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1、G试验与GM试验,微生物室范会,侵袭性真菌病(invasive fungal disease, IFD),概念：又称侵袭性真菌感染，是指真菌侵入人体组织、血液，并在其中生长繁殖导致组织损害、器官功能障碍和炎症反应的病理改变及病理生理过程。,侵袭性真菌感染因素增加,真菌感染的诊断,诊断标准由危险因素、临床特征、微生物学检查和组织病理学检查4部分组成。根据真菌感染的可能性将诊断结果分为三个级别: 确诊、拟诊和疑似。,真菌感染的诊断,临床特征-特异性？影像学-特异性？真菌涂片、培养-特异性？敏感性？时间病理-特异性！敏感性？早期、快速、特异、敏感、采样方便G试验与GM试验,G试验,G试验,（1-3）
2、-D葡聚糖占真菌细胞壁成分50%以上与鲎试剂中的G因子发生级联凝固反应,G试验检测范围,检测底物：（1-3）-D葡聚糖诊断：侵袭性真菌感染（IFD）检测频率：每周一至周五真菌细胞壁成分：念珠菌、曲霉、镰刀霉、毛孢子菌、卡氏肺孢子菌、支顶孢、组织胞浆菌等不能检测：结合菌（毛霉、根霉）、隐球菌,G试验原理-反应特异性,G试验-国产检测方法,国产：MB-80（金山川）. 动态浊度法. cut-off：阴性10ug/ml，中介10-20ug/ml，阳性20ug/ml，儿童阳性50ug/ml国产：湛江安度斯生物有限公司. 动态比色法. cut-off：阴性100.5pg/ml，中介100.5-151.5
3、pg/ml，阳性151.5pg/ml标本：血浆,G试验-试剂盒,鲎试剂来源：东方鲎、美洲鲎检测方法：动态比浊法、动态比色法试剂反应性不同，检测结果不同，cut-off值不同,30名AML、MDS念珠菌血症患者连续2次G试验阳性，可提高特异性、PPV（阳性预测值）确诊或拟诊IFD，平均比临床症状出现早10d,G试验-影响因素,假阳性：. 抗肿瘤准备：蘑菇多糖、裂褶菌多糖. 免疫准备：白蛋白、球蛋白. 血透使用纤维素膜. 手术中使用棉纱垫、棉拭子等. 脂肪乳等假阴性：. 棘白菌素类：抑制BDG合成,G试验-小结,无热源采血管、清洁的检测环境高NPV，连续2次G试验阳性，可提高特异性和PPVIFD早
4、期诊断. 比出现临床症状体征早约10天. 比HRCT改变早约9天敏感性与感染程度（真菌负荷量）相关念珠菌定植不引起G试验升高动态反应感染程度和抗真菌治疗疗效儿童BDG水平高于成人,GM试验,GM试验,诊断：侵袭性曲霉菌感染（IA）检测底物：半乳甘露聚糖. 曲霉细胞壁成分. 菌丝在组织中生长时释放. 热稳定. 可溶性：serum、BALF、CSF检测频率：一周两次,GM试验-方法及原理,伯乐试剂. 原理：双抗体夹心法，采用小鼠单克隆抗体EBA-2，检测人血清中的曲霉菌半乳甘露聚糖。天津贻诺琦.,GM试验-临床价值,曲霉菌定植时很少释放入血，因此有利于鉴别侵袭与定植GM释放量与菌量成正比，可反映感
5、染程度连续检测GM试验可作为治疗疗效的监测在造血干细胞移植患者中的诊断敏感性高非特异交叉反应：青霉较多、隐球菌,GM试验-27项研究荟萃分析,推荐用于恶性血液肿瘤和HSCT(造血干细胞移植)受体不推荐用于SOT（实体器官移植）受体,GM试验-假阳性,抗菌药物：哌拉西林-他唑巴坦. 采样：用药前，或药物浓度最低时高剂量使用激素透析：不能清除大份子GM化疗的严重黏膜炎的患者. 谷类食物中的GM抗原通过肠道入血儿童和新生儿：假阳性占83%. 母乳或配方食品中双歧杆菌与GM有交叉反应交叉反应真菌：青霉、拟青霉、隐球菌、头状地霉、组织胞浆菌等,GM试验-假阴性,抗真菌药物. 三唑类-降低GM水平. 米卡
6、芬净-升高GM水平（能够破坏真菌细胞壁，但不能清除）低侵袭性曲霉菌病低曲霉负荷量,GM试验-小结,早期、快速、高特异性GM水平反映曲霉负荷量推荐用于恶性血液肿瘤、HSCT患者IPA可考虑BALF标本，并适当提高折点曲霉脑病可考虑CSF标本动态变化指导抗真菌药物使用结合患者临床情况进行分析,G+GM-缩小病原谱,病例一,男性，55岁，因“反复喘息发作31年，复发伴发热1月”入院既往史：支气管哮喘，过敏性鼻炎，糖尿病查体：37.6，双肺散在哮鸣音，未及湿罗音实验室检查：-血常规：WBC 10.6109/L,N 51.5%,E 15.2%-ESR 78mm/h,CRP 94.9mg/L-PPD皮试（
7、-）-血ANA（-）-血清GM测定：阳性（3.1930.5）-痰真菌涂片及培养（-），细菌培养（-），抗酸（-）-肺功能：重度阻塞性通气功能障碍，低氧血症，支气管扩张试验（-）,诊断：过敏性支气管肺曲霉病（ABPA）治疗及转归：抗炎、解痉、化痰、平喘，伊曲康唑+甲强龙静脉滴注；治疗后第三天出黑黄色痰栓，此后痰量渐少，气急好转，疗程两周后改伊曲康唑口服，激素递减。病情稳定后出院治疗后化验-血常规：WBC 6.0109/L,N 86.5%,E 0%-ESR 7mm/h,CRP 2.7mg/L,病例二,肝炎，右肺实变，右胸腔积液支气管镜做细菌、TB、真菌，血培养结果均阴性8月20日. 痰涂片：在中性
8、粒细胞内可见革兰阳性球菌少量. 痰培养：光滑念珠菌. 治疗：特治星+万古霉素. PCT 7.9ng/ml,PCT(ng/ml)变化情况,WBC内可见革兰阳性球菌+光滑念珠菌 不能脱机,8月26日体温：38，不能脱呼吸机WBC：15.0109/L8月27日：会诊COPD?非典病原体？PCP？真菌？抗菌药物？检查：G试验,PCT(ng/ml)变化情况,WBC内可见革兰阳性球菌+光滑念珠菌 不能脱机,G试验（pg/ml）变化情况,体温的变化情况,WBC（109/L）的变化情况,G+GM,G试验与GM试验，为临床增加了侵袭性真菌感染的诊断手段，但不能完全依赖结合患者临床情况综合分析注意分析假阳性、假阴性影响因素注重动态监测，一次检测并不绝对涂片、培养、药敏仍是最基本的真菌学监测手段，实验室和临床均不可忽视,
