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1、骨髓细胞形态学检验,南昌大学一附院检验科 吕小林,骨髓细胞学检测方法,骨髓细胞形态学检查组织化学检查病理学检查细胞遗传学检查免疫学检查造血细胞培养,骨髓细胞学检测,骨髓细胞学检测的临床应用骨髓细胞学检测的方法和内容血细胞发育过程中形态演变的一般规律血细胞的正常形态学特征血细胞的细胞化学染色细胞免疫分型细胞遗传性分析,一 骨髓细胞学检测的临床应用,是诊断造血系统疾病最常用的基本方法骨髓细胞学检测的临床应用骨髓细胞学检查的适应证与禁忌证,骨髓细胞学检测的临床应用,诊断造血系统疾病 AML、ALL、CML、CLL、MM、AA、Gaucher disease等。辅助诊断某些疾病 MDS、MPD、IDA
2、、PLT等。提高某些疾病的诊断率 mp、黑热病原虫、红斑狼疮细胞等。,骨髓细胞学检查的适应证与禁忌证,适应证外周血细胞成分及形态异常不明显原因发热、肝脾淋巴结肿大骨痛、骨质破坏、肾功能异常、黄疸等化疗后疗效观察其它：微生物、寄生虫等禁忌证血友病、晚期妊娠等,二 骨髓细胞学检测的方法和内容,肉眼观察低倍镜下检查油镜下检查骨髓象的分析与报告,肉眼观察（检查方法）,血膜颜色厚薄骨髓小粒,低倍镜下检查（检查方法）,评价骨髓的取材、涂片、染色是否良好估计骨髓有核细胞增生程度计数巨核细胞数目特殊细胞与其它,骨髓涂片,骨髓有核细胞增生程度,骨髓有核细胞增生程度,巨核细胞计数,特殊细胞与其它,油镜检查,数目：
3、200-500有核细胞分类：各系、各阶段细胞分析：数量、形态、增生程度等,骨髓象分析与报告,描述 取材、染色 增生程度 粒系特点 红系特点 淋系特点 巨系特点诊断结论,三 血细胞发育过程中形态演变的一般规律,细胞体积细胞质：量、染色、颗粒细胞核：大小、染色质、核仁、核膜核浆比,四 血细胞的正常形态学特征,血细胞的形态学特征（红系）,（1）原红（normoblast）：1522um（2）早幼红（basophilic normoblast）： 11-20um（3）中幼红（polychromatic normoblast）：8-18um（4）晚幼红（ortho-chromatic nurmblast
4、）：7-12um（5）网织红（RC）： 7.4um（6）成熟RBC（RBC）：7.4um,红系形态特点,血细胞的形态学特征（粒系一）,（1）原粒细胞（myeloblast）：11-18um（2）早幼粒（promyelocyte）：12-22um（3）中幼粒（myelocyte）中性中幼粒（neutrophilic myelocyte）：10-18um嗜酸性中幼粒（eosinophilic myelocyte）：15-20um嗜硷性中幼粒（basophilic myelocyte）：10-15um,血细胞的形态学特征（粒系二）,4）晚幼粒细胞（metamyelocyte）：10-16um中性 嗜
5、酸 嗜硷（5）杆状核粒细胞（stab granulocyte、 bandgranulocyte）中性 嗜酸 嗜硷（6）分叶核粒细胞（segmented granulocyte）中性 嗜酸 嗜硷,粒系形态特点一,粒系形态特点二,粒系形态特点三,血细胞的形态学特征（淋系）,（1）原淋巴细胞（Lymphoblast）：10-18um（2）幼淋巴细胞（prolymphocyte）：10-16um（3）淋巴细胞（lymphocyte）大淋巴细胞 小淋巴细胞,淋系形态特点,血细胞的形态学特征（浆细胞）,（1）原浆细胞（plasmablast）：15-20um（2）幼浆细胞（proplasmacyte）：1
