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1、输血前免疫血清学检查,在检验医学中，没有几项检验像输血前检验一样，临床医生几乎完全依赖其结果的正确性。 输血前检验的每一个环节均可能发生差错，标本搞错最为常见。,急性溶血反应：多由ABO血型不相容输血引起，人为差错是其主要原因。 迟发性溶血反应：多由ABO以外血型不相容输血所致，输血前检验不规范是其主要原因。,患者输入不相容的血液成分可导致严重不良后果：,三项检查： 血型的鉴定 抗体筛选和鉴定 交叉配血试验,三者互为补充，缺一不可,输血前免疫学检查,目的： 使输入的血液成分有效存活 不会引起受血者的红细胞发生破坏,血型鉴定,常规ABO血型鉴定应包括正、反定型，二者起到互相验证和质控的作用。 反
2、定型要用试管法，不用玻片法,我国已规定常规血型鉴定还应包括Rh（D）定型。,ABO正定型采用单克隆抗-A、抗-B血型试剂，抗-B试剂不应该与获得性B抗原反应。,采用A1和B试剂细胞进行反定型检测；新生儿和以前做过反定型可省略。,只有正反定型结果相符才能正确判定ABO血型；单纯正定型O型不可靠，单纯反定型AB型也不可靠。,日常工作中需要定期做阳性/阴性对照，在可能的情况下，最好每天在使用定型试剂前作阳性/阴性对照，以检测其活性。,在观察定型结果时，既要观察有无凝集，也要观察凝集强度，这有助于A、B亚型、类B等的发现。,在正定型试剂中增加抗-AB、抗-A1及抗-H 抗-AB用来确认弱A和弱B抗原；
3、抗-A1用来鉴定A亚型；抗-H用于鉴定亚型及孟买型。,在反定型试剂中增加A2、O及自身红细胞 A2细胞用于鉴定A2亚型；O细胞用于鉴定是否存在冷凝集素或ABO系统以外的同种抗体影响定型；自身对照用于是否存在自身抗体影响定型。,正反定型不一致，需进一步鉴定,一、人为因素 试剂不标准、失效或污染 操作中加错样本或试剂 离心速度不足或过度 细胞与血清比例不当，结果判断错误等 人工判读结果有可能发生书写错误,ABO定型不一致的原因,二、客观因素 因某种疾病（如白血病）导致抗原减弱 红细胞发生多凝集现象或产生类B物质 抗体效价低（如婴幼儿、老年人、低免疫球蛋白血症） 血清中有意外抗体，某些药物干扰等 可
4、溶性血型物质过多 血浆蛋白异常导致红细胞缗钱状凝集或假凝集 嵌合体血型或近期输入异型血造成混合外观凝集,正反定型不一致应重新检测（应使用洗涤红细胞）,出现异常结果的处理办法,如果重新检测结果仍然异常，请资深工作人员协助,当检测结果与以往记录不一致时，应重新采集血标本再一次检测,如果一时无法找到正反定型结果不一致的原因，患者又需紧急输血，此时可输注Rh（D）同型的O型红细胞,目的：检出有临床意义的抗体，并可在配血前有足 够的时间来选择缺乏相应抗原的相配合的血液，避免盲目配血。,不规则抗体的筛选和鉴定,方法：用受检者血清与试剂红细胞起反应，以发现在37有临床意义的抗体。,“有临床意义”的抗体： 如
5、果某种特异性抗体曾引起新生儿溶血病、明显的溶血性输血反应或使输入的红细胞存活时间太短，即认为该种抗体有临床意义,抗体筛选的原则,抗体筛选试验应尽可能使用包含所有主要血型抗原的筛选红细胞试验应包括完全抗体和不完全抗体的检测抗体筛选阳性标本继续用相同的试验方法做抗体鉴定确定抗体特异性后，应该确定患者的相应抗原为阴性,筛选红细胞的要求,由23人份的O型红细胞组成具有尽可能多的抗原，包括：D C E c e M N P1 S s Lea Leb K k Fya Fyb Jka Jkb 尽可能是纯合子用于献血者的血清筛选时，可将两个筛选红细胞混合使用，用于患者血清筛检时必须与两个筛选红细胞分别进行试验。
