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1、免疫学应用,湘潭职业技术学院检验教研室邓阳勇,免疫学应用湘潭职业技术学院,第一节 免疫学诊断,一、抗原抗体的检测二、淋巴细胞的检测,第一节 免疫学诊断一、抗原抗体的检测,一、抗原抗体的检测,原理： Ag与相应Ab在体内与体外可发生特异性结合检测原则： 1. 已知Ag检测未知Ab 2. 已知Ab检测未知Ag,一、抗原抗体的检测原理：,细菌学诊断,标本采集时应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。根据致病菌在不同病期的体内分布和排出部位，采取不同标本。应在使用抗菌药物前采集标本，否则在培养时应加入拮抗剂。尽可能采集病变明显部位的材料。标本必须新鲜，采集后尽快送检。送检过程中要采取适当的保存方式。,标本采
2、集与送检原则,细菌学诊断标本采集时应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。标,致病菌的检验程序,致病菌的检验程序标本生化试验血清学试验动物试验药敏试验直接涂,人体受致病菌感染后，其免疫系统被刺激后发生免疫应答而产生特异性抗体。抗体的量常随感染过程而增多，表现为效价（滴度）的升高。因此，用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。一般采取病人的血清进行试验，故称为血清学诊断(serological diagnosis)。血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标本，当后者的抗体效价比前者升高大于等于4倍时方有意义。常用方法：直接凝集试验
3、、乳胶 凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、ELISA。,血清学诊断,人体受致病菌感染后，其免疫系统被刺激后发生免疫应答而产生特异,体外抗原抗体反应,体外抗原抗体反应,抗原抗体反应,1、抗原抗体的结合与析出2、抗原抗体反应的特点3、抗原抗体反应的影响因素,抗原抗体反应1、抗原抗体的结合与析出,引起抗原抗体结合的作用力,1、电荷引力（库仑引力）2、电子云引力（Van der Waals力）3、氢键结合力4、疏水作用力,引起抗原抗体结合的作用力1、电荷引力（库仑引力）,抗原抗体结合物析出的原因,析出,电解质,抗原抗体结合物析出的原因析出+ +,抗原抗体反应的特点,1、特异性2、适合比例性3
4、、可逆性,抗原抗体反应的特点1、特异性,网格学说（lattice theory）,抗体过剩,抗原过剩,抗体抗体比例合适,网格学说（lattice theory）抗体过剩抗原过剩抗体,可逆性,K（亲和常数）=,Ag+Ab,Ag Ab,可逆性K（亲和常数）=Ag+AbAg Ab,抗原抗体反应的影响因素,1、电解质2、酸碱度（pH值6-8）3、温度（37-42。C）,抗原抗体反应的影响因素1、电解质,经典的血清学反应,经典的血清学反应,抗原或抗体的检测方法,类型 抗原 抗体 辅助物 敏感度（ g抗体氮）凝集反应 颗粒性 凝集素 0.01沉淀反应 可溶性 沉淀素 5-10补体溶血反应 红细胞 溶血素
5、补体 0.001-0.3 G-细菌 溶菌素 补体 （同上）补体结合反应 固定补体抗体 补体 SRBC 溶血素 0.1 中和反应 外毒素 抗毒素 靶细胞 0.01 病毒 中和抗体 靶细胞 （同上）,抗原或抗体的检测方法类型,凝集反应,凝集反应,直接凝集反应 玻片法：ABO血型鉴定试管法：肥达试验,颗粒性抗原,抗体（凝集素）,直接凝集反应颗粒性抗原抗体（凝集素）,正向间接凝集反应如：类风湿因子的检测,可溶性抗原,载体颗粒,抗体（凝集素）,正向间接凝集反应可溶性抗原载体颗粒抗体（凝集素）,反向间接凝集反应,抗体,可溶性抗原,载体颗粒,反向间接凝集反应抗体可溶性抗原载体颗粒,间接凝集抑制反应如妊娠诊断