6、2-16um（3）浆细胞（plasmacyte）：8-20um,浆细胞形态特点,血细胞的形态学特征（单核细胞）,（1）原单核细胞（monoblast）：15-25um（2）幼单核细胞（promonocyte）：15-25um，核可见凹陷，切迹，扭曲或折叠（3）单核细胞（macrophage）：12-20um：核呈肾形，马蹄形，笔架形及“S”形。（4）吞噬细胞（macrophage）：单核细胞组织细胞巨噬细胞或吞噬细胞,单核细胞形态特点,血细胞的形态学特征（巨核细胞）,（1）原巨核细胞（megakaryoblast）：15-30um（2）幼巨核细胞（promegakaryocyte）：30-50
7、um（3）颗粒型巨核细胞（granular megakaryocyte）：50-70um（4）产板巨（thronbocytogenous megakaryocyte）。（5）巨核细胞裸核（naked nucleus）,巨核细胞形态特点,血细胞的形态学特征（其它细胞）,（1）网状细胞 （3）纤维细胞（2）内皮细胞 （4）组织嗜硷（5）成骨细胞 （6）破骨细胞,骨髓中其它细胞,五 血细胞的细胞化学染色,POX染色NAP染色ACP染色AS-D NCE染色-NAE染色PAS染色Fe染色,细胞化学染色一 POX,1、原理：细胞中的POX（peroxidase）H2O2O2氧化联苯胺呈蓝色+亚硝基铁氰化钠
8、结合形成蓝黑色颗粒。2、结果：（1）阴性：无颗粒（2）弱阳性：细小颗粒分散（3）强阳性：颗粒粗大而密集3、意义：（1）急粒：强阳性（2）急单；弱阳性（3）急淋：阴性,POX结果判读,细胞化学染色二 NAP,1、原理：NAP（neutrophil alkaline phosphatase）的显示方法有偶氮偶联法：NAP（PH9.4-9.6）-磷酸茶酚钠-茶酚+重氮盐形成灰黑色沉淀（定位于酶活性处）。,NAP结果判读,细胞化学染色二 NAP,2、结果：（1）5级分类0级阴性1级+2级+3分+4分4（+）（2）阳性率报告：计数100NC中阳性细胞分率。（3）积分报告：100NC细胞的累积分数,细胞化
9、学染色二 NAP,3、参考区间：NAP：阳性率：10-40%积分：40-80分4、临床意义：（1）感染性疾病的诊断：鉴别细菌或病毒感染（2）CML和类白血病鉴别（3）AA与PNH鉴别,细胞化学染色三 ACP,1、原理：ACP（acid phosphatase）：ACP（PH5.0）甘油磷酸钠磷酸钠+硝酸铅磷酸铅沉淀+硫化铵反应棕黑色硫化铅沉淀。2、结果：胞质内出现棕黑色颗粒为阳性反应。,细胞化学染色三 ACP,细胞化学染色三 ACP,3、意义：（1）多毛细胞白血病（hairy cell leukemia，HCE）诊断：HCL为阳性不被L-酒酶抑制（2）T-B淋巴细胞鉴别：T阳性，B阴性（3）协
10、助鉴别Gaucher病与Niemann-Pick病：Caucher阳性，Niemann-Pick阴性（4）单核细胞、组织细胞、网状细胞、巨核细胞ACP阴性。,细胞化学染色四 CE,1、原理： AS-D（SE）氯化醋酸AS-D萘酚AS-D+重氮盐GBC偶联红色沉淀定位于胞浆中2、结果：粒系阳性或强阳性反应 单核阴性或弱阴性反应 淋巴、嗜酸细胞、浆细胞阴性反应3、意义： （1）急粒阳性或强阳性 （2）急单、急淋阴性反应,细胞化学染色四 CE,细胞化学染色五 NAE,1、原理：-NAE-醋酸萘酚-萘酚+重氮盐染料偶联黑色沉淀定位于胞浆中。2、结果： 1、单核细胞阳性（灰黑色沉淀） 2、粒细胞弱阳性
