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1、胃癌标本的正确固定,许 斌,主要内容,标本及时固定对生物标志物检测的重要性胃癌手术标本固定的实践问题,主要内容,标本及时固定对生物标志物检测的重要性胃癌手术标本固定的实践问题,固定的意义,固定是组织制片的基础及关键步骤，固定是否及时、彻底，影响着整个制片过程。是标本处理过程的一个主要环节。,固定目的,1、保持组织形态学特征清晰和稳定2、阻止组织、细胞自溶与腐败3、凝固或沉淀组织细胞内物质4、保存组织细胞抗原性5、使组织保持一定的硬度和弹性,Khoury T, et al. Mod Pathol 2009;22:1457-1467.,延迟固定导致激素受体染色减弱,ER、PR的平均Q值随固定延迟时
2、间的增加而下降,Li XX, et al. Mod Pathol 2013; 26, 71-78.,延迟固定导致激素受体染色减弱,延迟2h以上时间固定，出现染色减弱的比例升高,+，无减弱；任一字母代表减弱，A：因细胞轮廓模糊，B：因非一致性信号；C：因核分辨不清,HER2荧光原位杂交检测结果与固定延迟时间的关系,Khoury T, et al. Mod Pathol 2009;22:1457-1467.,延迟固定导致HER2染色改变,延迟1h之后，FISH染色开始减弱；2h之后，统计学上有显著性差异(P0.05),Khoury T, et al. Appl Immunohistochem Mo
3、l Morphol 2012;20:531-542.,总体组织形态学改变情况,延迟固定导致组织形态学改变,延迟固定2h标本开始出现明显的组织形态学改变，延迟固定8h和过夜的标本发生组织形态学改变的几率最高,与延迟固定时间相关的膜标志物的表达(中位值),ON：过夜,延迟固定导致EGFR和E-cadherin表达改变,Khoury T, et al. Appl Immunohistochem Mol Morphol 2012;20:531-542.,EGFR和E-cadherin表达水平自延迟固定2h起开始下降,延迟固定导致Ki-67表达改变,Ki-67表达水平在延迟固定4h和8h出现下降,Kho
4、ury T, et al. Appl Immunohistochem Mol Morphol 2012;20:531-542.,手术切除标本的有丝分裂象较活检标本平均高出3倍多(206 vs 62有丝分裂/10个高倍视野, P=0.008)；而两者间MIB-1免疫染色的肿瘤细胞比例则相当,Lehr HA, et al. Modern Pathology 2012:1-7.,延迟固定导致肿瘤生物学特点改变,手术切除标本有丝分裂象增加源自固定延迟：活检标本自离体至固定的时间为1530 min，而手术切除标本则需数个小时,主要内容,标本及时固定对生物标志物检测的重要性胃癌手术标本固定的实践问题,手术
5、标本及时固定的时间,SEOM/SEAP胃癌HER2检测共识1手术标本应在切除后30min内固定中国胃癌HER2检测指南2规范的标本固定是HER2检测质量的保障，能使组织形态保存良好，防止细胞内蛋白和核酸的降解所有标本应在离体后2030min内进行标记、切开、固定等初步处理Werner M, et al3 标本应在手术切除后30min内尽快地固定，器官和实体瘤应予以切开以确保固定液快速渗透,1. Gmez-Martn C, et al. Clin Transl Oncol 2011; 13:636-651. 2. 胃癌HER2检测指南编写组. Chin J Pathol 2011; 40:553
6、-557. 3. Werner M, et al. Am J Surg Pathol 2000; 24(7): 1016-1019.,SEOM/SEAP：西班牙内科肿瘤学会和西班牙病理学家学会,据报道约20的进展期胃癌有HER2过表达或扩增。一项国际多中心随机对照期临床研究(TOGA试验)的结果显示，化疗联合针对HER2的曲妥珠单抗治疗可显著延长进展期胃癌患者的生存期，基于这一结果，2010年欧洲药品管理局及美国食品和药品管理局(FDA)先后批准化疗联合使用曲妥珠单抗治疗HER2阳性胃及胃和食管交界处癌(以下统称胃癌)患者。,胃癌HER2检测指南,准确的胃癌HER2表达和基因扩增检测结果是进展
7、期胃癌HER2靶向治疗患者筛选和疗效预测的前提,胃癌HER2检测指南,一、HER2检测方法包括免疫组织化学染色(IHC)和原位杂交(inhibridization)技术，后者包括荧光原位杂交(FlSH)和双色银染原位杂交(DSISH)。FSH和DSISH两种检测方法符合率高。各有特点，其中DSISH是一种亮视野下检测HER2基因扩增的方法，易于观察，被认为更具有实际应用价值。本指南推荐IHC与FSH和DSISH相结合的检测策略。,胃癌HER2检测指南,二、HER2检测适宜范围 有可能进行曲妥珠单抗治疗的进展期胃癌有必要行准确的HER2检测。,胃癌HER2检测指南,三、检测流程和结果判断1HER
8、2状态检测首先选用IHC法。2IHc 3+的病例判断为HER2阳性，无需进一步做原位杂交检测。3IHC 1+和O的病例，判断为HER2阴性，无需进一步做原位杂交检测。4IHC 2+的病例为不确定病例，需进一步行原位杂检测，如原位杂交阳性，判断为HER2阳性；如原位杂交阴性，判断为HER2阴性。,胃癌HER2检测指南,胃癌HER2检测指南对固定的要求,免疫组化检测固定较差示例：胃癌,固定不完全会导致假阳性检查结果细胞质染色可能由于使用了不适当的固定方式,图片由Targos Molecular Pathology.提供,30分钟内：应当完成什么？应当由谁完成？需要的哪些材料？,30分钟内：应当完成
9、什么？应当由谁完成？需要的哪些材料？,组织处理不良示例,未剪开固定,固定液比例不足,组织处理规范示例,剪开手术标本,供图：绍兴市人民医院病理科,组织处理规范示例,钉于标本板上,供图：绍兴市人民医院病理科,组织处理规范示例,供图：绍兴市人民医院病理科,组织处理规范示例,浸泡于足量的固定液中,供图：绍兴市人民医院病理科,组织处理规范示例,准确记录离体时间和固定(开始)时间,供图：绍兴市人民医院病理科,30分钟内：应当完成什么？应当由谁完成？需要的哪些材料？,应当根据医院的实际情况，由手术室和病理科协商决定,如标本能于离体后30min内送至病理科并完成处理，可以建议由病理科完成如标本不能于离体后30
10、min内送至病理科并完成处理，可以建议在手术室完成,30分钟内：应当完成什么？应当由谁完成？需要的哪些材料？,10%中性缓冲福尔马林溶液即 4%中性缓冲甲醛溶液中性（pH7.2 7.4）避免酸性环境对组织和抗原造成的破坏用自来水或纯水配置的甲醛溶液，常见pH5 7，可能使分子标志物检测的阳性率显著降低，导致误诊缓冲体系：避免外界物质（如胃酸等）造成固定液pH值显著变化 ，进而对组织和抗原造成的破坏,容器,其他如标本板，大头针，手术剪等,患者,技术员,肿瘤科医生/消化科医生,病理科医生,外科医生/内镜医生,组织切除，固定及送检前保存,标本处理及检测手段,检测结果分析及报告,申请标本检测及安排标本收集,HER2检测需多学科间共同合作,总结,手术标本应及时剪开固定应使用正确、足量的固定液应准确记录立体时间和固定时间外科和病理的合作至关重要,37,