6、试验检测HCG,凝集,凝集抑制,待检样品,待检样品,间接凝集抑制反应凝集凝集抑制待检样品待检样品,沉淀反应,沉淀反应,液相内沉淀反应,絮状沉淀反应,环状沉淀反应如法医学血迹鉴定,+,+,抗血清,抗原,抗原,抗体,液相内沉淀反应絮状沉淀反应环状沉淀反应+抗血清抗原抗原,凝胶内沉淀反应,免疫扩散技术,免疫电泳技术,单向扩散试验,双向扩散试验,火箭电泳,对流电泳,免疫电泳,凝胶内沉淀反应免疫扩散技术免疫电泳技术单向扩散试验双向扩散试,免疫标记技术,免疫标记技术,主要的免疫标记物,类别 标记物 用途荧光素 FITC、RB200、TRITC 免疫组化 镧系元素螯合物 免疫分析测定放射性核素 3H、14C
7、、32P、57Gr 免疫分析测定 125I、131I酶 HRP、AP 免疫组化 免疫分析测定化学发光物 Luminol、lucigenin 免疫分析测定金属颗粒 胶体金、铁蛋白 免疫组化 免疫分析测定,主要的免疫标记物类别,标记免疫技术的分类,一、按测定用途分类：1、免疫组化技术2、免疫测定技术二、按标记物分类：1、酶免疫技术2、荧光免疫技术3、放射免疫技术4、发光免疫技术5、金免疫技术,标记免疫技术的分类一、按测定用途分类：,免疫荧光技术,免疫荧光技术,直接法,间接法,补体法,双标记法,直接法间接法补体法双标记法,放射免疫分析,放射免疫分析,结合相,游离相,结合相游离相,酶联免疫吸附试验,E
8、LISA,酶联免疫吸附试验ELISA,间接法,间接法,夹心法,夹心法,竞争法,竞争法,二、免疫细胞检测技术,1、细胞表面标志检测2、细胞功能检测3、细胞因子检测,二、免疫细胞检测技术1、细胞表面标志检测,表面标志检测,表面标志检测,常用的免疫细胞表面标志检测技术,一、免疫标记检测1、荧光抗体法2、酶免疫检测法3、免疫金银染色法二、补体依赖的细胞毒试验（CDC）三、E花环形成试验,常用的免疫细胞表面标志检测技术一、免疫标记检测,SmIg的荧光抗体检测法,SmIg的荧光抗体检测法,SmIg的酶免疫检测法,SmIg的酶免疫检测法,补体依赖的细胞毒试验（CDC）,染料,补体,补体依赖的细胞毒试验（CD
9、C）染料补体,E-花环,T细胞,B细胞,花环形成细胞,绵羊红细胞,E-花环T细胞B细胞花环形成细胞绵羊红细胞,细胞功能检测,细胞功能检测,一、转化、增殖试验1、淋巴细胞转化试验2、混合淋巴细胞培养二、细胞毒检测1、T细胞介导的细胞毒试验2、NK活性测定3、ADCC作用测定,常用的免疫细胞功能检测技术,一、转化、增殖试验常用的免疫细胞功能检测技术,放射性测定,3H-TdR,丝裂原（抗原）刺激,淋巴细胞转化试验原理示意,放射性测定3H-TdR丝裂原（抗原）刺激淋巴细胞转化试验原理,放射性测定,细胞毒试验原理示意,靶细胞,效应细胞,分离上清,放射性测定细胞毒试验原理示意靶细胞效应细胞分离上清,细胞因
10、子检测,细胞因子检测,可检测的细胞因子,白细胞介素（Interleukin） IL-1、IL-2、 IL-18干扰素（Interferon） IFN-、IFN-、IFN-肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor） TNF- 、 TNF- 集落刺激因子（Colony-stimulating factor） M-CSF、G-CSF转化生长因子（Transforming growth factor） TGF- 趋化因子（Chemokine） IL-8、GROs、MCP-1生长因子（Growth factor） EGF、FGF、IGF、PDGF,可检测的细胞因子白细胞介素（Interl
11、eukin） I,细胞因子检测的特点,1、免疫原性较弱2、样品含量低3、样品具有时效性4、生物效应特异性差,细胞因子检测的特点1、免疫原性较弱,细胞因子检测的方法,1、免疫标记技术检测抗原性测定2、细胞生物学方法检测生物活性测定3、分子生物学技术检测mRNA表达测定,细胞因子检测的方法1、免疫标记技术检测抗原性测定,特异性免疫获得方式： 自然免疫、人工免疫自然被动免疫：如胎儿从母体获得IgG 婴儿从母体获得IgM自然自动免疫：感染病原体后获得免疫力人工自动免疫: 接种类毒素、疫苗等人工被动免疫：注射抗毒素、丙种球蛋白等,第二节 免疫预防,第二节 免疫预防,思考题：1.你知道注射“乙肝疫苗、卡介