6、,试剂筛选红细胞： 特定的O型红细胞，通常为2-3人份的O型红细胞成为一套。每套试剂筛选红细胞中必须有下列抗原：序 Rh-hr Kidd MNSs Duffy Diego Kell Lewis P号 D C E c e JKa JKb M N S s Mur Fya Fyb Dia Dib K k Lea Leb P11 + + 0 0 + 0 + + + 0 + 0 + + 0 + 0 + 0 + 02 + 0 + + 0 + + 0 + 0 + / + 0 0 + 0 + 0 + 03 + + + + + + 0 + + 0 + 0 + 0 0 + 0 + + + +,抗体鉴定,用于抗体鉴
7、定的谱细胞由816已知血型的O型红细胞配套组成每个红细胞具有各自不同的抗原成分每套红细胞均附有相应的红细胞抗原谱根据谱细胞的反应格局可以鉴定常见的抗体自身细胞检查：确定患者血清内是否有自身抗体或自身抗体与同种抗体并存,抗体筛选试验的方法很多，国外以间接抗球蛋白法为金标准，国内中小医院多采用凝聚胺法，大医院多采用微柱凝胶技术。,微柱凝胶法是简单、有效检测不规则抗体的方法，但无法排除无临床意义抗体的干扰。,抗体筛选用的红细胞一定要保存在4环境中，以防红细胞上抗原丢失。,国外对所有受血者常规作抗体筛选试验，并认为抗体筛选是检测不规则抗体最可靠、最敏感的方法。,我国规定凡遇下列情况之一必须做抗体筛选试
8、验： 交叉配血不合时 有输血史、妊娠史或短期内需要接受多次输血者,如抗体筛选试验阳性，缺乏谱细胞鉴定其特异性时，可送有条件的单位鉴定。,输血前必须严格交叉配血，这是防止输血前检验程序中发生差错的最后一道“安全岗”。 所谓“严格”是指，所采用的方法必须能检出ABO不相容及ABO系统之外的有临床意义的抗体（IgG抗体）。,交叉配血试验,主侧交叉：由患者血清和供者红细胞组成,交叉配血的内容,次侧交叉：由患者红细胞和供者血清（浆）组成（由于我国尚未对供者进行抗体筛选，故次侧交叉是有必要的，尤其是输全血时）,自身对照：由患者自身血清和自身红细胞组成（自身对照有助于分析解释交叉配血试验中出现的阳性结果）,
9、主侧配血 用患者血清与供者红细胞进行试验次测配血 供血者血清与患者红细胞进行试验,交叉配血的要求,主侧配血要求：绝对不可以有凝集或溶血现象次测配血要求：供血者血清加受血者红细胞在允许范围内，可以有凝集现象，但不可以有溶血,盐水法 酶法：菠萝酶，无花果酶，木瓜酶 抗球蛋白法 经典方法，加LISS（低离子介质溶液）的方法 凝聚胺法 微柱凝胶试验（卡式配血） 各有优缺点,交叉配血的方法, 盐水法简便、快捷、价廉，但有局限性： 只能检出ABO、P、Lewis、MN等系统的抗体，此类抗体属天然抗体，属IgM； 不能检出Rh、Kell、Kidd、Duffy等系统的抗体，此类抗体由免疫产生，属IgG。, 酶
10、法对Rh系统较为敏感，但会改变某些血型系统的抗原构型，加之不易保存，应用受限。, 抗球蛋白法是检测IgG抗体最可靠方法，但操作繁琐, 微柱凝胶试验（卡式配血）灵敏度高、特异性强、结果直观，能自动化操作，还能保存。缺点是价格昂贵、耗时长、可出现假阳性，有条件的医院可采用。, 凝聚胺法对Kell系统之外的大多数血型系统敏感度高，且操作简便，快速。,盐水介质配血方法,离心看结果,酶介质配血方法,主次侧均加酶,离心看结果,37 ,37水浴30分钟,酶介质配血方法,抗球蛋白配血方法,患者,献血者,主侧,次侧,37水浴30分钟,三洗,加抗球蛋白,离心看结果,阳性,阴性,抗球蛋白配血方法,聚凝胺(Polyb
11、rene)配血法,室温放置1 分钟,主次侧均加聚凝胺,离心,聚凝胺引起红细胞非特异性凝集,主次侧均加重悬液看结果,聚凝胺(Polybrene)配血法,凝胶卡式检测法,是微柱凝胶技术与上述所有技术相结合的产物1986年由法国人Dr.Yves Lappierre发明1994年获得美国FDA认证，目前在许多发达国家已经作为常规技术应用于临床,戴安娜凝胶卡式检测法的工作原理,凝胶微柱：试管上端、柱体过滤介质：颗粒直径26-103 nm的葡聚糖100凝胶，凝胶间缝隙只允许游离红细胞通过缓 冲 液：LISS（加或不加抗血清）,将红细胞和抗血清加在凝胶上部反应，离心后观察凝集的红细胞，被阻挡在小柱中凝胶的上
