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1、课题1 微生物的实验室培养,1,.,微生物的类群,原生生物：,原核生物:,真菌:,病毒:,如酵母菌、霉菌,单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等,微生物一般个体微小，包含了除植物界和动物界以外的所有生物,无细胞结构,真核细胞,细菌、蓝藻等,原核细胞,2,.,一、微生物的培养基,培养基（培养液）是为人工培养微生物而制备的，提供适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。,3,.,1、培养基的类型,（1）按物理状态分： 固体培养基 液体培养基 半固体培养基,区别：加入琼脂的量决定培养基的物理状态。琼脂：多糖，实验室最常用的凝固剂。 熔点：98度； 凝固点：44度注意：一般细菌不能利用琼脂。,4,.
2、,固体培养基用途：用于微生物纯化、计数、鉴定,5,.,6,.,菌落,细菌的菌落特征因种而异。菌落特征是微生物鉴定的重要依据。菌苔：菌落连成片,7,.,液体培养基：工业生产,表面生长,均匀混浊生长,沉淀生长,8,.,半固体培养基：观察运动,无动力 有动力(弥散),9,.,（2）按成分分： 天然培养基 合成培养基 半合成培养基,10,.,（3）按功能分： 基础培养基 选择培养基 鉴别培养基,基础培养基：含有微生物生长所需的基本物质。,11,.,选择培养基和鉴别培养基的比较,从众多微生物中分离所需的微生物,鉴别不同种类的微生物,加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌,伊红美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌，其菌落呈
3、现金属光泽深紫色。,培养基加入某种物质或缺少某种营养物质，而抑制不需要的微生物生长，促进需要的微生物生长。,12,.,几种选择培养基：,加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物,13,.,二、培养基的营养物质,主要营养物质：水、碳源、氮源、无机物特殊物质：生长因子（微生物生长不可缺少的微量有机物。如维生素、含氮碱基）,14,.,碳源,可作为碳源的物质有:含碳无机物: 含碳有机物：,蛋白质,脂肪酸,不同微生物所利用的碳源不同异养型微生物的碳源为自养型微生物的碳源为,碳酸
4、盐,碳酸氢盐,二氧化碳,糖类（主要）,含碳有机物（有机碳）,含碳无机物（无机碳）,15,.,氮源,可作为氮源的物质有:含氮无机物： b. 含氮有机物：,蛋白胨,牛肉膏,尿素,氮气,氨气,硝酸盐,铵盐,注意：蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、麦芽汁等天然营养物质中既含有碳源又同时含有氮源、生长因子等营养要素!,16,.,1、下列细菌中，能利用含碳无机物作碳源的是 A 光合细菌 B 根瘤菌 C 硝化细菌 D 乳酸菌2、培养大肠杆菌的培养基中，必需含有的碳源和氮源分别是 A 糖、有机酸等 B 二氧化碳、碳酸盐 C 蛋白质 D 无机氮化物,A.C,A.C,17,.,下表关于四种生物的能源、碳源、氮源、新陈代谢的
5、类型，描述正确的是,18,.,三、培养基配制的原则,1：目的要明确 配制培养基要根据 培养的微生物、培养的目的、培养基的用途 来确定培养基的化学成分、物理状态。2：营养要协调3：PH要适宜,19,.,四、培养基的配制过程,1.计算: 100ml蒸馏水中各物质的量。,2.称量：注意牛肉膏的粘稠度大。,3.溶化：牛肉膏连同称量纸一同放入 不断搅拌4.调节PH:7.07.2思考：判断该培养基的作用是什么？,以牛肉膏蛋白胨固体培养基为例,20,.,加热、溶化,21,.,22,.,5.分装：（试管）培养基高度1/5； 不要污染试管口； 棉塞塞紧,23,.,6、包扎 3-5支试管扎成一捆，外包一层牛皮纸，
6、用线扎好。,24,.,7、灭菌 培养基：高压蒸汽灭菌 培养皿：干热灭菌,25,.,8 .搁置斜面/倒平板（斜面的长度不超过试管的1/2),26,.,图中哪些措施是防止杂菌污染的？,27,.,培养基灭菌后，需要冷却到50度左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 刚刚不烫手。 为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 防止瓶口附近的微生物污染培养基,28,.,平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 使培养基表面的水更好的挥发，防止皿盖上水珠落入培养基 在倒平板的过程中，不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 空气中的微生物会在皿盖与皿底之间的培养基上滋
7、生，最好不要用该培养基培养微生物。,29,.,六、无菌操作,1、获得纯净培养物的关键：2、无菌操作 避免杂菌感染操作对象的操作过程3、哪些地方有菌可能导致菌体感染？ 操作者、操作空间 培养基、接种工具、器皿,防止外来杂菌的入侵,30,.,4、灭菌和消毒 消毒：温和的因素杀死一部分对人体有害的微生物。 举例：煮沸，70%酒精溶液,不包括芽孢和孢子,灭菌：强烈的因素杀死所有微生物，包括芽孢和孢子。思考：哪些因素可以灭菌、消毒？ 物理高温、紫外线 化学酒精、氯气、石碳酸,31,.,灼烧灭菌,微生物的接种工具 (接种环、接种针、试管口)或其他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧,32,.,干热灭菌 16
8、0170 ；12h,能耐高温的需要保持干燥的物品( 玻璃器皿),高压蒸汽灭菌 100kPa 121 15-30min,通常用于培养基的灭菌,33,.,思考：以下应当用何种方法灭菌、消毒？ 操作者的双手 培养基 接种工具 器皿 空间 牛奶,酒精消毒,高压蒸汽灭菌,灼烧灭菌,干热灭菌,紫外线,巴氏消毒,34,.,总结：无菌技术 1、实验操作空间、操作者、衣着和手要 和 。2、将用于微生物培养的器皿、接种工具和培养基等进行 。3、为了避免周围环境中微生物污染，实验操作应在 附近进行。4、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。,清洁,灭菌,酒精灯,消毒,35,.,无菌条件下将微生物接
9、入培养基的操作过程称为接种。,1、接种 工具,七、接种技术,36,.,2 、常用的接种方法,37,.,做什么准备？ 点燃酒精灯；斜面向上,斜面划线接种的操作过程,斜面用什么接种？接种环如何灭菌？,38,.,取棉塞（不放到桌面？）试管口灭菌,挑取少量菌体,39,.,从里到外轻轻划“S”型曲线，注意不要划破培养基。试管口通过火焰，塞紧试管口。放在37恒温箱中培养24h。,40,.,微生物的纯培养,41,.,平板划线分离微生物的原理：连续划线。 由于划线后，线条末端的细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落
10、。,分离提纯微生物常用的方法： 平板划线法、稀释涂布平板法,42,.,平板划线的几种方法,43,.,44,.,45,.,A.从试管中取菌,平板划线的操作过程 P18,46,.,47,.,48,.,每次划线后要灼烧接种环，目的是什么？每次划线的起点有什么特点？,49,.,注意事项： 第一步以及每一次划线之前和划线结束后都要灼烧接种环。灼烧接种环要冷却后再划线。 每次划线之间灼烧接种环的目的是杀死上一次划线残留的菌种，使下一次划线的菌种直接来至于上一次划线的末端，从而使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少。,50,.,51,.,52,.,问题：上述结果反应了什么情况？问题：可对菌液如何处理？,53,.,稀释涂布平板法分离微生物的原理： 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂平板表面，经过培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将分散成单个细胞，在培养皿表面形成单个菌落。,54,.,55,.,56,.,57,.,58,.,59,.,60,.,61,.,62,.,63,.,64,.,65,.,