12、苗、白白破三联疫苗”的目的是什么？机制？属于何种免疫？2.你知道注射“丙球、胎盘球蛋白、抗毒素、IL-2、IFN”的目的是什么？机制？属于何种免疫？3.注射疫苗和注射丙球等制剂获得免疫力的方式各有什么特点？4请你举一个实例说明何时使用疫苗、何时使用丙球等制剂？理由及注意事项。,思考题：,人工免疫,定义：根据特异性免疫应答的原理，采用人工方法将Ag/Ab制成各种制剂，接种于人体，使其产生/获得特异性免疫力，达到预防某些疾病的目的。分类： 1、人工主动免疫 用疫苗或类毒素等抗原接种机体，使之产生特异免疫，从而预防感染的措施。 2、人工被动免疫 用抗体或细胞因子等制剂，使之获得特异免疫，以治疗或紧急
13、预 防感染的措施。,人工免疫定义：根据特异性免疫应答的原理，采用人工方法将Ag/,一、 人工主动免疫 (artificial active immunity)：,定义： 人工主动免疫将疫苗(vaccine)或类毒素接种于人体，使机体产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施，主要用于预防。,一、 人工主动免疫 (artificial,人工主动免疫生物制剂：,灭活疫苗（死疫苗）：选用免疫原性强的细菌，经人工大量培养后，用理化方法杀死而成。减毒活疫苗：用减毒或无毒力的活病原体制成。类毒素：细菌外毒素经0.3%-0.4%甲醛液作用3-4周后，毒性消失但仍保持免疫原性。亚单位疫苗：根据细菌抗原分析，查
14、明不同致病菌的主要保护性免疫原存在的组分，然后将之制成的疫苗。DNA重组疫苗：通过DNA重组技术制备所需的疫苗。核酸疫苗：或称DNA疫苗、基因疫苗，是将能编码引起保护性免疫应答的病原体免疫原基因片段和质粒载体直接注射入宿主体以表达目的免疫原，进而诱导出体液和细胞免疫的新型疫苗。治疗性疫苗,人工主动免疫生物制剂：灭活疫苗（死疫苗）：选用免疫原性强的细,1、疫苗 死疫苗与活疫苗的比较,1、疫苗 死疫苗与活疫苗的比较种类死疫苗活,2、类毒素（接种2次，吸收缓慢，间隔4-6周）外毒素 0.3-0.4%甲醛 类毒素 如：百-白-破精致吸附类毒素 3、新型疫苗 1）亚单位疫苗：提取有效免疫原成分。 (减少
15、不良反应，排除致癌的可能性） 如HA、NA，HBSAg,2、类毒素（接种2次，吸收缓慢，间隔4-6周）,2）合成肽疫苗：人工合成抗原肽。 （无需培养微生物，可大量生产，无致 癌、返祖的危险性） 3）基因工程疫苗图示：编码免疫原基因载体体内 酵母菌、大肠杆菌（体外培养）如：重组抗原疫苗、重组载体疫苗、DNA疫苗、 转基因植物疫苗 等,2）合成肽疫苗：人工合成抗原肽。,人工主动免疫注意事项,接种对象：凡免疫力差、与病原体接触机会多、疾病危害大、流行地区易感者。接种剂量、次数和间隔时间（计划免疫程序表）接种途径：皮内、皮下、吸入、口服接种后反应：24h内局部红肿、疼痛、淋巴结大；全身发热、头痛、恶心
16、，数天恢复。禁忌症：高热、急性传染病、严重心血管病、自身免疫病、免疫缺陷病。,人工主动免疫注意事项接种对象：凡免疫力差、与病原体接触机会多,免疫学应用课件,二、 人工被动免疫 (artificial passtive immunity),人工被动免疫定义： 注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白，或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻获得特异性免疫，因而作用及时。但这些免疫物质不是病人自己产生的，故维持时间短。主要用于治疗或紧急预防。,二、 人工被动免疫 (artif,人工被动免疫生物制品：抗毒素(antitoxin)：外/类毒素马Ab丙种球蛋白：正常人血清或健康产妇胎盘中提取人特异性Ig：