12、部或中央，证明发生凝集反应，判断凝集反应阳性游离的红细胞，被挤过装有过滤介质的小柱，而到达小柱的底部，证明未发生凝集，判断凝集反应阴性,结果判读模式,凝胶法鉴定ABO血型,凝胶抗人球试验凝胶凝集试验与抗人球技术结合,凝胶酶试验凝胶技术与酶技术结合,凝胶卡式检测法的方法评价,灵敏度高：凝胶卡式检测法灵敏度比低离子盐水法、凝聚胺法都高；与Coombs法相近，但是在实验的标准化、重复性方面具有更大优势，更适合常规的红细胞血型血清学检测避免了试管法中必须清洗红细胞的烦琐步骤方法容易掌握，易于标准化塑料卡可以长期保存，也容易销毁,欧美国家常用抗球蛋白法或微柱凝胶法，因为白种人中约有9%是Kell（K）阳
13、性，而凝聚胺对Kell系统不敏感。,我国中小医院适合用凝聚胺法，因为凝聚胺对Rh系统特别敏感，在我国以Rh系统引起的迟发性溶血性输血反应最为常见，而汉族人几乎100%为K抗原阴性，通常不考虑抗-K。,患者或供者ABO血型定型不正确； 患者血清中存在同种抗体，与供者红细胞上相应抗原起反应； 患者血清中存在自身抗体，与供者红细胞上相应抗原起反应； 患者血清中白蛋白与球蛋白比例不正常引起的缗钱状假凝集； 血浆扩容剂的影响或试剂被污染等。,主侧交叉配血不相合的原因,患者或供者ABO血型错误（重新定型，检查患者亚型、输血史及移植史）,主侧（+）、自身（-）、抗体筛选（-），可能原因：,患者血清中有抗体，
14、但筛选细胞上无相应抗原（对患者进行抗体鉴定）,供者红细胞已被致敏（对供者做直抗试验）,患者血清中的同种抗体与供者红细胞上相应抗原起反应（对患者进行抗体鉴定，选择无对应抗原的血液输注）,主侧（+）、自身（-）、抗体筛选（+），可能原因：,患者血清中可能同时存在自身抗体和同种抗体（对患者血清自身吸收及抗体鉴定，用吸收后血清配血）,白蛋白/球蛋白比值不正常（盐水添加试验解决缗钱状假凝集）,血浆扩容剂（如右旋糖酐）的影响（洗涤细胞，或等待扩容剂消失后重新抽取标本）,污染（使用洁净的器具和符合要求的试剂）,主侧（+）、自身（+）、抗体筛选（+），可能原因：,交叉配血实验中，离心力、离心时间不当，可造成假
15、阴性或假阳性结果。,交叉配血注意问题,恒温水浴箱温度不正确也会造成错误结果。,出现溶血应判为阳性结果（标本本身溶血例外）。,受血者交叉配血试验的血标本必须是输血前3天之内的,含有冷凝集素的患者交叉配血时可采用37生理盐水洗涤3次，如还显弱凝集，再用42或45盐水洗1次再配血。,温抗体型的自身免疫性溶血性患者血清中的游离抗体有时很难吸收完全，导致配血困难。在排除同种抗体的情况下可选择凝集反应弱的同型血液输注，亦可输注O型洗涤红细胞。,某些紧急情况下需要快速配血，建议血清（血浆）与细胞比例为2:1，细胞悬液浓度为2%3%。同时离心前孵育25min，有利于检测弱的ABO抗体。,婴儿输注O型血或ABO同型血时，应当采用母亲的血清（血浆）进行交叉配血。,原则上，一定要选择ABO和Rh（D）同型的血液。如果同型血不够用，可以输注O型相合的添加剂红细胞（红细胞悬液），这种红细胞所含血浆量很少。,AB型血液不能满足供应，可选择A型或B型红细胞，尽量不用O型血。,Rh（D）阴性血不够用，可以选择Rh（D）阳性血，但一定要确证患者体内没有相应抗体。另有生育能力的妇女不能用。,在大量输血时如果输的是同型相合的添加剂红细胞，供者之间可以不做交叉配血试验。,若是输了ABO不同型的相合红细胞，以后要尽快输注与患者同型的红细胞。,
