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1、采用HPLC外标法测定栀子中栀子苷的含量,仪器与试剂Aglient 1100 series HPLC仪(包括VWD检测器、四元恒流泵、在线脱气机、手动进样器)，美国安捷伦公司；SB3200超声波清洗器，宁波新芝生物科技公司。栀子苷对照品：中国药品生物制品检定所，供含量测定用；甲醇、乙腈为色谱纯，Merck公司；栀子药材；其他试剂均为分析纯。,实验步骤,配制溶液(1)流动相的配制。甲醇-05冰乙酸水(1：1，VV)，减压过滤并超声波脱气。(2)栀子苷对照品溶液的配制。称取100 mg栀子苷对照品，精密称定质量，以甲醇溶解，转移至2mL容量瓶巾(浓度为04 gL)，甲醇定容，分别精密移取01，05
2、，10，25，50 mL于100 m1容量瓶中，以流动相溶液定容，得浓度为0004，002，004，01，02 gL的栀子苷对照品溶液。(3)栀子供试品溶液的配制。取本品粉末01 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理20 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。平行处理3份。,测定,(1)安装C18反相柱，按仪器操作说明依次打开色谱仪各单元的电源。(2)色谱条件。C18一ODS色谱柱(53um，46 mm250 mm)；流动相比例：甲醇-05冰乙酸水(1：1)；流动相流速：10 mLmin；检测波长：238 nm。(3)换卜流
3、动相，待基线稳定后，采用进样器依次吸取浓度分别为0004，002，O04，01，02，04 gL的栀子苷对照品溶液各10仙L进样，待组分色谱峰出完后，按“停止”键停止分析。记录栀子苷色谱峰面积(保留时间、峰面积)，以栀子苷进样浓度(gL)为横坐标，色谱峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，进行回归分析。(4)采用进样器吸取栀子样品溶液10L，进样，通过保留时间确定栀子苷色谱峰的位置，记录栀子苷色谱峰面积(保留时间、峰面积)，并计算栀子药材中栀子苷的含量。,结果,实验结果,实验结果,实验结果,栀子药材中栀子苷的含量测定采用进样器吸取栀子样品溶液10“L，进样，记录栀子苷色谱峰面积(保留时间、峰面积)，
4、并计算栀子药材中栀子苷的含量。实验结果表明，栀子药材中栀子苷的含量为301,采用HPLC内标法测定待测溶液中扑热息痛和阿司匹林的含量,仪器与试剂Aglient l 100 series HPLC(VWD检测器、四元恒流泵、在线脱气机、手动进样器)，美国安捷伦公司；SB3200超声波清洗器，宁波新芝生物科技公司。扑热息痛(CP，含量98)，国药集团化学试剂有限公司；阿司匹林(CP，含量98)，国药集团化学试剂有限公司；咖啡因(CP，含量98)，ALFAAESAR，A JOHNSON MATTHEY COMPANY；甲醇、乙腈为色谱纯，Merck公司。,实验步骤,配制溶液(1)流动相的配制。乙腈一
5、01磷酸水(20：80，VV)，减压过滤并超声波脱气。(2)对照品溶液的配制。分别称取40 mg扑热息痛和50 mg阿司匹林，精密称定质量，于10 mL容量瓶中，加少量甲醇超声溶解，甲醇定容，即得40 gL的扑热息痛、50 gL的阿司匹林的混合对照品溶液A。称取50 mg的咖啡因，精密称定质量，于10 mL容量瓶中，加少量甲醇超声溶解，甲醇定容，即得50 gL的咖啡因内标溶液B。分别精密移取01，05，10，25，50 mL的混合对照品溶液A和10 mL的咖啡因内标溶液B于250 mL容量瓶中，溶解，混匀，以甲醇定容，即得浓度分别为0016，008，016，04，08 gL扑热息痛和002，0
6、10，020，050，10 gL阿司匹林、内标物咖啡因浓度为02 gL的5种混合对照品溶液。(3)供试品溶液的配制。精密移取待测样品溶液5 mL和10 mL的B于25 mL的容量瓶中，溶解，混匀，以甲醇定容，并平行处理3份。,测定,(1)安装C18。反相柱，按仪器操作说明依次打开色谱仪各单元的电源。(2)色谱条件：C18一ODS色谱柱(5um，46 mm250 mm)；流动相比例：乙腈一01磷酸水(20：80，VV)；流动相流速：10 mLmin；检测波长：273 nm。(3)换上流动相，待基线稳定后，采用进样器依次吸取浓度分别为0016、008、016、04、08 gL扑热息痛和002、01
7、0、020、050、10 gL阿司匹林、内标物咖啡因浓度为02 gL的5种混合对照品溶液各10uL进样，待组分色谱峰出完后，按“停止”键停止分析。记录各色谱峰面积(保留时间、峰面积)，以对照品峰面积与内标物峰面积之比为纵坐标(y)，以浓度为横坐标(x)，绘制标准曲线，进行回归分析，求扑热息痛和阿司匹林的线性方程。(4)采用进样器吸取供试品溶液10uL，进样，通过保留时间确定扑热息痛、阿司匹林、咖啡因色谱峰的位置，记录扑热息痛、阿司匹林、咖啡因色谱峰面积(保留时间、峰面积)，并计算待测样品溶液中扑热息痛、阿司匹林的含量。,实验结果,实验结果,实验结果,未知溶液中阿司匹林和扑热息痛的浓度测定 采用进样器吸取供试品溶液10uL，进样，记录阿司匹林、咖啡因和扑热息痛色谱峰面积(保留时间、峰面积)，计算阿司匹林和扑热息痛对照品峰面积与内标物咖啡因峰面积之比，并计算未知溶液中阿司匹林和扑热息痛的浓度，结果见表5，6,