17、1. 含高效价特异性抗体且超敏反应发生率低 2. 来源恢复期病人，含高效价特异性抗体供血者血浆 接种疫苗/类毒素的免疫者血浆。,人工被动免疫生物制品：,人工被动免疫注意事项：注意防止超敏反应早期和足量不滥用丙球应用范围：易感人群、患者,人工被动免疫注意事项：,人工主动免疫与人工被动免疫的区别,区别点,人工主动免疫与人工被动免疫的区别区别要点人工主动免疫人工被动,第三节 免疫治疗,概念： 根据免疫学原理，应用物理、化学和生物学的方法增强或抑制机体的免疫机能，人为地纠正免疫异常状态，达到治疗的目的的措施。,第三节 免疫治疗 概念：,分类（作用机制）：,1、 免疫增强疗法 免疫抑制疗法 2、 特异性
18、免疫治疗 非特异性免疫治疗 3、主动免疫治疗：主动增强，“疫苗”，直接作用 被动免疫治疗：被动增强，抗体、免疫效应 细胞、小分子免疫肽， 间接作用，过继免疫,分类（作用机制）：,一 抗体为基础的免疫治疗二 抗原为基础的免疫治疗三 细胞因子及其拮抗剂为基础的免疫治疗四 细胞为基础的免疫治疗五 免疫调节剂治疗六 免疫重建,一 抗体为基础的免疫治疗,一、特异性被动免疫治疗 （抗体为基础的免疫治疗）,定义：输入特异性免疫效应物质，使机体立即 获得某种特定的免疫力，以达到治疗目的。特点：见效快，维持时间短作用：紧急预防和治疗传染病、抗肿瘤和抗移植 物排斥反应。 如：破伤风、白喉抗毒素，丙种球蛋白 抗病毒
19、血清、抗淋巴细胞丙种球蛋白 肿瘤特异性McAb（免疫导向疗法）,一、特异性被动免疫治疗 （抗体为基础的免疫治疗,二、特异性主动免疫治疗 （抗原为基础的免疫治疗）,定义：利用抗原性疫苗对机体进行免疫接种， 诱导产生特异性免疫应答或免疫耐受， 达到治疗目的。特点：见效慢，维持时间长作用：预防传染病、抗肿瘤。 如：卡介苗、乙肝V多肽疫苗、 流感V亚单位疫苗、肿瘤疫苗,二、特异性主动免疫治疗 （抗原为基础的免疫,三、非特异性免疫治疗（细胞因子及其拮抗剂为基础的免疫治疗）,定义：采用非特异性免疫调节剂（如细胞因子及其拮抗剂）来调节机体免疫功能失衡的状况，以达到治疗或辅助治疗的目的。BRM：（生物应答调节
20、剂） 调节机体免疫功能，抵抗病原微生物或 癌细胞的侵袭。,三、非特异性免疫治疗（细胞因子及其拮抗剂为基础的免疫治疗）,免疫学应用课件,四、过继性细胞免疫治疗 （细胞为基础的免疫治疗）,定义：将自体或同种异体的免疫细胞，经体外激活诱导增殖后输给患者，使其获得免疫效应细胞，在体内发挥作用，达到治疗疾病的作用。（一）活化的免疫细胞（供者/自身） 淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK，Lymphokine activated killercells） 肿瘤浸润淋巴细胞（TIL，Tumor infiltrating lymphocyte）,四、过继性细胞免疫治疗 （细胞为基础的免疫治疗,（二）免疫重建,定义：
21、将免疫功能正常个体的造血干细胞或淋 巴干细胞，移植给免疫缺陷个体，使后 者的造血能力、免疫功能全部或部分得 到恢复。方法：骨髓移植、脐血干细胞移植作用：治疗免疫缺陷病、白血病、再障,（二）免疫重建定义：将免疫功能正常个体的造血干细胞或淋,（一）免疫增强剂肿瘤、免缺1、免疫因子： 细胞因子、免疫核糖核酸、胸腺肽2、 化学药物： 左旋咪唑TNK，西咪替丁Ts3、微生物制剂： BCG、短小棒状杆菌MCK4、 多糖类以及中草药：灵芝、香菇等,五、免疫调节剂治疗,（一）免疫增强剂肿瘤、免缺五、免疫调节剂治疗,二、免疫抑制疗法,定义：用人工方法减弱或抑制对机体不利的免 疫应答，用于移植排斥反应和自免。方法：免疫抑制剂、放射线照射等 免疫抑制剂1、 细胞毒药物：环磷酰胺（CTX）、硫唑嘌呤2、 激素及抗淋巴细胞抗体影响抗原识别、处理、递呈3、 真菌代谢产物：环孢素A(CsA)、FK506 影响细胞因子合成4、 中药：雷公藤多苷,二、免疫抑制疗法定义：用人工方法减弱或抑制对机体不利的免,课后小结,列举常用的抗原抗体检测方法，说明其用途解释E花环实验、淋巴细胞转化实验，说明其意义解释疫苗、灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、类毒素、抗毒素的概念比较死疫苗与活疫苗的区别比较人工自动免疫与人工被动免疫的区别列举我国儿童计划免疫疫苗,课后小结列举常用的抗原抗体检测方法，说明其用途,
