压住鼻泪管开口处,防止药液流入鼻泪管而不起作用，再用右手滴入药液。15分钟后再测量瞳孔大小，连续三次，取平均值，并进行比较。,精品课件,29,3、滴入毛果芸香碱20分钟后，分别在两眼滴入0.1%肾上腺素3滴，15分钟后测量两瞳孔大小，连续3次，取平均值并进行比较。4、滴入肾上腺素15分钟后，分别于两眼滴入0.05%硫酸阿托品注射液3滴，15分钟后观察两眼瞳孔变化，并测量其大小，连续3次，并取平均值。,精
13、品课件,30,记录,讨论题 从实验结果中如何说明药物的协同作用和拮 抗作用？,精品课件,31,实验四 戊巴比妥钠LD50的测定,一、毒理学实验方法1.急性毒性实验：一次性大剂量给予药物后观察药物的作用；2.慢性毒性实验：长期连续多次给予中、小剂量的药物，观察动物一些器官的慢性受损程度；3.特殊毒性实验：致癌，致畸，致突变，过敏反应等。,精品课件,32,二、LD50的测定的目的与原理目的：通过实验学习测定LD的方法、步骤和计算过程，了解急性毒性实验的常规方法。LD50是指使一群体动物中半数死亡的剂量，是衡量药物毒性大小的指标，是评价药物优劣的重要参数。了解药物单次给药或短时间内多次给药后动物所产
14、生的毒性反应及其严重程度，为临床安全用药及监测提供一定的参考。,精品课件,33,LD50的测定方法很多，较为常用的有改良寇氏法、简化概率单位法、序贯法、孙瑞元点斜法和Bliss-Finney法。本实验介绍结果较准确、计算简便、可计算出全部有关参数的改良寇氏法及及计算机应用程序中的Bliss-Finney法。,精品课件,34,三、具体实验(以戊巴比妥钠为例),材料1.动物：小白鼠(体重18-22g，雌雄各半，实验前禁食12h)2.器材：注射器、鼠笼、天平 、计算器等。3.药品：戊巴比妥钠,精品课件,35,实验方法1、预实验：探索剂量范围：根据经验或文献找出动物100%及0%死亡的剂量，即上下限剂
15、量（Dm,Dn）。对于无毒性参考资料的药物，一般先配制最大浓度药剂，然后按等比关系（如2：1）稀释成多个剂量，方法是每组取2 10 只小鼠，按估计剂量给药，如果全死则降低剂量，如果全活则增加剂量，进而确定出Dm,Dn。,精品课件,36,确定组数、计算各组剂量：组数（G）：5-8 组各组剂量：各组剂量要按等比级数排列，按下列公式求出公比r:按公比求各组剂量：D1，D2，D3，D4，D5，Dm其中D1=Dn=最小剂量，D2=D1 r，D3 =D2 r，Dm =D n-1r配制等比稀释溶液：要求各小鼠给药容积一样，0.1ml/10g0.2ml/10g，按下列公式计算浓度：,精品课件,37,2、正式实
16、验分组编号：随机将小鼠分为五组，每组10 只，各半。给药：分别将配制好的等比稀释液按0.2ml/10g 由ip 给药。观察记录：给药后观察并记录中毒症状，30分钟后记录各组的死亡小鼠数。,精品课件,38,实验结果 全班结果汇总，计算硝酸士的宁的LD50、LD50的可信限和可信限率。 结果处理 实验资料按下表列出：,精品课件,39,计算方法计算LD50及95%可信限： LD50=lg1Xmi(P0.5) Xm=最大剂量的对数值 i=相邻两组比值的对数（lgr） P=各组死亡率 P =各组死亡率总和 LD50的95%平均可信限= LD504.5LD50SX50 其中SX50为LD50的标准误 其中
17、n=各组动物数 P2=各组死亡率平方的总和,精品课件,40,注意事项 药物称量、配制及给药的准确程度是本实验成功与否的关键。 1.实验过程中给药剂量一定要准确。 2.注意观察中毒症状及其发生时间、死亡时间。,讨论题 什么叫？测定的意义和根据 是什么？,精品课件,41,实验五 利尿药对家兔尿量的影响,一、利尿药1.定义：是作用于肾脏，增加电解质和水的排出，使尿量增多的药物。2.分类：根据利尿药的作用部位，可分为高效、中效和低效利尿药3.呋塞米为高效利尿药 利尿作用特点 作用机制 临床应用 不良反应,精品课件,42,二、利尿药的实验方法1.动物选择可用大白鼠、小白鼠、家兔、猫和狗，其中以大白鼠较为
18、常用。2.实验方法 代谢笼实验法：适用于大、小白鼠； 直接自输尿管或膀胱收集尿液：适用于较大动物（家兔、猫、狗）。,精品课件,43,三、具体实验目的1. 了解急性利尿的实验方法；2. 观察速尿对麻醉兔的利尿作用。材料1. 动物：家兔2. 器材：兔手术台、量筒、注射器、手术 器械3. 药品：25乌拉坦，1速尿,精品课件,44,方法1.麻醉：取家兔一只，称重，耳缘i.v. 25乌拉坦4ml/kg；注意：注射速度要缓慢，随时观察角膜反射，反射消失即停止注射。2.水负荷：麻醉后i.g.给自来水40ml/kg；注意：避免灌至气管，将灌胃管外端浸入水中，若有气泡立即拔出。3.手术：背位固定后剪去下腹部毛，
19、于耻骨联合上方切开皮肤约45cm，并沿腹白线剪开肌肉，暴露膀胱，在少血管区做荷包缝合后行膀胱插管；注意：膀胱插管需注满生理盐水,精品课件,45,4.记录正常尿量(ml2分钟)，连续记录10min；5.耳缘i.v.1速尿4mg/0.4ml/kg，记录给药后2、4、6、8、10、12、14、16、18、20min尿量毫升数(ml2分钟)。结果结果汇总，计算不同时间尿量的均值，以尿量毫升数(ml2分钟)为纵坐标，给药后不同时间为横坐标作直方图。,精品课件,46,精品课件,47,解热镇痛药对发热家兔体温的影响,目的观察解热镇痛药的解热作用。材料兔、复方氨基比林 溶液、10蛋白胨、电子秤、 体温表、注射器。,精品课件,48,方法 取正常成年兔1只，检查并记录正常体温（兔体温在38.539.5者为合适）。于小时前给乙兔皮下注射10蛋白胨10mlkg，体温可比正常时升高以上，则进行试验，兔腹腔注射复方氨基比林溶液mlkg，给药后分别于0.5小时、1小时、1.5小时测量体温，观察兔体温的变化。,精品课件,49,记录,讨论 实验结果说明了什么问题？临床上应用 解热镇痛药应注意些什么？,精品课件,50,精品课件,51,精品课件,52,精品课件,53,精品课件,54,精品课件,55,精品课件,56,精品课件,57,