11、3、淋巴细胞阴性3、意义： 1、急单强阳性反应 2、急粒弱阳性反应,细胞化学染色五 NAE,细胞化学染色六 PAS,1、原理：过典酸（糖原）醛基+无色品红紫红色化合物2、结果：（1）阳性：颗粒状、小块状或弥漫均匀（红色强阳性、弱阳性和阴性）（2）原粒阴性，早幼粒以下阶段阳性反应程度渐增强（3）单核弱阳性，淋巴细胞阴性（4）红系：阴性（5）巨核：阳性,细胞化学染色六 PAS,3、意义： 1、红血病与巨幼贫鉴别：前者幼红细胞阳性，后者幼红细胞阴性 2、白血病：急粒：阴性或弱阳性 急淋：原幼淋阳性呈粗颗粒状或块状 急单：呈弥漫均匀或细颗粒状 3、其它： Gaucher细胞阴性 Niemann-Pic
12、k阴性,细胞化学染色六 PAS,细胞化学染色七 Fe,1、原理：Fe3+亚铁氰化钾铁氰化铁沉淀（普鲁土蓝）2、结果：（1）细胞外铁：1+ 4+（2）细胞内铁：含有铁颗粒的幼红细胞铁粒幼红细胞油镜下计数100个幼红细胞计算其阳性率I、II、和环状铁粒幼细胞,细胞化学染色七 Fe,3、参考值：（1）细胞外铁：1+ 2+，大多为2+（2）细胞内铁：2090%4、意义：（1）缺铁性贫血诊断（2）非缺铁性贫血：如AA、铁粒幼细胞性贫血、溶贫、巨幼贫、内外铁增加 （3）MDS-RARS：环状铁粒幼细胞15%,细胞化学染色七 Fe,细胞化学染色七 Fe,六 细胞免疫分型,免疫荧光法免疫酶染色法,细胞免疫分型
13、,1、免疫荧光法（immme of luoresence technique）（1）原理：荧光标记的单抗+细胞表面分化抗原结合产生荧光用荧光显微镜和流式细胞仪检测直接荧光法、间接荧光法（2）参考值：有荧光阳性细胞 无荧光阴性细胞,细胞免疫分型,2、免疫酶染色法：（1）APAAP法（碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法）：一抗+CD抗原+AKP标记二抗底物显色（2）PAP法（过氧化物酶抗过氧化物酶法）一抗+CD抗原+POX标记抗体底物显色（3）ABC法（亲和素生物素酶复合物）法：一抗+CD抗原+生物素标记二抗HRP标记亲和素+底物,细胞免疫分型,细胞免疫分型临床应用,1、有助于识别不同系列的细胞：2、识别不
14、同的淋巴细胞：3、用于T淋巴细胞亚群检测：4、用于识别不同分化阶段的细胞：5、有助于识别不同功能状态的细胞：6、用于不同系列和不同分化阶段的细胞进行分离：7、白血病的免疫分型：8、可用于白血病微小残留病检测：,急性白血病细胞免疫表型特点,细胞免疫分型临床应用,细胞免疫分型临床应用,七 细胞遗传性分析,1、染色体检查方法2、染色体分析（1）染色体命名：46条，22对常染色体，1对性染色体男46XY，女：46XXA-G7组,七 细胞遗传性分析,2）核型分析及其书写：（1）书写顺序：染色体数目、性染色体、染色体异常（2）染色体变异以小写表示：t易位 iso或i等臂染色 inv倒位 ins插入del缺失 r环状染色“”-丢失 “+”-增加,七 细胞遗传性分析,（3）第一括号内表示染色体数目，第二括号内表示染色体区带（4）P表示短臂，q表示长臂3、染色体畸变（1）二倍体（2n）（2）数目畸变：整倍体和非整倍体（3）亚二倍体：比2n少（4）超二倍体：比2n多,七 细胞遗传性分析,七 细胞遗传性分析,THANKS！,
